甲肝滅活疫苗生產中聚乙二醇殘留量測定

韓中山

(河北省唐山怡安生物工程有限公司 河北 唐山 063020)

甲肝滅活疫苗生產提純中需用聚乙二醇(PEG)去除中間產品、半成品中的雜蛋白質,但這些產品中也殘留了PEG。G現用紫外線分光光度法對PEG進行測定,以使其保持在安全的范圍。

1 材料與方法

1.1 主要材料及試劑 PEG6000,0.5mol/L高氯酸溶液,5%氯化鋇溶液,1mol/L碘溶液,100μg/mlPEG對照品。

1.2 主要儀器 SPECTROUV-VISAUTO紫外分光光度計Labomed,Inc,U.S.A,離心機。

1.3 檢測方法

1.3.1 供試品。取供試品適量,用水稀釋,使蛋白質不高于1%,即為供試品溶液。精密量取供試品 1.0mL,加入 0.5mol/L高氯酸溶液 5.0mL,混勻,室溫放置 15min,4000r/min,離心10min。取上清液 4mL,加入 5%氯化鋇溶液 1.0mL和 0.1mol/L碘溶液 0.5mL,混勻,室溫反應 15min,照紫外 -可見分光光度法在用 535nm處測定吸光度。同時以 1mL水代替供試品溶液,同法操作,即為空白對照。

1.3.2 標準曲線。精密量取 10、20、30、40、50μg/mLPEG對照品各 1.0mL,加入 0.5mol/L高氯酸溶液 5.0mL,混勻,自“室溫放置 15分鐘”起,同供試品方法操作。

以標準 PEG的濃度(X)為橫坐標,以相應濃度的吸收度(Y)為縱坐標作圖,將 X值、Y值輸入計算機,應用統計學軟件STA1(14)進行數據處理,得一標準曲線回歸方程,由回歸方程及樣品的稀釋倍數計算出樣品的 PEG殘留量。

2 結果

2.1 標準曲線(99%可信限范圍) 取不同濃度的 PEG對照品,測定吸光值,重復 3次,相關系數在 0.9927～0.9993之間。表明 PEG濃度在 10～50μg/mL范圍內,PEG對照品溶液與吸收度具有很好的線性關系,見表 1。

表1 標準曲線回歸方程及相關系數

表2 6批甲肝滅活疫苗 PEG殘留量測定結果

2.2 6批甲肝滅活疫苗 PEG殘留量測定結果 應用該方法進行 6批疫苗 PEG殘留量測定,每批疫苗檢測 6次,結果 PEG殘留量均小于 10μg/mL,見表 2。

3 討論

通過 6批疫苗PEG殘留量測定的結果可以看出,PEG殘留量均小于 10μg/mL,說明甲肝滅活疫苗生產工藝可行,建議甲肝滅活疫苗殘留 PEG殘留量質量標準小于 10μg/mL。

通過討論及實驗分析結果說明,PEG殘留量測定方法用于甲肝滅活疫苗生產中測定殘留 PEG殘留量是可行的。