反相離子對高效液相色譜法測定鹽酸溴己新及其片劑的含量

鄭 凱 ，王玉紅 ，楊 闊

（1.遼寧省朝陽市藥品檢驗所，遼寧 朝陽 122000； 2.中國藥科大學(xué)，江蘇 南京 212000）

鹽酸溴己新及其片劑的現(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中分別用非水滴定法和紫外分光光度法測定含量，操作步驟煩瑣。筆者改用反相離子對高效液相色譜（RP-IP-HPLC）法進(jìn)行測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

SP8810型高效液相色譜儀，包括SP 100型紫外檢測器，N2010型色譜工作站。鹽酸溴己新對照品（批號為100427-200301，中國藥品生物制品檢定所）；鹽酸溴己新原料（武漢鑫華遠(yuǎn)科技發(fā)展有限公司，批號分別為20071202，20071105，20080112）；鹽酸溴己新片（揚(yáng)州中寶制藥有限公司，批號分別為080416，080615，080526）；甲醇（色譜純）；磷酸、三乙胺、庚烷磺酸鈉（分析純），水（重蒸餾水）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：KromasilC18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相[2]：水 -甲醇-三乙胺（含5 mmol庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)pH至3.4，30∶70 ∶0.3）；流速：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：249 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。理論塔板數(shù)以鹽酸溴己新計不低于5 000。

2.2 溶液制備

精密稱取對照品20.10 mg，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密稱取原料適量（約相當(dāng)于鹽酸溴己新20 mg），置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為原料供試品溶液。取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸溴己新20 mg），置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精取續(xù)濾液5 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為片劑供試品溶液。稱取處方量的空白輔料，按供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗：取2.2項下4種溶液各20 μL，進(jìn)樣并分析。結(jié)果表明，在該法色譜條件下空白輔料不干擾樣品測定（圖1）。

專屬性試驗：取鹽酸溴己新片粉4份，經(jīng)堿、酸、強(qiáng)熱及光照破壞，將其破壞產(chǎn)物照供試品溶液制備，依法進(jìn)樣。結(jié)果在該法色譜條件下鹽酸溴己新與各降解產(chǎn)物能很好地分離。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品貯備液 1，2，5，10，15，20 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測定。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=397.96+261 165.93 X，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明鹽酸溴己新進(jìn)樣量在0.080 4～1.608 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗：取對照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣。結(jié)果平均峰面積為105 180，RSD=0.62%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，在室溫條件下放置，分別于0，4，8，12，24 h 時測定。結(jié)果平均峰面積為 105 398，RSD 為0.71%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：精密稱取同一批樣品，依法測定含量。結(jié)果平均含量為98.3%，RSD為0.66%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品6份，分為3組，每組分別精密加入對照品適量，配成低、中、高3個質(zhì)量濃度，按片劑供試品溶液制備，依法測定并計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取對照品溶液、原料供試品溶液和片劑供試品溶液各20 μL，進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果3批原料中鹽酸溴己新含量分別為99.6%，99.8%，99.8%；3批片劑中鹽酸溴己新含量分別為99.3%，98.3%，99.6%。

表1 鹽酸溴己新加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

3 討論

紫外掃描發(fā)現(xiàn)，以流動相為溶劑，鹽酸溴己新的紫外光譜在249 nm波長處有最大吸收峰，故在此波長處測定含量。

利用RP-IP-HPLC法測定鹽酸溴己新及其片劑的含量，通過加入離子對試劑庚烷磺酸鈉，使保留時間由2.9 min延長至6.9 min，有利于雜質(zhì)峰與主峰很好地分離。

經(jīng)破壞試驗驗證，在該法色譜條件下，主峰與降解產(chǎn)物能達(dá)到良好分離，能夠排除降解產(chǎn)物的干擾，專屬性較強(qiáng)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：585.

[2]陳 睿，田 蘭，劉惠軍，等.高效液相色譜法測定鹽酸溴己新及其片劑的含量和有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2007，27（1）：132.