三七總皂苷對羅非魚體成分及非特異免疫的影響

楊志剛 忻 晨 闕有清 鄭劍偉

羅非魚具有生長快、食性雜、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)好、適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高和繁殖力強(qiáng)等優(yōu)點，己發(fā)展成為世界主要養(yǎng)殖魚類之一，也是我國南方各省主要養(yǎng)殖的淡水魚之一。但隨著養(yǎng)殖集約化程度不斷提高，在羅非魚養(yǎng)殖過程中，寄生蟲疾病和細(xì)菌性等疾病給羅非魚養(yǎng)殖帶來嚴(yán)重的危害。因此，研究和推廣健康養(yǎng)殖模式，開發(fā)綠色環(huán)保型飼料添加劑，提高水產(chǎn)動物自身免疫力已成為急待解決的問題。經(jīng)驗表明，在養(yǎng)殖飼料中添加適宜的功能性添加劑可增強(qiáng)水產(chǎn)動物的免疫性能，避免或降低高密度養(yǎng)殖帶來的負(fù)面效應(yīng)。皂苷(saponins)是一類較復(fù)雜的苷類化合物，廣泛存在于開花植物中，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎及抗誘變等生理功能。本試驗以羅非魚為對象，在飼料中添加不同水平的三七總皂苷，研究其對羅非魚肌肉成分和血清及肝胰臟非特異免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗藥品

三七總皂苷(Panax notoginseng Saponins，PNS)由浙江大學(xué)天然藥物研究室提供，純度99%。

1.2 試驗日糧

根據(jù)羅非魚的營養(yǎng)需要設(shè)計基礎(chǔ)飼料配方（見表1），以基礎(chǔ)飼料作為對照組，在基礎(chǔ)飼料中分別添加50、100、200、400、800 mg/kg的三七總皂苷作為試驗組。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)水平（%）

1.3 試驗魚和飼養(yǎng)管理

試驗用羅非魚購自廈門鷺業(yè)水產(chǎn)有限公司，平均體質(zhì)量為(1.0±0.5)g，運(yùn)輸?shù)缴虾：Ｑ蟠髮W(xué)南匯特種水產(chǎn)養(yǎng)殖場后，暫養(yǎng)20 d，期間投喂基礎(chǔ)飼料進(jìn)行馴養(yǎng)。馴養(yǎng)結(jié)束后，魚都能主動過來搶食。試驗開始時，選擇體重相近的魚苗，隨機(jī)分為6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)70尾，進(jìn)行60 d的養(yǎng)殖試驗。每天投喂3次(08：00、13：00 和 18:00)，投喂量為魚體重 2%～5%，并根據(jù)每天攝食情況調(diào)整日投喂量，不間斷充氧；水溫26～29℃。

1.4 測定指標(biāo)及方法

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每重復(fù)隨機(jī)取魚10尾，分離背部肌肉和肝胰臟，另取魚10尾，尾靜脈處采血，3000 r/min離心15 min，取血清冷凍備用。血清溶菌酶活性、血清和肝胰臟中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性、肌肉中丙二醛含量和膽固醇含量、肝胰臟中超氧化物歧化酶活力測定均采用南京建成生物公司提供的檢測試劑盒，相應(yīng)操作參照說明書進(jìn)行。飼料和魚肌肉中的水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪含量均按國標(biāo)有關(guān)方法進(jìn)行測定。水分測定采用105℃烘干法；粗蛋白含量測定采用凱氏定氮法；粗脂肪含量測定采用索氏抽提法。

1.5 試驗數(shù)據(jù)處理與分析

試驗所獲得的數(shù)據(jù)用SPSS13.0作單因素的方差分析，用Duncan's法作多重比較。

2 結(jié)果

2.1 三七總皂苷對羅非魚肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分的影響（見表2）

從表2可以看出，飼料中添加不同水平的三七總皂苷對羅非魚肌肉中粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分含量無顯著影響(P>0.05)。

表2 三七總皂苷水平對羅非魚肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分的影響（%）

2.2 三七總皂苷對羅非魚肌肉丙二醛含量和膽固醇含量的影響

表3 三七總皂苷水平對羅非魚肌肉丙二醛含量和膽固醇含量的影響（mmol/mg）

從表3可以看出，隨著三七總皂苷添加量的增加，肌肉中丙二醛含量呈下降趨勢。其中2組和3組與對照組相比，差異不顯著(P>0.05)。其他3組與對照組相比，差異顯著（P＜0.05），但 4、5、6 組之間差異不顯著（P＞0.05）。肌肉中膽固醇含量也隨三七總皂苷添加量的增加呈下降趨勢，其中，5組肌肉中膽固醇含量最低，比對照組降低了20%（P＜0.05）。

2.3 三七總皂苷對羅非魚血清非特異免疫指標(biāo)的影響（見表4）

表4 三七總皂苷水平對羅非魚血清非特異免疫指標(biāo)的影響

從表4可以看出，飼料中添加三七總皂苷可以顯著提高羅非魚血清中溶菌酶的活性，其中添加量為400 mg/kg試驗5組溶菌酶活性最高，比對照組高出38.20%（P＜0.05），且試驗 3、4、5 組血清中溶菌酶活性顯著高于其他兩個添加組和對照組（P＜0.05），試驗2組和對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。飼料中添加三七總皂苷，血清中酸性磷酸酶（ACP）活性呈增高趨勢，試驗4、5組血清中ACP活性顯著高于其他三個添加組和對照組。添加量為800 mg/kg試驗組血清中堿性磷酸酶（ALP）活性顯著高于其他添加組和對照組，其他各添加組和對照組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 三七總皂苷對羅非魚肝胰臟非特異免疫指標(biāo)的影響（見表5）

表5 三七總皂苷水平對羅非魚肝胰臟非特異免疫指標(biāo)的影響

從表5可以看出，三七總皂苷添加組肝胰臟中超氧化物歧化酶(SOD)活性均高于對照組，但與對照組相比差異都不顯著（P>0.05）。試驗4組肝胰臟中ACP活性最高，顯著高于對照組 26.78%（P＜0.05），試驗 4、5組之間 ACP活性差異不顯著（P＞0.05），試驗2、3、6組肝胰臟中ACP活性與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。隨著三七總皂苷含量的增加，肝胰臟中ALP活性呈遞增趨勢，其中試驗5組肝胰臟中ALP活性最高。

3 討論

皂苷廣泛存在于自然界，是人參、三七、甘草、柴胡等許多中藥的主要活性成分之一。皂苷最早作為飼料添加劑是在1961年，從百合科絲蘭屬和知母屬提取的薩灑皂苷，具有天然免疫增強(qiáng)劑的作用。養(yǎng)殖試驗表明，薩灑皂苷可顯著提高動物的采食量、增重率和飼料轉(zhuǎn)化率，并能促進(jìn)動物健康和提高免疫性能，減少環(huán)境污染和死亡率。從南美皂樹(Quillaja saponaria Molina)樹皮的水提取物中鑒定分離得到的皂苷Quil A可作為魚的一種天然免疫增強(qiáng)劑。Francis等（2002）[2]研究表明，鯉魚飼料中較佳皂樹皂苷的添加水平是150 mg/kg，而羅非魚飼料中的皂樹皂苷較佳添加水平是300 mg/kg，且皂樹皂苷促生長效果在添加初期較顯著。皂樹皂苷具有較強(qiáng)的溶血性，這對其作為飼料添加劑的開發(fā)有一定的限制。三七總皂苷溶血性遠(yuǎn)較皂樹皂苷小，應(yīng)用于動物無毒副作用，有望研發(fā)成為水產(chǎn)動物一種新型天然免疫增強(qiáng)劑。

丙二醛的含量與機(jī)體抗氧化性能密切相關(guān)，丙二醛作為脂質(zhì)氧化的中間產(chǎn)物，是衡量機(jī)體脂質(zhì)氧化程度的一個重要指標(biāo)。辜玲芳等（2008）[3]研究發(fā)現(xiàn)，皂苷有降低異育銀鯽體內(nèi)丙二醛含量的趨勢，本試驗得出類似的結(jié)果。SOD是機(jī)體重要抗氧化酶系，可及時清除體內(nèi)O2-、H2O2等過氧化物。龐素鳳等(2008)[4]試驗顯示，在銀鯽的飼料中添加1.0 mg/kg的云芝多糖，可提高其血清中SOD的活性，但如果添加水平過高或過低，則沒有顯著影響。本試驗結(jié)果顯示，在羅非魚飼料中添加適宜水平三七總皂苷能提高其肝胰臟SOD的活性。溶菌酶是魚類非特異性免疫系統(tǒng)的主要成分之一，在魚體抵抗感染性致病菌的最前沿防御機(jī)制中起著重要作用。Guojun Yin等(2006)[5]試驗發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加0.1%和0.5%的黃芪可以明顯提高羅非魚血清中的溶菌酶活性。ACP和ALP是一類對底物要求較低的磷酸單脂水解酶，直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和鈣磷代謝，對脊椎動物骨骼的形成具有重要作用。另外，ACP是高等動物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶；ALP能夠通過改變病原體的表面結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)被侵襲機(jī)體對病原體的識別和吞噬能力，因而有助于提高魚體的抗病力。

4 結(jié)語

本研究結(jié)果表明，飼料中添加適宜水平的三七總皂苷，對羅非魚肌肉中的粗蛋白、粗脂肪、水分和灰分的含量沒有顯著影響，卻顯著降低了肌肉中的丙二醛和膽固醇含量，可以提高羅非魚肝胰臟超氧化物歧化酶活性，顯著提高羅非魚血清溶菌酶活性、血清及肝胰臟酸性磷酸酶活性和堿性磷酸酶活性，增強(qiáng)羅非魚血清及肝胰臟非特性免疫功能，對促進(jìn)羅非魚的無公害養(yǎng)殖和生產(chǎn)低脂、低膽固醇的安全羅非魚具有重要意義。

[1]趙紅霞，詹勇，許梓榮.皂甙生物活性的研究及其在飼料中應(yīng)用[J].飼料博覽，2003（4）：5-7.

[2]Francis G,Makkar H P S,Becker K.Dietary supplementation with a Quillaja saponin mixture improves growth performance and metabolic effciency in common carp (Cyprinus carpio L.)[J].Aquaculture,2002，203：311-320.

[3]辜玲芳，侯永清，丁斌鷹，等.幾種植物提取物對異育銀鯽生長性能和血液生化指標(biāo)的影響[J].淡水漁業(yè)，2008，38（2）：23-26.

[4]龐素風(fēng),吳志新,王艷，等.云芝多糖對銀鯽非特異性免疫功能的影響[J].淡水漁業(yè)，2008，38（2）：17-22.

[5]Guojun Yin，Galina Jeney，Timea Racz，et al.Effect of two Chinese herbs(Astragalus radix and Scutellaria radix)on non-specific immune response of tilapia，Oreochromis niloticus[J].Aquaculture，2006，253：39-47.