二參湯對大鼠心肌缺血興奮性氨基酸損傷的保護作用

王亞平，周麗雅（.德惠市中醫院，吉林德惠33000；.長春中醫藥大學，吉林長春307）

二參湯對大鼠心肌缺血興奮性氨基酸損傷的保護作用

王亞平1，周麗雅2
（1.德惠市中醫院，吉林德惠133000；2.長春中醫藥大學，吉林長春130117）

目的利用垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血模型，觀察二參湯對大鼠心肌缺血的保護作用。方法將60只Wistar大鼠分為正常對照組，模型組，二參湯低、中、高劑量組，腸溶阿斯匹林組，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響及心肌組織病理變化。結果二參湯可以對抗垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血損傷，使心肌缺血大鼠的心電圖ST段異常升高數減少，二參湯可使血漿和心肌組織Glu、Asp含量降低，表明二參湯可防止EAA的升高。結論二參湯對大鼠心肌缺血有保護作用，其機制可能與抗脂質過氧化反應有關。

二參湯；心肌缺血；興奮性氨基酸；大鼠

本實驗通過中藥二參湯對大鼠心肌缺血抗脂質過氧化損傷的保護作用的研究，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織谷氨酸（GLU）及天冬氨酸（Asp）的影響及心肌組織病理變化以驗證二參湯對大鼠心肌缺血的保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與藥物Wistar大白鼠60只，體質量（250～300）g，8～10周齡，雄性，購自長春開發區實驗動物中心。二參湯（黃芪、黨參、丹參、川芎、降香、麥冬、五味子、木香、薤白、三七、水蛭、甘草）、垂體后葉素、谷氨酸（GLU）、天冬氨酸（Asp）測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗方法將大鼠隨機分為6組，每組10只：正常對照組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；模型組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；二參湯低、中、高劑量組，用濃度分別為50，200，400 g／L的二參湯10 mL／kg灌胃；腸溶阿斯匹林組，用濃度為3.33 g／L的腸溶阿斯匹林10mL／kg灌胃。連續灌胃14 d后，除正常對照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素（Pit）20 U／kg腹腔注射造成心肌缺血模型。各組在給與垂體后葉素前后均描記心電圖。24 h后全部大鼠用20%烏拉坦10mL／kg腹腔注射麻醉，進行指標測定。

1.3 指標測定（1）麻醉后，將大鼠仰臥位固定，四肢皮下插入針狀電極及胸前電極，每只大鼠先做心電圖。各組動物均記錄正常Ⅱ導聯，測定用垂體后葉素ST段異常偏移總毫伏數（∑ST）、每組出現ST段異常的動物數及ST偏移的平均值，作為判斷心肌缺血程度和藥物療效的指標。（2）模型成功后，剖腹，自腹主動脈無菌取血，在4℃條件下3 000 r／min離心10min，分離血清置于－70℃冰箱待測。（3）模型成功后，大鼠于腹主動脈取血后立即冰面上快速取心肌組織，平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫斷成5份，取其2份放入2mL預冷4℃的生理鹽水中，用玻璃勻漿器制備心肌組織勻漿，鏡下觀察到細胞磨破，取10%勻漿上清加生理鹽水，按1∶9制成10%勻漿液，3 500 r／min離心15 min，取上清－70℃凍存作相關檢測。（4）大鼠處死后，取其余心肌組織進行病理學檢查。

1.4 統計學分析所有數據經SAS軟件包處理，數據以均數±標準差（ˉx±s）表示，所得數據作方差齊性試驗后作配對t檢驗，P＜0.05有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 對心肌缺血大鼠心電圖ST段偏移的影響見表1。

表1 對心肌缺血大鼠Ⅱ導聯ST偏移的影響（±s，n＝10）

表1 對心肌缺血大鼠Ⅱ導聯ST偏移的影響（±s，n＝10）

注：與正常對照組比較，△P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別∑ST／mV ST 段異常偏移n mV正常對照組0.08 6 0.013±0.020模型組1.75 10 0.228±0.150△腸溶阿斯匹林組1.67 9 0.216±0.140二參湯大劑量組0.15 4 0.021±0.012＃＃二參湯中劑量組0.28 5 0.056±0.080＃二參湯小劑量組0.37 7 0.078±0.040＃

2.2 對心肌缺血大鼠血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響見表2。

表2 對心肌缺血大鼠血清及心肌組織興奮性氨基酸的影響（ˉx±s，n＝10）（μmol／g）

2.3 心肌組織病理學觀察心肌組織切片經HE染色，參照Rona等［1］方法對心肌病理損傷程度進行分級分析。正常對照組心肌細胞未見明顯變性與壞死，為0度；模型組見心肌組織呈灶性壞死，偶見灶間相互連接，部分心肌細胞收縮帶形成，組織病理損傷程度為Ⅱ～Ⅲ度，病理改變多位于心尖部心內膜下層；二參湯各組也可見心肌壞死灶的形成，但多為點片狀壞死，病理損傷程度多為Ⅰ度。

3 討論

興奮性氨基酸主要是指谷氨酸（Glutamate，Glu）和天冬氨酸（Asparate，Asp）。心肌缺血時大量釋放的EAA尤其是Glu對心肌的損傷起關鍵作用。因缺血后ATP降解，依賴能量而重吸收Glu的機制衰竭，影響Glu攝取功能，甚至出現Glu向細胞外液轉移，如此惡性循環，突觸間隙持續高濃度的Glu就引起興奮性神經毒性［2］。

本研究表明，模型組Glu和Asp含量明顯增加，表明EAA的興奮毒性參與了心肌缺血細胞損傷和遲發性神經損傷的發生過程。在研究中，給予二參湯可使血漿和心肌組織Glu、Asp含量降低，表明二參湯可防止EAA的升高［3-4］。

［1］Rosa G.An infact-likemyocardial lesion and other toxicmanifestations produced by isoproterend in the rat［J］.Arch Pathol LabMed，1959，67：43.

［2］陳維洲，芮耀誠.腦血管疾病基礎與臨床研究［M］.濟南：山東科技出版社，1993：12-25.

［3］Muir KW，Lees KR.Clinica experience with excitatory aMino acid antagonist drugs［J］.Stroke，1995，26（3）：5026.

［4］Rogawski MA.The NMDA receptor，NMDA antagonists and epilepsy therapy［J］.Drugs，1992，44（3）：279.

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