乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量關系的分析

郭 卉，董瑤佳，劉曉峰，陳雪禮

(1、九江市第一人民醫院檢驗科，江西 九江332000；2、九江市婦幼保健醫院，江西 九江 332000)

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的傳染病，由乙型肝炎病毒感染引起。我國是乙型肝炎病毒感染高發地區，乙肝病毒攜帶者數量眾多。本研究旨在探討乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量之間的關系，了解本地區乙肝感染情況，為乙肝病情的臨床判別和療效評估提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2009年12月在江西省九江市第一人民醫院門診及住院的患者，要求于一周內進行乙肝五項(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及 HBVDNA檢驗，共選取1020例，年齡8～85歲，其中男652例，女368例。

1.2 觀察指標 乙肝五項：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb；HBV-DNA 含量。

1.3 檢測儀器 科華ST-360酶標儀(上海科華試驗科技有限公司)；DNX-9620洗板機(北京普朗新技術有限公司)；DA-7600 PCR擴增熒光定量檢測儀(中山大學達安基因股份有限公司)。

1.4 檢測試劑 乙肝標志物檢測試劑由北京萬泰生物有限公司提供；HBV-DNA檢測試劑由廣州中山大學達安基因股份有限公司提供。

1.5 檢測方法

1.5.1 乙肝五項檢測(ELISA法)

1.5.2 HBV-DNA含量檢測(熒光定量PCR法)。DNA提取：吸取血清40μl至5ml離心管中，再加入40μl DNA提取液，充分混勻，沸水浴10min(誤差不超過1min)，轉至4℃靜置6～8h，10000r/min離心5min；取上清液 5μl進行 PCR反應。 擴增：將點好樣的PCR管置于PCR儀，93℃2min預變性，然后按 93℃ 45s→55℃60s，反應 10個循環，再按 93℃30s→55℃45s反應30個循環。每批PCR試驗均做陰、陽性對照、臨界陽性。檢測靈敏度為≥0～500IU/ml，參考范圍0～500IU/mL。

1.6 統計學方法 所有數據采用SPSS 13.0統計軟件進行分析，多組數據之間的比較采用K-W檢驗，兩組數據之間采用SNK檢驗，HBeAg陽性和HBV-DNA陽性的相關性采用Spearman等級相關。

2 結果

2.1 乙肝血清學標志物與HBV-DNA的關系

將乙肝五項檢測結果分為六組。A：全陰；B：HBsAb(+)；C：HBsAg+HBeAg(+)；D：HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)；E：HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)；F：HBsAg+HBcAb(+)。

從表1中可以看出HBsAg+HBeAg(+)組和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)組的HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA平均含量均明顯高于其他各組。經K-W檢驗對各組HBVDNA含量進行比較，得出HBsAg+HBeAg(+)組和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)組與其他各組相比差異具有統計學意義(P=0.001)。

表1 乙肝血清學標志物和HBV-DNA的關系

2.2 HBeAg陽性與HBV-DNA陽性的關系

采用Spearman等級相關計算HbeAg(+)與HBV-DNA檢測率的相關性， 相關系數 γ 為 0.805，P＜0.05，Kappa值為0.408。說明HbeAg(+)和HBV-DNA(+)的相關性較強。

3 討論

從本次調查分析結果可以看出，HBsAg+HBeAg(+)和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)兩組的HBV-DNA陽性率明顯高于其他各組，HBV-DNA平均含量也高于其他各組，并且這兩組的HBV-DNA含量與其他各組之間的差異具有統計學意義(P＜0.001)，這說明 HBsAg+HBeAg(+)與 HBsAg+HBeAg+HB-cAb(+)患者HBV-DNA具有較高的復制水平，是具有傳染性的重要標志。同時，通過分析HBeAg陽性和HBV-DNA陽性相關性，可以得出這兩者有著很好的一致性(P＜0.001)。在本次分析過程中發現有4例HBV-DNA檢測結果為陰性但HBeAg檢測為陽性，這可能是由于患者體內的HBV-DNA含量已經很低，而之前表達的HBeAg尚未被完全降解，仍處于較高的水平；也有可能與HBeAg檢測的試劑質量相關。

表2 HBeAg和HBV-DNA檢測陽性檢出率比較

HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)組和 HBsAg+HBcAb(+)組的HBV-DNA陽性檢出率分別為43.38﹪和59.62﹪，HBV-DNA的平均含量分別為5.75E+05和1.96E+06，這說明當患者HBsAg和HBcAb為陽性、HBeAg為陰性時，無論HBeAb是否為陽性仍有HBV-DNA陽性檢出，說明仍有HBV存在或復制，因此HBeAg陰性并不能代表病毒停止復制或病情好轉，可能是此種情況下病毒復制水平較低。

在乙肝五項全陰組中，有7例HBV-DNA陽性，陽性檢出率為11.67﹪，出現這種情況可能的原因是：⑴HBV發生前C區基因突變或機體發生特異性免疫耐受[3]；⑵ELISA法敏感性較低，在患者感染初期HBV-DNA含量較低，而FQ-PCR法檢測的靈敏度較高，因而應用ELISA法無法測出；⑶HB-sAg已清除，但HBV-DNA仍持續存在[4]。

在單獨HBsAb陽性組中有4例HBV-DNA陽性檢出，陽性率為7.25%，分析其原因可能為：⑴可能存在其他HBV變異型感染[5]；⑵長期多次反復小劑量接觸HBV未見或少見發病，而出現HBsAb陽性，但體內仍可存在低拷貝的HBV顆粒。⑶與全陰組的情況相同，HBsAg已清除，但HBV-DNA仍持續存在。

從本文的分析可以看出，乙肝五項各模式分組中HB-sAg＋HBeAg(陽性)與 HBsAg＋HBeAg＋HBcAb(陽性)組患者的HBV-DNA檢出率及HBV-DNA平均含量最高；HBeAg陽性和HBV-DNA陽性有較高的相關性。因此綜合分析乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量之間的關系有助于臨床上更好地了解患者的病情及判斷治療效果。

[1]彭文偉.傳染病學[M].第6版,北京:人民衛生出版社,2005:21-50.

[2]孫 華,張 劍,曹美芳.HBV-DNA熒光定量檢測的臨床意義[J].中國民康醫學,2006,18(12):1006-1007,1009.

[3]朱傳武.HBV前C/C基因變異與宿主T細胞免疫的關系[J].國外醫學免疫學分冊,2001,24(6):289-290.

[4]湯立新.血清HBVDNA熒光定量PCR檢測與乙肝病毒標志物模式的相關性[J].職業衛生與病傷,2007,22(2):141-142.

[5]閻 震,張 軍,韓曉靜.熒光定量檢測HBVDNA與ELISA檢測乙肝標志物模式的比較分析[J].中國醫藥導報,2007,4(24):110-111.