TGF-β1、TβRⅡ及P38蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的意義

馮傳波,夏春咸,何治軍,邵 華,苗永昌

(蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬連云港醫(yī)院,江蘇連云港222002)

現(xiàn)代研究進(jìn)展表明,腫瘤是多基因變化引起細(xì)胞周期紊亂,細(xì)胞失控性生長(zhǎng)所導(dǎo)致的一類疾病。胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,它的病因相當(dāng)復(fù)雜,與多種因素有關(guān),其中相關(guān)分子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程具有重要意義。本研究通過對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β 1)、TGF-βⅡ型受體(Tβ RⅡ)和P38蛋白在胃癌中的表達(dá)情況進(jìn)行分析,以探討它們?cè)谖赴┌l(fā)生發(fā)展中的意義。

1 材料與方法

1.1 材料 60例胃癌標(biāo)本來(lái)源于連云港市第二人民醫(yī)院2006年1月至2008年8月手術(shù)患者,所有病例均經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí),其中男40例,女20例,年齡38～79歲,中位年齡64歲。按照組織學(xué)分級(jí)分為分化較好組36例(高分化+中分化組)、分化較差組24例(低分化組),按照癌細(xì)胞的浸潤(rùn)深度分為癌細(xì)胞侵及漿膜層及以外組42例,未侵及漿膜層組18例,按照有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組37例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組23例,按TNM分期可以分為Ⅰ期+Ⅱ期組17例,Ⅲ期+Ⅳ期組43例。15例胃腺瘤標(biāo)本均經(jīng)過病理學(xué)證實(shí)。正常胃組織取自切端胃黏膜,經(jīng)病理鏡檢證實(shí)無(wú)癌組織及癌前病變存在。

1.2 主要試劑和方法 兔抗人 TGF-β1、TβRⅡ、P38多克隆抗體購(gòu)于武漢博士德生物公司,SP試劑盒、DAB染色劑購(gòu)于上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法檢測(cè)轉(zhuǎn)化TGF-β1、TβRⅡ和 P38蛋白在60例胃癌組織、15例胃腺瘤和30例正常胃組織標(biāo)本中的不同表達(dá)情況。操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,陰性對(duì)照為PBS代替一抗的空白對(duì)照,陽(yáng)性對(duì)照為已知明確陽(yáng)性的乳腺癌組織。

1.3 染色結(jié)果判定 免疫組化結(jié)果通過雙盲法經(jīng)2位有經(jīng)驗(yàn)的病理科專家獨(dú)立評(píng)估。TGF-β 1、Tβ RⅡ蛋白主要分布于胞漿,P38蛋白表達(dá)主要分布于胞漿,部分分布于胞核。按細(xì)胞免疫組化染色深淺打分:無(wú)顯色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為 3分。高倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)視野中1 000個(gè)細(xì)胞,按陽(yáng)性率打分:陰性為0分,陽(yáng)性細(xì)胞率＜10%為1分,11%～50%為2分,＞50%為3分。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞率的乘積:≤2分為(-),≥3分為(+)。

表1 TGF-β1、TβRⅡ及 P38蛋白表達(dá)水平與胃癌臨床病理因素的關(guān)系

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有資料均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法做組間陽(yáng)性表達(dá)率的比較分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05(文中另有說明除外)。采用Spearman非參數(shù)相關(guān)檢驗(yàn)做相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 TGF-β1、Tβ RⅡ及P38與胃癌病理特征的關(guān)系(表 1)分析顯示,胃癌組織中 TGF-β 1、TβRⅡ及P38表達(dá)水平與浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期均有相關(guān)性(P＜0.05),而與年齡及性別均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05),TGF-β 1、P38表達(dá)水平和分化程度無(wú)相關(guān)性(P＞0.05),而 Tβ RⅡ表達(dá)水平則與分化程度相關(guān)(P＜0.05)。

2.2 TGF-β1、Tβ RⅡ及 P38與胃癌、胃腺瘤及正常胃組織的關(guān)系(彩插Ⅱ圖1)。

2.2.1 TGF-β1與胃癌、胃腺瘤及正常胃組織的關(guān)系 TGF-β1的陽(yáng)性染色主要見于癌組織,胃癌中 TGF-β1的陽(yáng)性表達(dá)率為63.33%,胃腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為53.33%,正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為36.67%。TGF-β1在胃癌中高表達(dá),與胃腺瘤的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017),與正常胃組織的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017),胃腺瘤與正常胃組織的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017)。涉及多個(gè)率的多重比較時(shí),要對(duì)原來(lái)的檢驗(yàn)水準(zhǔn)α(0.05)進(jìn)行校正,本例校正后的α=0.017,大于該數(shù)認(rèn)為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2.2 Tβ RⅡ與胃癌、胃腺瘤及正常胃組織的關(guān)系 TβRⅡ的陽(yáng)性染色主要見于正常胃組織,胃癌中Tβ RⅡ的陽(yáng)性表達(dá)率為46.67%,胃腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為60.00%,正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為93.33%。TβRⅡ在正常胃組織中高表達(dá),與胃癌的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.017),與胃腺瘤的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017),胃癌與胃腺瘤的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017)。

2.2.3 P38與胃癌、胃腺瘤及正常胃組織的關(guān)系 P38的陽(yáng)性染色主要見于癌組織,胃癌中 P38的陽(yáng)性表達(dá)率為93.33%,胃腺瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.00%,正常胃組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為40.00%。P38在胃癌中高表達(dá),與胃腺瘤的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017),與正常胃組織的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.017),胃腺瘤與正常胃組織的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.017)。

2.3 TGF-β1、Tβ RⅡ及P38表達(dá)水平的相關(guān)性(表2)采用Spearman非參數(shù)相關(guān)檢驗(yàn)做相關(guān)性分析顯示,TGF-β1與 TβRⅡ在胃癌和正常胃組織中表達(dá)均有相關(guān)性(P＜0.05),在胃腺瘤中這二者表達(dá)無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。TGF-β1與 P38在這三種組織中表達(dá)均有相關(guān)性(P＜0.05)。Tβ RⅡ與 P38在胃癌組織中表達(dá)有相關(guān)性(P＜0.05),而在胃腺瘤和正常胃組織中表達(dá)均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。

表2 TGF-β1、TβRⅡ及P38蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性

3 討 論

胃癌的發(fā)生是一個(gè)多基因、多途徑相互作用的過程,TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常是胃癌發(fā)生、發(fā)展以及浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的重要因素,Liang等[1]通過研究認(rèn)為P38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活與胃癌的形成有密切的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示TGF-β1與P38蛋白在胃癌組織中高表達(dá),Tβ RⅡ則低表達(dá),與正常胃組織相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.017),而在胃腺瘤中三者表達(dá)介于胃癌與正常胃組織之間。這些結(jié)果提示TGF-β1和P38蛋白的增加及TβRⅡ的減少可能在胃癌的形成過程中發(fā)揮重要作用。

到目前為止,對(duì)于TGF-β 1與胃癌的生物學(xué)行為有無(wú)相關(guān)性,能否促進(jìn)胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的研究仍有分歧,國(guó)內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn),TGF-β1的表達(dá)與胃癌組織分化程度、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[2-3]。另外國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道[4-5],TGF-β1增加與腫瘤的生物學(xué)行為無(wú)相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),在胃癌組織中TGF-β1、TβRⅡ及 P38蛋白之間均有相關(guān)性(P＜0.05)。另外本研究還提示在胃癌組織中 TGF-β1、TβRⅡ及 P38表達(dá)水平與年齡及性別均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05),而與浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期均有相關(guān)性(P＜0.05),提示這三者在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用。作者認(rèn)為胃癌組織中TGF-β1及P38蛋白表達(dá)增多的原因是由于 Tβ RⅡ表達(dá)減少導(dǎo)致二者反饋性升高,同時(shí)推斷由于 Tβ RⅡ的減少,導(dǎo)致增加的TGF-β1所產(chǎn)生的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的信號(hào)不能傳遞到胞內(nèi),從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。有研究認(rèn)為[6],腫瘤晚期TGF-β1可誘導(dǎo)表達(dá)VEGF、金屬蛋白酶MM P-2和 MMP-9,負(fù)調(diào)控金屬蛋白酶抑制因子,從而提供蛋白酶豐富的微環(huán)境,有利于腫瘤細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)到適當(dāng)?shù)难苌掀ぜ?xì)胞,這與本實(shí)驗(yàn)中TGF-β1在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)的結(jié)果是一致的。但在胃癌組織中只有TβRⅡ表達(dá)水平與分化程度有相關(guān)性(P＜0.05),而TGF-β1、P38表達(dá)水平和分化程度無(wú)相關(guān)性(P＞0.05),故TGF-β1、TβRⅡ及 P38蛋白在胃癌組織分化過程中的確切作用有待于進(jìn)一步探討。

細(xì)胞的失控性增殖是腫瘤組織最顯著的特點(diǎn),有研究表明[7-10],TGF-β 1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路如(P38M APK通路)之間存在著串話現(xiàn)象(Cross-talk)現(xiàn)象,結(jié)合本實(shí)驗(yàn),作者認(rèn)為 TGF-β1通過 TβRⅡ、P38傳遞信號(hào)的通路可成為包括胃癌在內(nèi)的各類惡性腫瘤診斷、治療的新靶點(diǎn),這與Deacu等[11]研究表明 TβRⅡ基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞后可抑制其生長(zhǎng),說明Tβ RⅡ具有潛在的腫瘤治療意義的結(jié)果是一致的。

綜上所述,TGF-β1和P38的高表達(dá)與 Tβ RⅡ的低表達(dá)與胃癌的發(fā)生、發(fā)展以及惡性程度是密切相關(guān)的,三者均可作為獨(dú)立反映胃癌生物學(xué)行為的指標(biāo),臨床上同時(shí)分析這些標(biāo)志物在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá),有助于判斷胃癌的病理學(xué)分級(jí),并有助于進(jìn)一步評(píng)估預(yù)后及指導(dǎo)臨床治療。

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