基層醫院HIV抗體測定室內質控初探

丁順娥 施 煒

宜興市周鐵醫院檢驗科（214261）

隨著艾滋病流行形勢的日趨嚴峻，新發現的感染者數量在成倍增加，艾滋病的檢測也顯得非常重要，國內檢測HIV抗體的方法主要是酶聯免疫法，而其檢測結果受到試劑的質量，檢驗人員的操作水平以及實驗室的操作條件如儀器的穩定性、試劑盒的質量、加樣操作、孵育溫度、顯色時間等諸多因素的影響，為保證檢測結果的穩定性、準確性，對艾滋病實驗室進行全面的質量評價是必不可少的，多年以來，基層醫院檢驗科對ELISA法檢測HIV抗體的室內質控一直不夠重視，認為不像生化定量那樣有具體直觀的數據，且試劑盒內已有陰陽性對照、結果明了，認為沒有必要和沒有好辦法進行質控。眾所周知，Levey-Jenings質控圖法都必須檢測20次，方可繪制質控圖，其周期較長，一些不是每天檢測的如HIV抗體的檢測等項目的檢測質控都會遇到困難，在基層實驗室尤為如此，為此，本室采用即刻法質控與Levey-Jenings質控圖法相結合的方法實現室內質控，即將同一批外部質控血清連續測定3次后，對第3次到第20次的所有檢驗結果進行即刻法質控，20次以后采用Levey-Jenings質控圖法進行質控。

1 材料與方法

表1 HIV抗體即刻法質控自動判斷表[2]

1.1 儀器與試劑

北京普朗新技術有限公司酶標儀DNM9602A，美國寶特ELX-50型洗板機，英科新創科技有限公司HIV（雙抗原夾心酶聯免疫法）ELISA抗體診斷試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 首先必須購買同一批號的試劑盒兩盒以上，將同一批號的每盒內陽性對照血清各吸400μL進行混合，然后因為本實驗臨介值（CO）為0.15，按照HIV抗體弱陽性（S/CO=2.0～2.9）的標準，以及弱陽性質控的標本的光密度應是臨介值的2～3倍，稀釋后弱陽性的質控標本光密度應在0.3～0.45，為此，本室將陽性對照混合血清用正常人體檢者血清（即乙型肝炎兩對半和HIV抗體陰性）進行1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶24、1∶32稀釋[1]，然后56℃加熱30min滅活處理，每一個稀釋度吸兩孔，與標本一起檢測，得出最適稀釋度為1∶24，將陽性對照混合血清用正常人血清稀釋后，按每天試驗用量分裝，標記，封口，-20℃保存于非自動除霜冰箱中，和標本一起檢測，得到第一次和第二次的光密度值分別是0.352、0.370，S/CO值分別是2.33、2.46。

2 結 果

2.1 將質控血清的測定值按測定次數從小到大排列

計算時OD值按X1、X2、X3、X4……，Xn，X1為最小值，Xn為最大值（表1）。

2.3 計算SI上限值和SI下限值。

2.5 將SI上限，SI下限與上表中n2s和n3s值中的數值比較。

2.5.1 當SI上限和SI下限，＜n2s時表示處于控制范圍內，可以繼續測定，繼續重復以上各項計算。當SI上限和SI下限有一值處于n2s～n3S時說明該值在2S～3S范圍，處于告警狀態。當SI上限和SI下限有一值＞n3s值時說明該值已在3S范圍之外，屬失控[3]。

2.5.2 繪制質控圖

根據外部對照質控血清連續檢測20次所測得的S/CO值計算出χ—平均值±2S，以試驗日期為橫坐標，以S/CO值為縱坐標繪制質控圖。從第21日起，將每次質控血清的檢測結果（S/CO值）依次繪入該質控框架圖中，檢驗進入Levey-Jenings質控圖狀態。

2.6 從表1可以看出，即刻法質控與Levey-Jenings質控圖法質控的標準差、平均值、變異系數分別是0.061（0.056）、2.40（2.397）、2.3%（2.5%），t=0.5907，P＞0.05，說明兩種方法數據構成的樣本的平均值差異不明顯，兩種方法的結合對艾滋病實驗室的質量控制是可行的，彌補了彼此的不足，特別是能對第3次到第20次的檢測進行質量控制，經過1年多的觀察，外部質控血清穩定性良好。

3 討 論

3.1 我們實驗室一直采用S/CO值進行室內質控并收到良好的效果，自行配制的外部質控血清穩定性良好，變異系數＜10%。

3.2 即刻法質控與質控圖法的質控的聯合運用，使檢測從第3次起就處于質控狀態，有利于及時發現問題。

3.3 兩種方法的結合，降低了工作量和試劑消耗，結果可靠，適用于標本量少，工作量小的基層醫院艾滋病初篩實驗室。

3.4 質量是臨床實驗室的生命線，在開展質量控制前，應使每個工作人員對質量控制的重要性，以及質控知識和質控作圖方法有充分的了解，并能通過對質控圖形的的分析，及時發現工作中的問題，并有在失控后迅速查找原因的能力。使實驗室工作中每個與質量有關的問題都查有記錄，并有專人管理，有章可循。

3.5 此法缺憾是如前3次結果穩定，精密度較好，方差S變異系數較小，對后續結果要求也高，易出現假失控。

[1]王錦恒,鄧梅英.初篩實驗室 -HIV臨界值質控血清的制備及應用[J].華夏醫學,2006,19(1):151.

[2]孫曉祥.EXCEL在HCV-Ab即刻法質控中的應用[J].當代醫學(學術版),2008,14(23):180-182.

[3]疾控中心.全國艾滋病檢測技術規范[S].2009.