載銅膨潤土對不同品種斷奶仔豬糞便中微生物菌群的影響

張婷婷 趙 飛 潘曉亮 崔艷霞 潘 奇

仔豬腹瀉、痢疾是一種由多種病原因素引起的疾病。較常見的癥狀有仔豬黃痢、仔豬白痢、早期斷奶腹瀉綜合征等，由于該病致病誘因較多，給該病的預防和治療帶來很大的困難。豬場在生產實踐中多用抗生素、磺胺等藥物治療，但常因用藥不當，而使療效不佳。長期使用抗生素和抗菌藥物，造成諸如細菌抗藥性、耐藥基因轉移、水產品中藥物殘留等不良后果，直接或間接威脅人類健康，而且由于長期濫用抗生素引起水環境污染，導致養殖環境惡化，生態平衡失調。因此，研制新型的抗菌材料已迫在眉睫。

膨潤土含有硅、鉀、鈣、鈉、鐵、鎂、銅、鋁、錳、鋅、鈷、氯等，是畜禽所必需的常量和微量元素。已查明,膨潤土有些元素還是生命活動中酶、激素和各種活性物質的重要組成部分，它將會成為生產綠色肉食品的新型飼料添加劑。膨潤土不僅對畜禽的肉質無污染、無藥殘，而且對人體無危害。

1 材料與設計

1.1 試驗材料

載銅膨潤土：由浙江大學飼料科學研究所提供，銅含量為3.9%，CSN平均粒徑為41 nm。硫酸銅：由石河子大學飼料添加劑廠提供。

1.2 試驗動物

由新疆克拉瑪依綠成農業開發有限責任公司養豬場提供。

1.3 試驗動物分組

選擇（35±2）日齡的杜洛克×大白豬和杜洛克×斯格豬斷奶仔豬共兩個品種48頭，每一品種24頭，按照體重相近、公母各半、同一圈中每頭仔豬盡可能來自不同母豬的原則，采用完全隨機化區組設計，分三組（每組8頭）。設Ⅰ對照組（基礎日糧，含Cu 10 mg/kg，以硫酸銅的形式添加）；Ⅱ載銅膨潤土組（基礎日糧+Cu 10 mg/kg，以載銅膨潤土的形式添加）；Ⅲ高銅組（BD+Cu 180 mg/kg，以硫酸銅的形式添加）。試驗豬采用群飼，自由采食和飲水，試驗前對豬舍進行消毒，預試期6 d，正試期45 d。平均體重差異不顯著（P＞0.05）。

1.4 飼養管理

試驗期：仔豬于克拉瑪依試驗場代謝實驗室飼養。試驗前，實驗室和代謝籠經反復沖洗，用堿水和百毒殺消毒，最后對圈舍熏蒸消毒 (每立方米用25 ml甲醛和25 g高錳酸鉀加水12.5 ml，密閉門窗，熏蒸24 h)。仔豬35～40日齡采用母豬帶仔基礎料誘飼，仔豬于40日齡轉入代謝籠中，每個代謝籠飼喂8頭。自由飲水和自由采食。前兩周每天定時飼喂3次(10:00、14:00、20:00)，以后每天飼喂 2 次(10:00、20:00)，每次以吃飽后略有剩余為度。同時室溫應保持在26～28℃，并保持豬舍內清潔衛生和空氣流通，定期消毒。

1.5 試驗飼糧組成（見表1、表2）

表1 試驗基礎飼糧組成和營養水平

表2 復合預混料（%）

2 試驗器材與方法

2.1 試驗器材

生物顯微鏡 OLYMPUS CX21，4℃冰箱，KW-1型控溫儀，電熱恒溫培養箱 64-5，電子天平JA3003N，手提式壓力蒸汽滅菌器YXQSG46.280，培養皿，載玻片，酒精燈，接種針，電熱套。

2.2 樣品采集

在正試期第15、30、45 d隨機采集各組健康的試驗仔豬(每組6頭)的糞便，然后在4℃冰箱冷凍放置待測。在無菌操作臺上進行糞便中微生物（大腸桿菌和沙門氏菌）檢測。

2.3 培養基

伊紅美藍瓊脂和S-S瓊脂自備（調制參考李健強等主編的獸醫微生物學試驗實習指導，1999）。①伊紅美藍瓊脂配制如下：蛋白胨1 g；2%伊紅-Y水溶液2 ml；磷酸氫二鉀 2 g；乳糖 1 g；1%美藍水溶液 0.65 ml；瓊脂 1.8 g；蒸餾水 100 ml；pH 值 7.1～7.3。②S.S瓊脂配制如下：牛肉膏 0.5 g；蛋白胨 0.5 g；瓊脂 1.3 g；乳糖1 g；膽鹽 1 g；檸檬酸納 0.85 g；硫代硫酸納 0.85 g；檸檬酸鐵 0.1 g；1%中性紅水溶液 0.25 ml；0.1%煌綠水溶液 0.033 ml；蒸餾水 100 ml；pH=7.2。

2.4 方法與步驟

在超凈工作臺中分別迅速取糞便內容物各1 g置一次性試管中，加入0.9%生理鹽水9 ml，在用玻璃棒攪拌5 min，連續兩次，使樣品充分搖勻，此液為10-1稀釋液，然后再吸取1 ml置于盛有9 ml的0.9%生理鹽水一次性試管中進行10-2稀釋，攪拌5 min后，再依次進行10-3倍稀釋。分別將不同稀釋度的稀釋液涂抹于各培養基上。需氧菌37℃有氧培養18～24 h后進行菌落計數。采用平板計數法進行菌落計數，并換算成log10CFU/ml菌液。即用每毫升原菌液活菌數表示；各稀釋度設3個重復。

公式：每毫升原菌液活菌液=同一稀釋液三個以上重復平皿菌落平均數×稀釋倍數×10（0.1 ml加入培養基中）

2.5 細菌的鑒定

根據菌群和細胞形態、革蘭氏染色、耗氧性來鑒定這兩種細菌。

細菌的鑒定：Ⅰ.大腸桿菌在伊紅美藍培養基(EMB)上呈黑色隆起帶金屬閃光的菌落，表面光滑，邊緣整齊，有光澤；革蘭氏染色為陰性；顯微鏡下呈兩端鈍圓的短桿狀；需氧。Ⅱ.沙門氏菌在志賀氏-沙門氏瓊脂培養基(S-S)上呈乳黃色隆起的中等大菌落，表面光滑，邊緣整齊；革蘭氏染色為陰性；顯微鏡下呈短桿狀，菌端多發尖；需氧。

同時將上述糞樣進行pH值測定。糞便中內容物pH值用精確pH試紙檢測。

2.6 數據處理

運用統計軟件SPSS 11.5對各項數據進行單因素分析，取LSD值對各組間平均數進行多重比較，以P＜0.05(差異顯著)作為差異顯著性判斷標準。

3 結果與分析

3.1 載銅膨潤土對杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌、沙門氏菌及菌液pH值的影響（見表3）

3.1.1 載銅膨潤土對杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，大腸桿菌菌落數增加了1%，差異不顯著（P＞0.05）。高銅組與對照組相比，大腸桿菌菌落數降低了2.49%，差異顯著（P＜0.05）；與載銅膨潤土組相比，大腸桿菌菌落數降低了3.45%，差異顯著（P＜0.05）。

表3 載銅膨潤土對杜洛克×大白豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌及其菌液中pH值的影響

3.1.2 載銅膨潤土對杜洛克×大白豬糞便中沙門氏菌的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，沙門氏菌菌落數增加了0.83%，差異不顯著（P＞0.05）。高銅組與對照組相比，沙門氏菌菌落數降低了2.67%，差異顯著（P＜0.05）；與載銅膨潤土組相比，沙門氏菌菌落數降低了3.48%，差異顯著（P＜0.05）。

3.1.3 載銅膨潤土對杜洛克×大白豬糞便中菌液pH值的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，菌液中pH值增加了3.03%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對照組和載銅膨潤土組相比，菌液中pH值分別增加了8.42%和5.23%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2 載銅膨潤土對杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌、沙門氏菌及菌液pH值的影響（見表4）

表4 載銅膨潤土對杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌及其菌液中pH值的影響

3.2.1 載銅膨潤土對杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，大腸桿菌菌落數降低了8.02%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對照組相比，大腸桿菌菌落數降低了3.86%；與載銅膨潤土組相比，大腸桿菌菌落數增加了4.53%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2.2 載銅膨潤土對杜洛克×斯格豬糞便中沙門氏菌的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，沙門氏菌菌落數降低了9.67%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對照組相比，沙門氏菌菌落數降低了4.37%，與載銅膨潤土組相比，沙門氏菌菌落數增加了5.87%，差異顯著（P＜0.05）。

3.2.3 載銅膨潤土對杜洛克×斯格豬糞便中菌液pH值的影響

載銅膨潤土組與對照組相比，菌液中pH值降低了5.30%，差異顯著（P＜0.05）；高銅組與對照組相比，菌液中pH值降低了2.09%；與載銅膨潤土組相比，菌液中pH值增加了3.39%，差異顯著（P＜0.05）。

4 討論

膨潤土的可膨脹性層狀結構和非均勻性的電性分布，可以對消化道內的一些病毒、病菌和毒素產生較強的選擇性吸附作用，同時能加強腸胃粘膜屏障，保持腸道微生物生態平衡。由于膨潤土具有吸附性，所以它能夠吸附飼料中和進入動物腸胃中的有害元素、凈化動物腸胃環境，對動物排泄物起到干燥、吸附和除臭等作用。一定濃度的膨潤土（1%～3%）可以用作動物腸胃的吸附劑，用于清除動物體內的重金屬和放射性同位素。

膨潤土是一種雙八面體層狀結構的天然納米級鋁硅酸鹽礦物，具有良好的分散性與陽離子交換能力，十分適合于用作各種無機抗菌劑的載體。通過吸附、離子交換反應把抗菌性銅離子植入蒙脫石晶格，制成載銅蒙脫石，并使蒙脫石在搭載銅離子后表面剩余正電荷，從而提高其吸附帶負電荷的細菌的能力；另一方面，利用蒙脫石巨大的比表面積及其緩釋效應，通過抗菌性銅離子的溶出而具有很強的吸附、殺菌能力。

本試驗的研究結果表明：①高銅對杜洛克×大白豬的影響效果沒有杜洛克×斯格豬好，這可能與豬的品種及其對營養物質的利用程度有關，具體原因還有待進一步研究。②載銅膨潤土組對杜洛克×斯格豬而言效果好于杜洛克×大白豬，主要原因是杜洛克×斯格豬吸收營養的水平及其對病原菌的抵抗力要好于杜洛克×大白豬，具體詳細的機理還有待進一步研究。

載銅膨潤土的抗腹瀉作用在于其生物利用度的提高，以及能被粘膜很好吸收利用，保護粘膜，進而使腸道內環境發生改變，有益菌數量增加。此外，因菌液中的pH值處于中性偏酸，它相對于中性環境下細菌的生存能力較弱些。然后，因杜洛克×斯格豬較杜洛克×大白豬在生長性能方面有其獨特的優點，即生長發育快，飼料報酬高，發病率低，因而對病原菌的抵抗力較高。但是，對于杜洛克×斯格豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌含量較少，不僅與豬的品種及其對營養價值的利用有關，而且還與豬所處的環境密不可分，具體確切的原因還有待進一步研究。

14篇，刊略，需者可函索）