尼可剎米注射液細菌內毒素檢查法的建立

張廣偉，周繼春

（河南省食品藥品檢驗所，河南 鄭州 450003）

尼可剎米注射液為中樞興奮藥，主要用于治療疾病或呼吸抑制藥中毒引起的呼吸及循環衰竭[1]，收載于2005年版《中國藥典（二部）》，但并無熱原或細菌內毒素檢查方法。天津藥業焦作有限公司的藥品注冊標準中增加了熱原檢查項目，但在實際操作中經常出現注射本品后兔體溫急劇升高的現象，分析原因可能是注射速度過快所致不良反應，為使標準更適宜操作、可控，該公司委托我所建立尼可剎米注射液細菌內毒素檢查方法。現報道如下。

1 儀器與試藥

DC3A型干式恒溫器（南京三愛斯技術開發有限公司）；ZH-2型自動漩渦混合器（天津藥典標準儀器廠）。尼可剎米注射液，（規格 1.5 mL ∶0.375 g，批號為 07070122，07091021，08032431，08051531，08062222，08110121，天津藥業焦作有限公司）。鱟試劑（TAL，批號為0710262、規格為0.5 mL/支、靈敏度 0.5 EU/mL，批號為0712270、規格為0.5 mL/支、靈敏度0.125 EU/mL；湛江安度斯生物有限公司；批號為0705300、規格為0.5 mL/支、靈敏度 0.25 EU/mL，批號為 0901122、規格為 0.5 mL/支、靈敏度0.125 EU/mL，湛江博康海洋生物有限公司）。細菌內毒素工作標準品（WSE，規格為 120 EU/支，批號為 150601-200862），細菌內毒素檢查用水（BET用水，批號為2008-4，規格為10 mL/支）均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結果

2.1 供試品細菌內毒素限值（L）確定

根據細菌內毒素限值的計算公式：L=K/M，其中 K為人每kg體重每h最大可接受的內毒素劑量，注射劑的K值為5 EU/（kg·h），M為人用每kg體重每h的最大供試品劑量，人均體重按60 kg計算。參照該藥品說明書及《臨床用藥須知》[1-2]，本品成人1次最大給藥劑量為1 250 mg/（60 kg·h），則L=K/M=5 EU/（kg·h）/1 250 mg/（60 kg·h）=0.24 EU/mg。考慮到本品為急救用藥，應標準從嚴，結合干擾試驗結果，確定 L為0.15 EU/mg。

2.2 TAL靈敏度復核

按照2005年版《中國藥典（二部）》附錄的要求復核所用TAL進行復核，結果均符合規定。見表1。

2.3 干擾預試驗

將樣品用 BET用水進行倍比稀釋，分別稀釋 2，4，8，16，32，64，128，256，512 倍，制成質量濃度為 125，62.5，31.25，15.62，7.8，3.9，1.95，0.98，0.49 mg/mL的溶液，將上述稀釋溶液用湛江安度斯生物有限公司生產的TAL（靈敏度為0.5 EU/mL，批號為08110121）依法進行干擾試驗預試驗[3]。結果見表2。可見，供試品溶液在0.49 mg/mL及其以下質量濃度時對試驗可能不造成干擾。為了較準確地確定最大不干擾濃度，將樣品分別制成質量濃度為2.0，1.0，0.9，0.8，0.7，0.6，0.5 mg/mL 的溶液，再次進行干擾試驗預試驗，結果樣品稀釋至0.9 mg/mL時即不再對試驗產生干擾。

表1 TAL靈敏度復核結果

表2 樣品細菌內毒素干擾預試驗結果

表3 尼可剎米注射液細菌內毒素干擾試驗結果

2.4 干擾試驗

根據預試驗結果，將3個批號的樣品稀釋至0.9 mg/mL，分別取上述2個廠家的 TAL（安度斯 λ0.5，海洋 λ0.25），依法進行干擾試驗[2]。結果見表3。可見，樣品高質量濃度時對TAL與細菌內毒素的凝集反應有干擾作用，經稀釋至0.9 mg/mL時即可排除干擾作用，Et均在0.5～2.0 ES之間，其最大不干擾質量濃度為0.9 mg/mL。

表4 尼可剎米注射液細菌內毒素檢查結果

2.5 細菌內毒素檢查

分別選擇2個廠家的TAL（靈敏度為0.125 EU/mL），對上述3批樣品進行細菌內毒素檢查，結果均符合規定。見表4。

3 討論

對于提高尼可剎米注射液質量控制標準，筆者認為采用細菌內毒素檢查法較熱原檢查法更為合適，可避免熱原檢查法中尼可剎米所致家兔體溫升高的假陽性結果，因此建議廠家用細菌內毒素檢查法代替熱原檢查法對尼可剎米注射液進行質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知（化學藥和生物制品卷）2005年版[M].北京：人民衛生出版社，2005：54.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005：附錄ⅪE.

[3]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗標準操作規范[M].北京：中國醫藥科技出版社，2005：287.