結直腸癌患者全身熱療術前后血漿前列腺素E2水平及細胞免疫功能變化的動態觀察

張正華 吳學勇 侯凱生*

1 復旦大學華山醫院腫瘤科（復旦大學上海醫學院）（200040）

2 上海市靜安區中心醫院腫瘤科（200040）

前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）是花生四烯酸代謝的主要產物之一，廣泛存在于機體各組織器官內，在維護細胞自穩及增殖方面有著重要的意義。近來研究發現，多種惡性腫瘤具有釋放PGE2的特性，外周血PGE2水平與機體免疫狀態、療效和預后密切相關，已有文獻將惡性腫瘤患者手術前后外周血PGE2含量變化，作為評判手術療效輔助性指標[1]。結直腸癌組織是目前所知分泌PGE2能力最高的惡性腫瘤，其PGE2含量為其他腫瘤的1.7～5.2倍[2]，故PGE2在結直腸癌手術療效的判斷中具有更大的臨床價值。本研究旨在通過測定結直腸癌患者外周血PGE2水平動態變化，探討全身熱療在治療結直腸癌患者中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

研究對象選自復旦大學華山醫院腫瘤科2002年6月至2006年12月收治的結腸癌患者24例，男13 例，女11 例，年齡14～73歲，平均（56.3±17.1）歲，對照組為24名健康體檢者。本組患者入組條件是：術前肝腎功能正常；均經術后病理證實為癌，均為術后轉移復發及常規放化療失敗的Duke Ⅳ期患者，除外大量吸煙、酗酒、全身急慢性炎癥、常服非甾體類抗炎藥、有其他惡性腫瘤病史、肺廣泛毀損、術前已經接受放療、化療、生物治療或術后發生切口感染、腹腔膿腫、吻合口瘺者。在術前4周內均無放化療史，術前均無明顯感染史。

1.2 方法

1.2.1 全身熱療

全身熱療設備采用美國FCM-TEMETTM1000型體外循環熱療系統及中國深圳ET-SPACE太空艙全身熱療系統.在全麻下全身核心溫度控制在41.8～42.5℃持續2h，整個熱療全過程4～6h。

1.2.2 標本采集和處理

1.2.2.1 外周血PGE2

外周血樣品取自手術前3d及術后10d抽取外周靜脈血2mL，注入抗凝試管（抗凝劑為EDTA鈉及indomethain溶液），1h內低溫離心（3500轉/分，4℃，15min），取上清液，-70℃保存待測。另抽取24例健康檢者外周血作對照，處理同前。

PGE2測定用英國Amersham公司提供的PGE2·EIA藥盒，敏感度為0.8pg/well，與PGD2、PGB2、PGA2、PGF1α、15-keto-PGF2α、TXB2的交叉反應＜0.01%。測定時嚴格按照規定的步驟操作和系統提供的公式計算。

1.2.2.2 細胞免疫功能檢測

使用外周血淋巴細胞多項免疫指標檢測。

材料與儀器：小鼠抗人單克隆抗體CD4/CD8/CD3、CD19、CD20、CD3/CD16+56、CD3/HLA-DR、CD3/CD25及同型對照、紅細胞裂解液（Optilyse C）（法國Immunotech公司）。Epics XL·MCL流式細胞儀（美國BECKMAN COULTER公司）。

使用直接免疫熒光標記全血溶血法，流式細胞儀測定腫瘤患者外周血淋巴細胞表面抗原表達。 淋巴細胞表面標記，溶血，洗滌，重懸，檢測，上計算淋巴細胞中各標記細胞的百分率。最后所有數據應用SPSS進行統計學處理。

1.2.3 統計處理

2 結 果

2.1 術前檢測結果

結直腸癌患者的外周血PGE2與對照組比較見表1，結直腸癌患者外周血PGE2為（178.33±65.35）pg/mL，明顯高于對照組24例正常人（獻血員）的外周血PGE2[（11.69±5.6）pg/mL）]，P＜0.01；T細胞亞群以CD4+下降為主。提示結直腸癌患者較良性疾病患者以及正常人可產生更多的PGE2。

3.2 圍手術期動態檢測結果

結直腸癌組圍手術期T細胞亞群和PGE 濃度變化特點見表1。結直腸癌組患者行全身熱療術10d后，外周血PGE2由（178.33±65.35）pg/mL 降至（25.82±4.37）pg/mL。呈顯著降低。經相關性分析可發現CD4細胞與PGE 變化呈負相關。其r=-1.03，y=249.16-6.32 x（x為CD4細胞百分率，y為外周血PGE2濃度）。

表1 結直腸癌患者圍手術期血漿PGE2的檢測結果

3 討 論

全身熱療是通過人為方法提高體溫，運用熱作用及繼發效應選擇性殺滅癌細胞，控制癌細胞廣泛轉移的治療方法，其特點是不僅要使癌灶處的溫度升高，而且使全身溫度都升高到同一溫度，已成為繼手術、化療、放療和生物免疫治療后出現的第5種腫瘤治療方法，成為腫瘤綜合治療的有效手段。

通過大量的實驗研究，許多學者認為，熱療殺傷腫瘤分子和細胞的機制有以下幾種：①高溫殺傷細胞膜蛋白，導致細胞膜通透性增加，低分子蛋白外滲，腫瘤細胞被破壞；還可能通過殺傷線粒體膜蛋白引起其流動性改變，導致能量轉換障礙，腫瘤細胞因呼吸抑制而缺氧死亡；也可通過抑制參與腫瘤細胞復制、轉錄、修復有關的酶類及滅活染色體的組蛋白，引起DNA、RNA、蛋白質的合成受到抑制；殺傷細胞核支架、細胞骨架修復酶，使細胞骨架散亂。②提高機體細胞免疫功能，促進白細胞介素2（IL-2）和腫瘤壞死因子（TNF）的生成[3,4]并使腫瘤局部淋巴細胞浸潤（LI）增加[5]。③提高野生型p53基因的表達，誘導腫瘤細胞凋亡[6]。④抑制腫瘤微血管的形成和促進血纖維蛋白溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）的表達[7]。⑤還可使腫瘤血管閉塞、破壞，滲出增加。其中增強機體免疫力是很重要的一個方面，有文獻報道，熱療后血清TNF-α水平升高[8]，也有學者觀察微波熱療后，患者CD4細胞增加，CD4/CD8增大，表明免疫機制起一定的作用[9]。

自1971年Jaffe等[2]首次報道人類結直腸癌細胞在組織培養過程中可釋放多量的前列腺素E（PGE）以來，人們相繼發現多種腫瘤均有產生PG的特性[10]。我們以結直腸癌患者為研究對象，觀察其PGE2含量變化，結果發現，結直腸癌患者外周血PGE2含量比正常人高（P＜0.01）；全身熱療后，外周血PGE2含量較術前明顯降低。上述結果均提示，結直腸癌可產生大量的癌源性PG，結直腸癌患者血循環中具有持續高水平的PGE2。癌源性PG的增高可能與腫瘤組織內PG的合成及分泌增多有關，環氧化酶是PGE2合成起始步驟中的關鍵酶。環氧化酶抑制物可影響腫瘤組織內PG的含量。一些酸性抗炎藥物如阿司匹林、吲哚美辛、芳基丙酸等都是環氧化酶的抑制物。它們無論在體內、體外均可明顯抑制PG的合成與釋放[11]。另外，腫瘤組織內除腫瘤實質細胞外，尚含有其他一些細胞，如單核-巨噬細胞和淋巴細胞等。這些細胞均能產生大量的PG，已有研究表明，PGE2能降低NK細胞的活性，且有促進腫瘤產生、發展和轉移的作用[12]。

本文結直腸癌組既不伴有免疫缺陷病變，又無免疫抑制藥治療史，患者表現為CD4、CD3和CD4/CD8比值下降，且以CD4下降為主，表明T細胞亞群嚴重失街，聃能受抑或受損，提示為腫瘤負荷所致，與文獻報道[13,14]相同。PGE2是一種能抑制淋巴細胞分化增殖的可溶性免疫抑制因子[15]，一般認為是通過抑制T細胞增殖而發揮作用。從本文結直腸癌組圍手術期動態檢測資料可看出PGE2顯著增高同時CD4細胞顯著下降，CD4/CD8比值顯著下降，經過全身熱療術后PGE2下降，CD4細胞漸升，CD4/CD8比值漸趨正常。PGE2濃度變化與T細胞亞群失衡之間存在較好的相關性。

鑒于結直腸癌患者具有高水平的PGE2，且又與細胞免疫功能異常關系密切，全身熱療在殺滅癌細胞同時提高機體免疫力。外周血PGE2作為結直腸癌患者全身熱療治療判斷療效的一項輔助性監測指標有較好的應用前景。

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