β-乳球蛋白IgG抗原決定簇的識(shí)別

叢艷君， 任發(fā)政， 云戰(zhàn)友

(1. 北京工商大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院, 北京 100048; 2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083; 3. 內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司， 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010080)

乳及乳制品是FAO/WHO認(rèn)定的導(dǎo)致人類食物過(guò)敏的8大類食品之一，β-乳球蛋白是引起牛乳過(guò)敏的主要過(guò)敏原[1-2]. 食物過(guò)敏反應(yīng)的免疫學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)是過(guò)敏原抗原決定簇(作用表位)的存在，即過(guò)敏原參與結(jié)合抗體的組成部分[3]. 牛乳過(guò)敏原的表位是備受關(guān)注的研究熱點(diǎn)之一，研究成果可以指導(dǎo)無(wú)過(guò)敏和低過(guò)敏的乳制品的開(kāi)發(fā).

食物過(guò)敏反應(yīng)一般是由免疫球蛋白IgE介導(dǎo)的，但是一些研究表明，免疫球蛋白IgG在牛奶過(guò)敏疾病中發(fā)揮重要的作用. IgG介導(dǎo)牛奶過(guò)敏的機(jī)制還不是很清楚，但是研究發(fā)現(xiàn)在一些持續(xù)性牛乳過(guò)敏患兒和成人患者血清中抗乳蛋白的IgG含量顯著高于正常水平[4-6].

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用固相合成肽的方法合成β-乳球蛋白多肽，以收集到的牛乳過(guò)敏患者血清中的IgG為探針，鑒定β-乳球蛋白IgG抗原決定簇，探討牛乳過(guò)敏機(jī)理.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

β-乳球蛋白多肽，實(shí)驗(yàn)室合成；鏈霉親和素(Streptavidin,SA)，北京博奧森生物技術(shù)有限公司；HRP標(biāo)記的兔抗人IgG(二抗)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，美國(guó)Sigma公司；96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板，美國(guó)Costar公司.

1.2 儀器與設(shè)備

BIO-RAD550型酶標(biāo)儀，BIO-RAD公司；PSH500A生化培養(yǎng)箱，中國(guó)重慶銀河實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；F-32酸度劑，日本崛廠制作公司；Th-80D-2B型凍干機(jī)，北京天地精儀科技有限公司.

1.3 方法

1.3.1 多肽的合成[7]

采用Fmoc固相肽合成法，將C-末端氨……