低溫應激對淮南麻黃雞血清生化指標的影響

陳興勇，姜潤深，耿照玉

（安徽農業大學動物科技學院，安徽 合肥 230036）

隨著人們生活水平的提高，對雞肉、蛋品的質量要求也越來越高，山地雞、放養土雞也更加受到人們的青睞，在此養殖過程中，冬季冷應激的問題突現[1]。4～6周齡雛雞生長最佳環境溫度為（20±2）℃，而在秋冬季節，因氣候變冷雞舍內需要的溫度與外界氣溫相差懸殊，在氣溫急劇下降時，防寒保溫工作不到位，雛雞的神經內分泌系統、心血管系統、消化系統及免疫系統等會引發一系列生理生化變化，維持內環境的相對穩定，以提高機體的適應能力[2-4]。應激對動物機體影響廣泛，目前，國內外學者在關于冷應激對動物的神經系統、內分泌系統、激素水平、生產性能及生理生化指標的影響等方面的研究做了大量工作[5-6]。血液是動物機體主要的流動運輸系統，具有維持機體內環境穩定、物質交換等多種功能。血液生化指標能在一定程度上反映動物機體代謝及生理機能狀況[7]。近年來，應用生化檢測技術測定畜禽血液中特定酶的活性，探索其與畜禽生產性能間的關系，并將其作為早期選擇的參考指標，已在畜牧業生產以及品種選育中得到廣泛應用。由于低溫應激的反應機制十分復雜，到目前其確切的機制仍未得到闡明，但研究證明在冷應激過程中存在血清酶類的改變[8-10]。

淮南麻黃雞屬肉蛋兼用型品種，為安徽省優質地方良種雞之一，具有產蛋性能好、蛋品質佳，繁殖性能高，生長速度快，肉質優良等特點[11]。筆者對育雛期淮南麻黃雞進行急性和慢性冷應激處理，測定其血清酶活性，并對其變化規律及相關關系進行探討，旨在闡明冷應激對禽類生理機能的影響機制，為禽類冷應激相關疾病的預防和治療提供參考，并為皖北地區地方品種冬季育雛飼養提供指導。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試雞為4周齡健康淮南麻黃雞公雞。

1.2 試驗設計

將300只4周齡健康淮南麻黃雞公雞隨機分為3組，每組100只。對照組不進行應激處理，其余兩組分別于2℃和10℃環境溫度下暴露0.5、1、2、3、6、12、24、72 和 144 h，并在各時間點隨機取 6 只雞翅靜脈采集血樣2 mL。試驗過程中，各試驗組均自由采食和飲水。

1.3 血漿和血清的制備

采集的血樣于37℃水浴20 min后，4℃ 3 500 r/min離心8 min，收集血清樣品，分裝于1.5 mL離心管，－70℃凍存。血清樣品為無溶血血清。

1.4 檢測項目及方法

采用IFCC法測定丙氨酸氨基轉移酶（AL T/GPT）、γ-谷氨酸氨基轉移酶（γ-GT）及天門冬氨酸氨基轉移酶（AST/GOT）活性；酶偶聯法測肌酸激酶（CK）活力；乳酸基質速率法測乳酸脫氫酶（LDHL）活性。

1.5 試驗數據的分析與統計

應用SAS9.1軟件進行數據的統計與分析，采用單因素方差分析法。所測數據以平均值±SD表示。

2 結果與分析

2.1 極端低溫應激（2℃）下淮南麻黃雞血清酶的改變

由表1可以看出，淮南麻黃雞在低溫應激狀態下血清中各種酶的活性呈現出波動性變化，當低溫暴露0.5 h后，血清中ALT和AST均顯著下降，應激1 h后ALT再次上升至原來水平，AST水平也呈上升趨勢，但變化不明顯，至應激2 h后，二者水平極顯著上升，應激3 h后再次下降，應激時間達6～24 h時，血清中ALT與AST水平基本維持在正常水平，當應激3 d時，ALT與AST均下降至一極低水平，應激6 d時，ALT繼續維持在較低水平，但AST上升至與對照組相比變化不明顯的水平。γ-GT在急性應激時無顯著性變化，經慢性應激6 d后出現極顯著上升。LDH在急性應激1 h和2 h后出現明顯上升，應激3 h后與對照組相比急顯著上升，6 h后下降至與對照組差異不明顯的水平，12 h后再次上升至極顯著水平，24 h后LDH水平與12 h相比明顯下降，3 d后LDH水平與12 h和3 h相比差異極顯著，與2 h和1 h相比差異顯著。CK在急慢性應激過程中亦呈現出波動性變化，應激1 h與0.5 h相比差異顯著，應激2 h與0.5 h相比差異極顯著，與對照組相比差異顯著，應激3 h與2 h相比，CK水平下降顯著，6 h后上升至正常水平，12 hCK水平與0.5 h應激水平相比明顯上升，24 h應激組CK水平與12 h組相比顯著下降，與2 h組相比下降極顯著，經慢性應激3 d后，血清CK與12 h、6 h、2 h和1 h相比，下降極顯著，與3 h和對照組相比下降顯著，慢性應激6 d后血清CK與3 d相比顯著上升，與2 h相比顯著下降。

表1 2℃低溫應激下不同時間淮南麻黃雞血清酶活力檢測結果

2.2 中度低溫應激（10℃）下淮南麻黃雞血清酶的改變

表2為淮南麻黃雞在環境溫度為10℃下急慢性冷應激后血清酶水平的檢測結果。從表2可以看出，ALT和AST在急性應激時變化不明顯。急性應激6 h后ALT水平與應激2 h和1 h相比下降顯著；急性應激12 h后ALT上升至對照組水平；慢性應激3 d后ALT水平與24 h和0.5 h相比顯著上升，與6 h相比上升極顯著；慢性應激6 d后血清ALT水平與3 d相比極顯著下降，與12 h、2 h和1 h相比顯著下降。急性應激12 h后血清AST水平與6 h相比顯著上升，應激3 d后AST水平與6 h和0.5 h相比顯著上升；慢性應激6 d與3 d相比AST水平顯著下降。γ-GT水平在環境溫度為10℃下的急慢性應激過程中的變化無顯著性差異。與對照組比較，LDH水平經0.5 h急性應激后顯著上升，經1 h應激后極顯著升高，經12 h應激后顯著升高；經3 d慢性應激后，LDH水平與12 h和1 h比較顯著下降；經6 d慢性應激，LDH水平再次下降至極低水平，與12 h、1 h和0.5 h相比差異極顯著，與24 h、3 h、2 h和對照組比較差異顯著。CK在急性應激早期變化不顯著，當應激時間為12 h時，CK水平顯著上升并高于6 h和3 h組，24 h后又明顯下降；慢性應激3 d后，血清CK水平顯著高于24 h、6 h、3 h和 0.5 h組；慢性應激 6 d后，血清 CK與3 d組相比顯著下降。

表2 10℃低溫應激下不同時間淮南麻黃雞血清酶活力檢測結果

3 討論

動物在適應外界環境過程中，機體必然出現某些生理生化反應[12]。肝臟是動物機體含酶最豐富的臟器，酶蛋白含量約占肝臟總蛋白含量的2/3，當肝臟有實質性損害時血清某些酶活性可升高，如肝細胞變性壞死，分布在胞漿中的酶如丙氨酸轉氨酶（ALT）、天冬氨酸轉氨酶（AST）、γ-GT 及乳酸脫氫酶（LDH）等最易逸出，故血清中活性增高。從本實驗研究結果可知，極端低溫應激條件下，各應激時段淮南麻黃雞公雞血清中ALT、AST、γ-GT及LDH均表現出不同的變化規律，即在應激早期血清酶水平快速升高，至中期下降至與對照組接近的水平，慢性應激達3～6 d時，各血清酶水平再次升高。在中度冷應激條件下，淮南麻黃雞公雞血清中各酶水平變化較不明顯，只在慢性應激達3～6 d時檢測到血清酶水平的上升或下降。

CK正常分布于骨骼肌、心肌、腦、甲狀腺、肺組織、胃腸平滑肌中，以骨骼肌含量最高，其次為心肌，再次為腦和胃腸平滑肌。正常情況下，細胞外液的CK濃度是細胞內液的1/1 000～1/10 000。因此，血清中肌酸激酶升高一般提示含有CK的組織細胞的通透性增強或細胞的破壞，尤其是肌纖維的膜通透性異常或肌纖維損害或正在發生損害的可能性。Yan等[13]研究證明，初生雛雞在受到應激2 h后即可導致CK等血清酶迅速升高。本實驗研究發現，極低溫度應激下，淮南麻黃雞公雞血清中CK表現出不規律的顯著性改變，而低溫應激組只在應激時間較長時血清中的CK才發生升高或降低，并且均與對照組差異不明顯。

CK在體內主要促進磷酸肌酸轉化為肌酸和ATP，李士澤等[14]研究表明，雛雞在浸水應激后CK會持續性升高，反映了在冷應激后機體能量代謝的增強；ALT活性主要反映肝膽及心血管系統疾病，在體內ALT可催化丙氨酸與α-酮戊二酸的氨基轉換反應，生成丙酮酸和谷氨酸。LDH屬于氧化還原酶類，催化乳酸氧化成丙酮酸的產生，從而使乳酸水平升高，NAD為氫的受體；上述幾種生化指標的變化表明，雛雞在重度冷應激后機體為了抵御外界應激刺激，血液某些酶活性發生較大變化，從而使機體發揮調節能力，達到穩態調節。

本研究發現皖北淮南麻黃雞在冷應激時的體內各種酶發生有規律的變化，可作為快速鑒定家禽冷應激水平的方法。這對培育出耐寒、抗病、抗應激并具有較高的肉品、蛋品質量的家禽品種有重要意義。

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