頂空毛細管氣相色譜法測定馬來酸桂哌齊特中的殘留溶劑

魏 莉，姜建國，宋更申

（1.河北省食品藥品監督管理局藥品審評認證中心，河北 石家莊 050091； 2.河北省藥品檢驗所，河北 石家莊 050011）

馬來酸桂哌齊特（cinepazide maleate）為新一代哌嗪類藥物，在歐洲、日本等發達國家應用廣泛，已成為治療心腦血管疾病的一線藥物[1]。關于其殘留溶劑的研究，尚未見國內文獻報道。馬來酸桂哌齊特在合成過程中使用了二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶等有機溶劑，本試驗根據人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）[2]的指導原則和2005年版《中國藥典（二部）》[3]的相關規定，采用頂空氣相色譜法，以水為溶劑，同時測定上述4種溶劑。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀（FID檢測器）；Agilent 7694E型頂空進樣器；Sartorius BP211D型電子天平。二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均為色譜純（美國Tedia公司）；試驗用水為超純水；馬來酸桂哌齊特（國內某公司，批號分別為 0801001，0801002，0801003）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為 HP-FFAP 毛細管柱（30 m ×530 μm，1 μm）；柱溫為130℃；FID檢測器，檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比1∶1，進樣口溫度200℃；載氣為氮氣，流速3.5 mL/min；頂空進樣，平衡溫度90℃，平衡時間30 min，頂空瓶加壓時間0.2 min，進樣時間1 min，定量環體積1 mL，定量環溫度100℃，傳輸線溫度110℃。

2.2 溶液制備

精密稱取二氯甲烷60 mg、乙腈41 mg、甲苯 89 mg、吡啶 20 mg，置同一100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。精密量取對照品貯備液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 mL，取無水硫酸鈉約1 g，精密稱定，置同一20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，即得對照品溶液。取樣品約0.5 g，無水硫酸鈉1 g，精密稱定，置同一20 mL頂空進樣瓶中，精密加水5 mL，密封，振搖使溶解，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗：取對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行分析，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶分離度均大于1.5，理論塔板數均不低于5 000。

線性關系考察：分別精密量取對照品貯備液 10，10，5，5，5，2 mL，分別置 10，25，25，50，100，100 mL 量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按2.1項下色譜條件進行分析，以峰面積A為縱坐標、質量濃度 C為橫坐標進行線性回歸。結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n=6）

精密度試驗：精密量取對照品溶液5 mL，置20 mL頂空進樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按2.1項下的色譜條件進行分析。結果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面積的 RSD分別為1.1%，2.3%，0.9%，1.8% （n=6）。

重現性試驗：取樣品（批號為0801001）約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空進樣瓶中，依法分析。結果乙醚含量為0.02%，RSD為1.1% （n=6），二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶均未檢出。

回收率試驗：精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號為0801001）0.5 g，置20 mL頂空進樣瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液0.40，0.50，0.60 mL，各3份，再分別用水稀釋至5.0 mL，依法分析，按外標法計算。結果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的平均回收率分別為 98.1%，96.6%，98.5%，99.0%，RSD分別為1.1% ，2.5%，1.4%，1.9% （n=9）。

穩定性試驗：精密量取2.2項下對照品溶液，于室溫下放置0，1，2，4，8，12 h，分別依法分析。結果二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶峰面積的 RSD分別為1.3%，2.6%，2.1%，1.8%（n=6），表明溶液在12 h內穩定。

2.4 檢測限試驗

用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為3時計算二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的最低檢出限。結果最低檢出限分別為2.23，9.85，0.84，3.83 μg/mL。

2.5 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行分析，按外標法計算4種有機溶劑的含量。結果樣品中二氯甲烷的殘留量均為0.010%，甲苯的殘留量均為0.013%，乙腈、吡啶均未檢出。

3 討論

色譜柱選擇：試驗中先后選擇了DB-1，HP-5，HP-FFAP等不同極性的色譜柱，以在HP-FFAP柱上的峰形和分離度最佳。

頂空條件選擇：考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時間對樣品測定的影響，結果表明，樣品在70，80，90℃的頂空溫度下均穩定，為了提高檢測靈敏度，故選擇90℃作為頂空溫度；本品在30，40 min的頂空平衡時間內得到的峰面積基本一致，故選擇30 min作為頂空平衡時間。研究中發現頂空瓶中溶液的體積對色譜峰面積有較大影響，分別考察了20 mL頂空瓶中溶液的體積分別為2，3，5，6 mL，以及 10 mL 頂空瓶中溶液的體積分別為 1，2，3 mL，發現選擇20 mL頂空瓶中溶液的體積為5 mL時，各色譜峰的峰面積最大。有關最佳氣液平衡狀態還有待于進一步研究。

無水硫酸鈉鹽析效應：在未添加無水硫酸鈉的情況下，乙腈和吡啶的靈敏度較低，加入無水硫酸鈉后，由于鹽析作用靈敏度上升，二氯甲烷、乙腈、甲苯、吡啶的靈敏度分別提高了1.1，1.1，1.2，2.4倍，鹽析作用對吡啶靈敏度的提高最明顯。

[1]張小霞，韓培紅.馬來酸桂哌齊特的藥理作用及臨床應用研究[J].中國藥房，2007，18（26）：2 060.

[2]ICH指導委員會.藥品注冊的國際技術要求-質量部分[M].周海鈞，譯.北京：人民衛生出版社，2006：79.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005：附錄54.