HPLC測定不同商品急性子中槲皮素和山奈酚的含量

佟苗苗，翟延君*，王添敏

（遼寧中醫藥大學，遼寧大連116600）

急性子為鳳仙花科植物鳳仙花Impatiens balsamina L.的干燥成熟種子，始載于《救荒本草》。具有破血軟堅、消積的功效，用于癥瘕痞塊、經閉、噎膈［1］。《中國藥典》僅有性狀鑒別內容，缺少內在質量控制方法。急性子中含黃酮類化合物［2］，且黃酮類成分化學性質穩定、藥理作用明確。因此本研究以槲皮素和山奈酚為含量測定指標，對10個不同地區的商品藥材進行含量測定，為急性子的內在質量控制提供參考。

1 材料

Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫科技），紫外檢測器G2170BA（安捷倫科技），KH-300B型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司），ALC-110.4萬分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司），CP225D十萬分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司），DZKW-D-2型水浴鍋（北京市永光明醫療儀器廠）。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。槲皮素 （批號 00081-200406），山奈酚（批號110861-200808）對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供。急性子商品來源于吉林通化、遼寧丹東、大連、鞍山、新民、河北保定、邯鄲、天津、山東煙臺、四川成都。經本校中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為 Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相甲醇（A）-0.3%磷酸水（B），梯度洗脫，0～12 min，從45%A線性變化至50%A。檢測波長為360 nm；流速為1.0 mL／min；柱溫為25℃。理論塔板數按槲皮素計算應不低于3000。采用此色譜條件，供試品及對照品色譜分離度良好。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定槲皮素和山奈酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含槲皮素0.046 mg，山奈酚 0.001 3 mg。

2.3 供試品溶液的制備 取急性子藥材粉末1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-40%鹽酸（5：1）20 mL，超聲提取40 min，放冷，稱重，加甲醇補足重量，濾過，續濾液經0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 線性關系考察 分別吸取槲皮素、山奈酚混合對照品溶液 7，9，11，13，15，17，19μL 注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，槲皮素、山奈酚樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程：槲皮素：Y ＝ 2 187.7X+106.64，r＝0.999 9，線性范圍：0.322～ 0.874μg 山奈酚：Y ＝ 168.47X-45.532，r＝0.999 6，線性范圍：0.009～0.025μg。

2.5 精密度試驗 精密稱取河北邯鄲急性子藥材粉末1 g，依2.3項所述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，重復進樣5次，測定槲皮素、山奈酚的峰面積，計算RSD分別為0.31%和1.53%，結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 精密稱取河北邯鄲急性子藥材粉末1 g，依2.3項所述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，按 0，2，4，6，8 h間隔進行測定，結果槲皮素峰面積的RSD為0.86%，山柰酚峰面積的RSD為2.66%，結果表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取河北邯鄲急性子藥材粉末6份，依2.3項所述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，結果槲皮素和山奈酚平均含量分別為0.051 8%，0.001 0%；RSD 分別為 1.05%，2.17%，結果表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的河北邯鄲急性子藥材粉末（0.0322%）1 g，精密加入1 mL的槲皮素、山奈酚混合對照品溶液（0.5060 mg／mL、0.0105 mg／mL），按 2.3 項所述方法制備供試品溶液，依上述色譜條件進行含量測定并計算回收率，槲皮素平均回收率為99.6%，RSD為1.65%，山奈酚平均回收率為 99.0%，RSD為 1.45%。

2.9 樣品含量測定 精密稱取10個地區商品急性子藥材粉末各1 g，按2.3項所述方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液與對照品溶液各20μL，按上述色譜條件進行含量測定，測定峰面積，結果見表1。

表1不同地區商品中槲皮素、山奈酚含量測定結果

3 討論

本研究首先考察了甲醇-30%鹽酸（5：1）、甲醇-40%鹽酸（5：1）、甲醇-50%鹽酸（5：1）3 種水解溶劑。結果表明以甲醇-40%鹽酸（5：1）混合液作為水解溶劑時，所得樣品含量最高，故確定采用甲醇-40%鹽酸（5：1）混合液作為水解溶劑。又以甲醇-40%鹽酸（5：1）混合液為溶劑，比較了回流和超聲方法對提取率的影響，結果超聲提取率明顯高于回流。同時，還進一步比較了不同水解時間對提取效果的影響，結果顯示40 min即水解完全。

實驗結果表明，不同產地急性子被測組分中槲皮素的含量相對較高，山奈酚含量普遍偏低。而不同產地藥材中槲皮素含量差異較大。這可能與地理位置、生長環境等因素有關。本實驗采用HPLC法以槲皮素與山奈酚雙指標為對照，對全國10個不同地區的商品急性子進行了含量測定，建立了內在質量評價方法，實驗方法簡便、測定結果準確，且重復性好，可為急性子的品質評價提供依據。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典（一部）［S］.北京：人民衛生出版社，2010：247.

［2］鞠培俊，孔德云，李小波.鳳仙花化學成分及藥理作用研究進展［J］.沈陽藥科大學學報 2007，24（5）：320.