梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗臨床應用再評價

文愛清,孫繼德,黃衡柳,袁 玲,何 靜,陳方祥

(第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所:1.輸血科;2.檢驗科,重慶400042)

梅毒是由梅毒螺旋體(treponema pallidum TP)感染引起的一種慢性全身性以性傳播途徑為主的乙類傳染病。近年來,其發病率在我國呈明顯上升趨勢,已成為一個十分嚴重的社會和醫學問題[1-2]。梅毒的血清學檢查在梅毒的診斷中發揮著重要作用,已被衛生部列為輸血前、術前等常規必查項目。目前對梅毒血清學試驗的選擇一般采用TP-ELISA法等對其進行初篩,出現陽性者再用梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(Treponema pallidum particle assay,TPPA)、梅毒螺旋體血凝試驗(T reponema pallidum hemagglutination assay,TPHA)、熒光密螺旋體抗體吸收實驗(Fluorescent treponemal antibody absorption test,FTA-ABS)等方法做確認試驗。TPPA法是目前應用最廣泛的梅毒血清學確證試驗之一,但據報道TPPA法存在不確定結果和1%～2%生物學假陽性率[3],在老年群體中假陽性率甚至高達37.21%[4-6]。為此,特以FTA-ABS法為金標準,重新對TPPA法進行評價,現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 89份血清分別取自2007年1月至2008年12月大坪醫院門診及住院部各科均確診為梅毒的患者,其中男52例,女 37例;年齡 20～92歲,平均48.3歲。135例非梅毒患者(對照組)中男 62例,女73例;年齡25～89歲,平均47.1歲,其中系統性紅斑狼瘡(SLE)20例,類風濕性關節炎(RA)10例,妊娠26～30周孕婦11例,腫瘤9例,結核8例,冠心病15例,高血壓11例,糖尿病9例,腦血栓11例,肝硬化9例,健康獻血者20例。將對照組又分為老年組(≥60歲)65例和中青年組(＜60歲)70例。

1.2 試劑與儀器 TPPA法試劑由日本富士株式會社提供;FTA-ABS法試劑由德國歐蒙公司生產。熒光顯微鏡為日本OLYMPUS BX51。

1.3 檢測方法 收集研究對象血清,-70℃冰箱儲存備用,均嚴格按試劑盒說明書操作。

1.4 統計學方法 所有計數資料采用SPSS13.0統計軟件進行χ2檢驗,以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種方法檢測89例梅毒患者血清抗體結果比較 見表1。

2.2 兩種方法檢測135例非梅毒患者血清抗體結果比較 見表2。

2.3 兩種方法敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較TPPA法與FTA-ABS法比較敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值差異均無統計學意義(P＞0.05),見表3。

2.4 非梅毒患者不同年齡組兩種方法假陽性比較 在135例非梅毒患者(包括20例健康獻血者)中 TPPA法檢測梅毒 IgG抗體陽性12例,其中老年組10例,假陽性率高于中青年組,分別為15.38%、2.86%,也高于 FTA-ABS法,分別為 4.62%、1.43%,但差異無統計學意義(χ2=0.44,P=0.50),見表4。

表1 兩種方法檢測89例梅毒患者血清抗體結果比較〔n(%)〕

表2 兩種方法檢測135例非梅毒患者血清抗體結果比較(n)

表3 兩種方法敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值比較

表4 不同年齡組兩種方法假陽性比較〔n(%)〕

3 討 論

TPPA法基本原理是采用超聲裂解純化的梅毒螺旋體Nichols株為抗原,包被在人工載體明膠粒子上,該試驗省略了吸收劑,減少了生物因素的影響,提高了敏感性和特異性。主要用于篩檢陽性標本的確診,是近年來臨床常用的梅毒螺旋體確認實驗,也是被美國疾病預防控制中心(CDC)定為確診的方法之一。本研究結果顯示TPPA法敏感性、特異性分別為94.4%、91.1%,與 FTA-ABS法差異無統計學意義(P＞0.05),說明TPPA法具有較高的特異性和敏感性,而且其結果穩定、易判斷并可實現自動加樣,是一種比較好的梅毒血清學檢測確證方法。

TPPA法在工藝上進行了改良,相比TP初篩方法如TPELISA法等而言,非特異性凝集的發生較少見,但所謂的確認試驗,并非真正意義上的確認。作者在工作中也注意到有很多臨床無癥狀、主訴無發病史和疾病接觸史的老年人血清TPPA法梅毒抗體檢測陽性[1],這將干擾臨床診療工作,易造成誤診,甚至引起醫療糾紛。本研究結果也顯示TPPA法在老年組的假陽性率為15.38%,在非老年組的假陽性率為4.62%,說明年齡對TPPA法的檢測結果有一定影響,本研究結果與武建國[7]報道一致。導致此種現象的原因可能是老年人容易出現免疫功能異常,產生一些針對聯接用的清蛋白抗體或是一些異常蛋白質干擾了TPPA法的凝集反應;也可能是因為老年人常伴有心腦血管疾病、糖尿病、腫瘤及白血病等慢性疾病,產生交叉性梅毒抗體成分而發生交叉反應[8-9]。本組TPPA法12例假陽性患者中10例患有多年高血壓、糖尿病等,由此可見年齡與疾病因素是造成老年人梅毒抗體易發生假陽性的重要原因。因此在梅毒抗體檢測中了解出現假陽性的可能影響因素,對于減少工作中差錯事故的發生有極其重要的意義。

值得一提的是本研究采用的梅毒檢測的金標準為FTAABS法,由于該法是采用非致病性密螺旋體提取物作為吸收劑吸收待檢血清,排除了同屬抗原的交叉結合,保證了試驗結果的特異性;但是由于其試驗過程繁瑣,技術要求高,需要熒光顯微鏡等諸多因素影響,現只用于有爭議的標本確認,臨床常不開展此項檢測。少數情況下也有出現生物學假陽性的報道,本研究結果也證實了這一點(在135例非梅毒患者中仍有4例陽性)。所以作者認為,為能正確反應患者梅毒感染狀況,減少醫療糾紛的發生,保證醫療安全,從節約成本、提高試驗準確性和更好服務于臨床等多方面考慮,在進行梅毒血清學檢測時應選用其他方法(TP-IgG、TP-IgM和TPPA法等)篩選,當出現TPPA法陽性反應(尤其是老年人陽性)時,一些有條件的中大型醫院或研究所還應結合FTA-ABS法等方法加以確證,并綜合甲苯胺不加熱血清試驗(TRUST)進行療效觀察[10]。

[1]Lin C,Cohen M,陳祥生,等.中國梅毒流行狀況——血清流行病學系統綜述[R].深圳,2006.深圳:中國疾病預防控制中心性病控制中心,加利福尼亞大學舊金山分校醫學院,2006.

[2]Brown DL,Framk JE.Diagnosis and Management of Syphilis[J].American Family Physician,2003,68(2):283.

[3]孫慈惠,鄧紅櫻.梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗不確定結果相關因素分析[J].中國國境衛生檢疫雜志,2007,30(1):18.

[4]劉小玲.耄耋老人梅毒檢測為何陽性[J].實用醫技雜志,2007,14(11):1497.

[5]de Larra?naga G,Trombetta L,Wingeyer SP,et al.False positive reactions in confirmat ory tests for syphilis in presenceofantiphospholipid antibodies:misdiagnosis with prognostic and social consequences[J].Der matol Online J,2006,12(4):22.

[6]周美萍,石冬敏.13 168例普通住院患者梅毒血清學試驗結果分析[J].中國血液流變學雜志,2005,15(4):675.

[7]武建國.老年人抗梅毒螺旋體抗體假陽性率偏高[J].臨床檢驗雜志,2006,24(4):241.

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[10]吳詠梅,祖瑜.幾例梅毒螺旋體抗體不同檢測結果解釋及分析[J].重慶醫學,2004,33(8):1178.