病理組織切片裂隙補救方法的技術改良

戴煒力，王群姬

(1.浙江省腫瘤醫院 病理科，浙江 杭州 310022；2.溫州醫學院附屬第一醫院 病理科，浙江溫州 325000)

在常規石蠟切片過程中，我們常常會把大小不等的標本進行混合固定脫水處理，由此難免會出現標本處理不均的現象：或大的組織處理不足，或小的組織處理過度，使得部分組織變脆、變硬。組織切片常常表現為有邊緣不齊的“龜殼狀”（見圖1）和“百葉窗樣”裂隙。究其原因往往與組織脆性增加有關，若將此蠟塊再行低溫冷凍后切片，此種裂隙則更為明顯和嚴重。為了補救這類問題蠟塊，我們通過與兄弟單位的技術交流及自身的實踐探索，發現適當使用氨水能有效軟化組織，降低組織脆性，減少裂隙出現，且更有利于蠟塊切出完好的蠟片。現報告如下。

1 材料、方法和結果

1.1 材料 選取我院2008年行常規石蠟制片中組織蠟片出現裂隙的蠟塊358只，其中包括淋巴結、脾臟、肝臟、腎臟、子宮、乳腺等手術切取標本，同時含有內鏡、穿刺活檢標本。試劑：純氨水（上海三鷹化學試劑有限公司生產）500 mL。

1.2 方法 ①將此類容易產生裂隙的組織蠟塊放入冷水中（水溫0～5 ℃）約10 min。②將蠟塊放上切片機小心粗修至暴露整個組織切面，然后細切蠟片10余張（此蠟片棄之不用），再將粗切把手逆時針轉動1/4～1/2圈以退刀。③用脫脂棉球蘸取足量的純氨水，覆蓋在細切后的組織面上約10 s，再行細切，直至有組織蠟片順利切出，取前面3～5張展于裱片機內。④待蠟片充分展平后迅速裱于載玻片上。⑤常規烤片，染色，封固。

1.3 結果 用此類方法處理組織，切片平整，結構完好，除“龜殼狀”裂紋尚存外（但明顯縮小）其余裂隙均消失，組織染色無明顯差異（見圖2）。

圖1 標本處理過度，組織變脆，變硬，切片呈“龜殼狀”裂紋

圖2 經氨水處理再行切片，組織結構完好，“龜殼狀”裂紋明顯縮小，切片染色艷麗

2 討論

常規制片中出現裂隙是我們常規技術工作中經常碰到的問題，此類問題切片不僅影響切片質量，有時還會導致病理診斷的困難，更有甚者連蠟片都很難切出。馬恒輝等[1]提出導致切片裂隙有諸多原因，在實際操作中，組織處理因素是首要因素，由于甲醛、乙醇、二甲苯三者對組織均有不同程度的硬化作用，其過度處理必然導致組織彈性降低，表現為各種間質成分（特別是膠原、網狀纖維）張力下降，脆性增加，發生斷裂而呈“龜殼狀”裂紋；或者尚未發生斷裂，但組織過度冷凍后切片，切出的蠟片在室溫中迅速膨脹，而呈“百葉窗樣”裂隙。當然諸如子宮、乳腺等組織纖維含量極為豐富，過硬的組織蠟塊接觸刀鋒產生震動，也會出現波紋裂隙。

鑒于此，傳統病理技術的做法是在蠟塊暴露面哈氣或擦少量溫水以求軟化組織或降低組織與室內的溫差，結果往往是組織切片過厚或難以切出蠟片。馬恒輝等[3]用 5 mmol/L的鹽酸（HCl）浸泡來處理有裂隙的組織，此法雖能有效防止裂隙，但較費時且組織膨脹較為明顯，核著色困難，切片紅染[2]。而本資料介紹的氨水分子式為NH4OH，能解離為NH3和H2O，使之達到一種動態平衡。用氨水處理與上述方法相比有以下優點：①氨水是一種很好的軟化劑，此法源于工業上壓縮木質技術用氨水來軟化木材[3]，可軟化組織間質的各種纖維，增加彈性和張力。②氨水解離出的NH3分子量小于HCl，更具穿透力，所以用時極短，10 s左右就深達20～30μm。加之此法無需取下蠟塊，方便快捷。③氨水解離時將吸收周圍的熱能，在不降低蠟塊表面溫度的情況下，減少了蠟塊切面與周圍的溫差，在防止蠟塊膨脹的同時又能順利切出蠟片。④用氨水來處理蠟塊表面時，NH3穿透組織表面，為了達到氨水的平衡，也會帶進一定量的H2O，使得原本處理過度的組織得到一定的恢復。⑤用氨水處理的蠟塊，對硬化的子宮和乳腺等組織也有明顯的軟化作用，故也能防止波紋裂隙的產生。

應用氨水時，也應注意以下幾項：①粗修蠟塊后，宜細切蠟片10余張并丟棄，以防后繼細切蠟片產生空洞。②因氨水處理后對蠟塊作用只有深達表面20～30μm，所以在此步驟之前必須退刀，細切出的蠟片也只能取前面3～5張。③蠟片置入裱片機內，待充分展平后方可裱貼于載玻片，以防產生褶皺。④盡管此法用時極短，但蠟片仍存留少量氨水，因此染色前建議用流水先進行沖洗。

[1]馬恒輝,章如松.組織切片裂隙產生的原因與對策[J].診斷病理學雜志,2007,14(6):474.

[2]馬恒輝,周曉軍.HE染色常見問題與對策[J].臨床與實踐病理學雜志,2008,24(4):478-481.

[3]方桂珍.木材功能性改良[M[.北京:化工工業出版社,2007:128-131.