蛋白質螯合銅對育成蛋雞肝臟及血液某些生化指標的影響

張彩英 曹華斌 李浩棠 郭小權 胡國良

銅是動物生長所必需的微量元素之一，在機體造血、新陳代謝、生長繁殖、維持正常生產性能、調節機體免疫功能等方面具有不可替代的作用；銅還是體內許多酶的重要組成成分。高銅添加劑因具有良好的促生長作用，被廣泛應用于養殖業[1]。動物長期攝入高銅日糧，會導致銅在組織，尤其是肝臟的蓄積，嚴重時出現貧血，引起中毒，甚至導致死亡[2]。高銅對豬的促生長作用已得到大家的公認,但對于家禽 ,研究結果很不一致[3-4]。因此,本試驗擬通過在基礎日糧中添加不同劑量的蛋白質螯合銅，觀察其對育成蛋雞肝臟和血液某些生化指標的影響，為生產上選擇蛋白質螯合銅的添加劑量提供參考依據。

1 材料和方法

1.1 試驗動物與分組

將9周齡健康海藍褐蛋雞216只，隨機分成6組，每組設3個重復，每個重復12只，放入按防疫要求消毒后的3層籠舍中飼養，每籠12只。

1.2 試驗日糧及試驗設計

選用蛋白質螯合銅(百樂銅 Bioplex Copper，實測銅含量10%，由美國奧特奇生物技術公司生產)作為銅源，在相同日糧基礎上添加蛋白質螯合銅（以銅量計），第Ⅰ組 0 mg/kg，第Ⅱ組(對照組)6.5 mg/kg，第Ⅲ組 15 mg/kg，第Ⅳ組 30 mg/kg，第Ⅴ組 60 mg/kg，第Ⅵ組125 mg/kg。按常規程序進行免疫、驅蟲，每日飼喂兩次，自由采食與飲水，定期清理糞便。預試期7 d，正式試驗期35 d。基礎日糧配方及營養水平見表1。

表1 基礎日糧配方及營養水平（風干基礎）

1.3 樣品的采集與保存

1.3.1 血液樣品

在蛋雞12、14、16周齡的最后1 d，從各組隨機選取3只雞（每重復1只），翅下靜脈采血10 ml，析出血清，分裝于去離子水洗凈的干燥青霉素小瓶中，置-20℃冰箱保存，用于血清生化指標的測定。

1.3.2 組織樣品

在蛋雞12、14、16周齡的最后1 d，從各組隨機選取3只雞（每重復1只），頸靜脈放血致死，取肝臟樣品5 g左右，包裝于塑料樣品袋中，置于-20℃冰箱保存，用于測定肝臟蛋白含量及Cu/Zn-SOD、AST、ALT的活力。

1.4 檢測方法

1.4.1 血清生化指標測定

測定血清中丙氨酸轉氨酶（ALT）、天門冬氨酸轉氨酶（AST）、銅鋅超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）的活性測定：把低溫保存的血清樣品在室溫下解凍，按試劑盒（購自南京建成生物工程研究所）說明書方法進行。

1.4.2 肝臟組織生化指標測定

取肝組織塊0.5 g在冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用濾紙吸干，稱重，放入5 ml的小燒杯內。用移液槍移取3.5 ml冷的生理鹽水于小燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃組織勻漿器中，再用1 ml冷的生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的組織碎塊，一起倒入勻漿器中進行勻漿，充分勻碎，使組織勻漿化。制備好的10%勻漿液經4000 r/min離心15～20 min，取上清液備用。

取按上述方法制備的勻漿液用754紫外分光光度計測定肝臟組織Cu/Zn-SOD、ALT、AST的活性。

1.5 統計分析

數據均以平均值±標準差形式表示，差異顯著性分析采用DPS統計軟件。

2 結果與分析

2.1 血清和肝組織Cu/Zn-SOD活性變化（見表2）

由表2可知，不同周齡時隨著螯合銅添加水平的升高血清和肝臟Cu/Zn-SOD活性變化都是先上升后降低，Ⅲ組或Ⅳ組活性最高，Ⅰ組最低。血清Cu/Zn-SOD 活性：Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對照組（P＜0.01），Ⅰ組和Ⅵ組顯著或極顯著低于對照組（P＜0.05或P＜0.01）。肝臟Cu/Zn-SOD活性：Ⅰ組極顯著低于對照組（P＜0.01），14周齡時，Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于對照組（P＜0.05），16周齡時，Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），Ⅵ組極顯著低于對照組（P＜0.01）。

表2 血清和肝組織Cu/Zn-SOD活性變化

2.2 血清和肝組織AST活性變化（見表3）

從表3可知，不同周齡時隨著螯合銅添加水平的升高血清和肝組織AST的活性均呈現先降低后升高的趨勢，Ⅵ組活性最高，Ⅳ組最低。血清AST活性：Ⅵ組極顯著高于對照組（P＜0.01），Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組都極顯著低于對照組（P＜0.01）。肝組織AST活性：Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。Ⅰ組和Ⅵ組顯著或極顯著高于對照組（P＜0.05或P＜0.01）。

表3 血清和肝組織AST活性變化

2.3 血清和肝組織ALT活性變化（見表4）

從表4可知，ALT活性：Ⅵ組＞Ⅰ組＞對照組，活性最低的是Ⅲ或Ⅳ組，Ⅵ組肝組織ALT極顯著高于對照組（P＜0.01），Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組與對照組相比差異不顯著（但16周齡時肝臟ALT活性Ⅰ組顯著高于對照組）。

3 討論

3.1 蛋白質螯合銅對血清和肝臟Cu/Zn-SOD活性的影響

Cu/Zn-SOD位于真核細胞漿內，分子量為2000，由2個亞基組成，每個亞基含1個銅與1個鋅，鋅原子與酶分子的結構穩定性有關，銅原子與酶的活性有關。根據Cu/Zn-SOD活性變化，可敏感反映出機體銅營養狀態。Cu/Zn-SOD廣泛存在于動物組織中，是抗氧化代謝防御體系所必要的組成成分。Cu/Zn-SOD是抗自由基毒性的關鍵酶之一，可有效地清除體內的自由基。Lauridsen(2002)等認為，銅有助于改善組織抗氧化能力，高銅對Cu/Zn-SOD有極顯著的影響，補銅組比缺銅組肝臟Cu/Zn-SOD活性提高了2.7倍，一定范圍內適當提高日糧銅水平可提高動物組織中Cu/Zn-SOD活性[5]，本試驗得到相同的結果。本試驗各階段0添加組血清和肝臟Cu/Zn-SOD活力都極顯著低于6.5 mg/kg組，說明當動物日糧缺銅時，可降低Cu/Zn-SOD活性，趙昕紅等(1999)[6]也有相似報道。

表4 血清和肝組織ALT活性變化

本試驗表明，日糧添加銅水平為15、30 mg/kg時，能增強血清和肝臟Cu/Zn-SOD活性，添加銅水平從60 mg/kg提高到125 mg/kg時，血清和肝組織Cu/Zn-SOD活性分別下降。這說明Cu/Zn-SOD活性并非隨日糧銅水平增加而呈線性上升。馬得瑩等（2003）[7]報道，當日糧銅含量從125 mg/kg提高到250 mg/kg時，豬血液中Cu/Zn-SOD活性下降了9%。趙麗等（2008）[8]報道，日糧銅水平為100 mg/kg和200 mg/kg時，能增強血清Cu/Zn-SOD活性，當銅添加量達600 mg/kg時，血清Cu/Zn-SOD活性顯著下降。由此可見，日糧銅過高會導致動物組織與血液中Cu/Zn-SOD活性下降，體內自由基蓄積，引起脂酯氧化，導致肝臟等組織損傷。

3.2 蛋白質螯合銅對血清和肝臟AST和ALT活性的影響

本試驗結果表明，日糧添加銅水平為125 mg/kg時，血清和肝組織AST和ALT活性顯著或極顯著高于其它組，且隨日齡增長顯著升高，這與崔恒敏等（2005）[9]報道的血清AST活性隨銅中毒劑量的增加而升高的結果一致。0添加組AST和ALT活力也高于其它組，15、30、60 mg/kg組酶活性相對較低。AST和ALT都是細胞內酶，正常情況下，細胞內酶由于細胞膜的屏障作用不易逸出，僅由于細胞的不斷更新而少量釋放出來。只有當細胞受到損傷，細胞膜的通透性升高才會使細胞內酶釋放出來的速度大大增加，酶活性才會明顯上升。

AST存在于肝臟、心肌、骨骼肌、腎和腦等組織中；ALT存在于機體肝、心肌、腦、骨骼肌、腎及胰腺等組織細胞內，但以肝細胞及心肌細胞含量最多。在細胞中AST和ALT主要存在于線粒體及胞漿內，是肝細胞合成蛋白質不可缺少的酶。當肝細胞受損時，血清AST和ALT活性升高，故AST和ALT活性的改變是肝臟受到銅毒性損害的一種應答反應[10]，血清AST和ALT活性的升高也是肝臟受損、功能障礙的一種反應，能很好地評估肝細胞的功能狀況，對肝臟疾病診斷有較高特異性。

4 結論

日糧中添加15 mg/kg和30 mg/kg銅可顯著提高育成蛋雞的抗氧化功能和肝臟功能，添加125 mg/kg銅可造成肝臟的損傷，因此，在本試驗的基礎日糧下，15～30 mg/kg銅（以蛋白質螯合銅的形式）為育成蛋雞最適宜的添加范圍。

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[8]趙麗,崔恒敏,楊帆,等.日糧中添加高水平銅對雛鴨血液指標的影響[J].中國家禽,2008,30(5):24-28.

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