落新婦提取物的制備與質(zhì)量控制方法研究

王錦紅，吳朦俊

（貴州省畢節(jié)地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，貴州 畢節(jié) 551700）

落新婦具有活血、散瘀、止痛的功效，用于治療跌打損傷、風(fēng)濕痹痛、筋骨疼痛。落新婦提取物在愈傷靈膠囊中作為原料藥入藥，原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)其制備和質(zhì)量控制方法[1]。為了有效控制制劑質(zhì)量，現(xiàn)將其制備工藝及質(zhì)量控制方法報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

TQWZ提取濃縮機(jī)組（浙江瑞安回方藥化機(jī)械有限公司）；美國(guó)SSI型高效液相色譜儀，包括Model 500型可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，ScriesⅢ型輸液泵，SDC15型注溫箱，Anastar工作站；薄層層析硅膠G（青島海洋化工廠）；ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）。巖白菜素對(duì)照品（批號(hào)為110765-200205，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）；甲醇（色譜純），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備方法

取落新婦根，加30%的乙醇回流提取3次，第1次加5倍量的30%的乙醇，浸漬1 h，第2次、3次各加4倍量30%的乙醇，每次提取2 h；濾過(guò)，合并提取液，濾液回收乙醇，揮凈殘留乙醇至相對(duì)密度為1.01（80℃測(cè)），4℃下冷藏72 h；傾出上層母液，將沉淀抽濾得黃色結(jié)晶，結(jié)晶于80℃干燥（水分在5.0%以下），再將母液4℃下冷藏36 h，棄去母液，將沉淀抽濾得黃色粉末，80℃干燥，合并兩次干燥物，稱重，即得落新婦提取物。

2.2 一般質(zhì)量控制

性狀：本品為黃色的結(jié)晶和粉末，味苦。鑒別[2]：取落新婦提取物15 mg，加5 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。取巖白菜素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜（TLC）法[2005年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水（11∶6∶2）的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同的顏色熒光斑點(diǎn)（圖1）。

檢查[3]：取本品，在105℃干燥至恒重，水分不得超過(guò)5.0%。

圖1 薄層色譜圖

2.3 巖白菜素含量測(cè)定[2]

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Lichrospher 5-C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm，江蘇漢邦）；流動(dòng)相:甲醇 - 水（24 ∶76）；流速:1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm；進(jìn)樣量：5 μL。在此條件下，理論塔板數(shù)以巖白菜素峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500，色譜圖見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，巖白菜素色譜峰與陰性對(duì)照品溶液色譜峰沒(méi)有重疊，對(duì)照品及供試品溶液色譜峰形良好。

圖2 高效液相色譜圖

2.3.2 溶液制備

精密稱取巖白菜素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含2.0 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取落新婦提取物約50 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，再加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3.3 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取質(zhì)量濃度為1.96 mg/mL的對(duì)照品溶液 1.0，2.0，3.5，5.0，6.5，9.0，10.0 μL，以峰面積 Y 和進(jìn)樣量 X（μg）進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程 Y=889 331.37X-80 636.99，r=0.999 5（n=7）。結(jié)果表明，巖白菜素進(jìn)樣量在 1.96 ～19.60 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取質(zhì)量濃度為1.96 mg/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.56%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱取同一批（批號(hào)為0901）樣品6份，每份50 mg，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法進(jìn)樣。結(jié)果平均相對(duì)百分含量為61.34%，RSD=0.92%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于常溫條件放置0，2，4，8，12 h時(shí)依法進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的 RSD為0.85%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：分別精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)為0901，含量為61.34%）6份，每份25 mg，精密加入質(zhì)量濃度為1.96 mg/mL對(duì)照品溶液10，8，6 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法進(jìn)樣，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.5 樣品測(cè)定

按擬訂方法測(cè)定樣品10批。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

巖白菜素是落新婦藥材的主要活性成分，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶，在熱的水或乙醇中溶解性增強(qiáng)，故以巖白菜素作質(zhì)量控制指標(biāo)。采用薄層色譜法鑒別提取物中巖白菜素，色譜分離度好；用烘干法可作水分控制；用高效液相色譜法測(cè)定落新婦提取物中巖白菜素含量，方法簡(jiǎn)便、靈敏、重現(xiàn)性好。因此，落新婦提取物的質(zhì)量控制方法可行。

根據(jù)10批樣品的測(cè)定結(jié)果，其工藝合理穩(wěn)定。為了有效控制落新婦提取物的質(zhì)量，暫訂落新婦提取率應(yīng)不低于25.0 g/kg，落新婦提取物含巖白菜素應(yīng)不低于45.0%。

表2 樣品含量測(cè)定

[1]WS3-13-1662-93，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[M].貴陽(yáng)：貴州科學(xué)技術(shù)出版社，2003：183.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄47.