反相高效液相色譜法測定氯沙坦鉀片的溶出度

高 紅，劉睿斌，劉俊敏

（重慶科瑞制藥有限責任公司研發中心，重慶 400060）

氯沙坦鉀（losartan potassium）是由美國默克公司開發的常用的抗高血壓藥，是第一個非肽類血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，氯沙坦鉀片是一種作用持續穩定、耐受性良好、安全的治療輕、中度原發性高血壓的藥物[1]。國外文獻未查到氯沙坦鉀片質量標準，國內現有的質量標準（新藥轉正標準）中采用分光光度法檢查其片劑溶出度。本試驗建立了高效液相色譜（HPLC）法測定氯沙坦鉀片的溶出度方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，2996檢測器，Empower色譜工作站；1601型紫外分光光度計；梅特勒-托利多XS電子天平。氯沙坦鉀對照品（批號為100597-200501，含量為100.0%，中國藥品生物制品檢定所）；氯沙坦鉀片（重慶科瑞制藥有限責任公司，批號為080201）；甲醇為色譜純；其他為分析純。

2 方法與結果

2.1 紫外分光光度（UV）法[2]

取本品，照溶出度測定法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄第二法[3]附錄73]，以水900 mL為溶劑，照UV法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄A][3]附錄22，在256 nm的波長處分別測定吸光度。計算出每片的溶出量。

2.2 反相高效液相色譜（RP-HPLC）法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（含0.05 mol/L磷酸二氫鉀，用磷酸調pH至3.2，64∶36）；檢測波長：250 nm；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。理論塔板數按氯沙坦鉀峰計算應不低于4 000。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取氯沙坦鉀對照品0.011 g，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度制成每1 mL含55 μg的溶液，即得對照品溶液。照溶出度測定法[2005年版《中國藥典（二部）》附錄第二法][3]，以水900 mL為溶劑，轉速為50 r/min，依法操作，經45 min時，取溶液，濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

檢測波長選擇：稱取樣品適量，加水溶解制成約含氯沙坦鉀55 μg/mL的溶液，按[2005年版《中國藥典（二部）》附錄ⅣA UV法][3]在190～400 nm波長范圍測定吸光度。由其紫外吸收光譜圖可見，樣品溶液在上述范圍內無最大吸收峰，228及250 nm波長處出現較平坦肩峰，為與含量及有關物質測定波長一致，故選擇250 nm作為檢測波長。

線性關系考察：精密稱取氯沙坦鉀對照品0.011 43 g，加水制成質量濃度為0.114 3 mg/mL的貯備液，分別精密吸取1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL，置10 mL量瓶中，加水制成每1 mL中含氯沙坦鉀 11.43，34.29，57.15，80.01，102.87，114.3 μg 的溶液，依次進樣測定，以氯沙坦鉀對照品質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，回歸方程為 A=13 911.545 C+6 367.589，r=0.999 9（n=6）。結果表明氯沙坦鉀質量濃度在 11.43～114.3 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密稱取質量濃度為57.15 μg/mL的對照品溶液，重復進樣測定峰面積。結果的 RSD為0.19%（n=6）。

穩定性試驗：將質量濃度為0.55 mg/mL的供試品溶液在室溫放置，分別于配制后的 0，1，2，3，4，8 h時進樣測定。結果峰面積的RSD為0.36%（n=6），表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品6份（約82 mg），精密稱定，置250 mL量瓶中，分別加入約14，22，28 mg的氯沙坦鉀對照品各2份，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測定，按外標法計算含量，計算回收率。結果見表1。

表1 氯沙坦鉀加樣回收試驗測定結果（n=6）

色譜峰純度檢查：根據Waters色譜工作站的色譜峰純度理論以及其Empower PDA軟件，計算樣品的氯沙坦鉀色譜峰的純度，純度角（Purity Angle）為 0.116，純度閾值（Purity Threshold）為 0.304，二者較小，且前者小于后者，表明被測成分氯沙坦鉀峰光譜均勻，純度較高。

2.4 溶出度結果比較

用《國家藥品標準·新藥轉正標準》（第37冊）中的UV法分別在 5，10，20，30，45，60 min 時取樣測定，再用 RP-HPLC 法測定樣品在上述時間段的溶出情況，結果見表2?？梢?，用RP-HPLC法代替標準中的UV法是可行的。

表2 溶出度測定曲線測定結果

3 討論

在現行藥品質量標準中，一方面，檢測波長采用256 nm，既不是最大吸收，又不是肩峰吸收，測定誤差相對較大，而本試驗建立的RP-HPLC法，改測定波長為肩峰吸收250 nm，與含量及有關物質測定波長一致；另一方面，過濾后的樣品需稀釋后測定，而改為RP-HPLC法時則不需要稀釋，簡化了操作，減少了測定誤差，結果更準確。

采用RP-HPLC法測定氯沙坦鉀片的溶出度，方法簡便，結果準確，重現性好，對今后該品種的質量標準的進一步完善提供了很好的參考。

[1]曾群英，麥煒頤.氯沙坦治療輕中度原發性高血壓病的臨床研究 （附57 例報告）[J]. 新醫學，1999，30（6）：317.

[2]WS1-（X-144）-2003Z，國家藥品標準·新藥轉正標準[S].

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005.