膀胱移行細胞癌組織中 CX26、CK19的表達變化及意義

吳金生,劉偉光,欒志敏,祝增軍

(濰坊醫學院臨床學院,山東濰坊 261031)

膀胱移行細胞癌(BTCC)是尿路上皮最常見的腫瘤,術后復發率高,而且復發者伴有惡性程度增加和向浸潤型發展的傾向。近年研究表明,細胞周期細胞角蛋白 19(CK19)與其發生、發展和預后有著重要的關系。縫隙連接蛋白 26(CX26)是尿路上皮細胞表達的主要縫隙連接蛋白,具有顯著抑癌作用。2007年 5月 ～2009年 10月,我們采用免疫組織化學法檢測了 BTCC組織中 CX26、CK19蛋白的表達變化,并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 BTCC患者 40例,男 33例、女 7例,年齡 33.5～77.5歲；癌組織分化程度為高分化 12例,中分化 23例,低分化 5例；TNM分期 T1期 10例,T2期 21例,T3期 8例,T4期 1例；有淋巴轉移 7例,無淋巴結轉移 33例；患者均經病理確診,術前未行放化療,術中切除膀胱腫瘤組織。另收集 10例正常膀胱組織標本作為對照,取自膀胱結石及前列腺增生癥開放手術的患者。標本均經病理證實,10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm連續切片。

1.2 CX26、CK19蛋白檢測方法 采用免疫組化SABC法檢測,嚴格按試劑盒說明書操做,以 PBS代替一抗作為陰性對照。采用雙盲法對每張切片在高倍鏡(×400)下計數 5個視野,CX26蛋白高表達于所有正常上皮組織,主要定位于細胞膜且分布均勻,陽性細胞細胞膜呈淡黃色；CK19主要分布于膀胱移行上皮細胞和腫瘤細胞的胞質和胞膜中,陽性細胞細胞質呈棕黃色。根據染色強度計分:0分為無染色顆粒,1分為有黃染的細小顆粒,2分為有較多的黃色顆粒,3分為有粗大的棕黃色顆粒。陽性細胞百分比計分:0分為無陽性細胞；1分為 1%～25%；2分為 26%～50%；3分為 51%～100%。以兩項相加得分 ＞2分為陽性,≤2分為陰性。

1.3 統計學方法 采用 SPSS11.0統計軟件。兩樣本率的比較采用 χ2檢驗,相關關系采用 Spearman等級相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CX26、CK19蛋白的表達 BTCC組織中CX26、CK19的陽性率分別為 35.0%、77.5%,正常膀胱組織中分別為 90.0%、45.0%,兩者相比,P均＜0.05。

2.2 CX26、CK19蛋白表達與 BTCC臨床病理參數的關系 見表1。由表可見,BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達均與癌組織分化程度有關(P＜0.05),與年齡、臨床分期及有無淋巴結轉移無關(P均 ＞0.05)。

表1 CX 26、CK 19蛋白表達與 BTCC臨床病理參數的關系

2.3 BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達的關系BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達呈負相關(r=-0.319,P＜0.05)

3 討論

腫瘤的發生從生物學角度看主要表現為兩方面,一方面是腫瘤細胞凋亡障礙,另一方面是細胞異常增殖,即細胞周期調控蛋白的失調可能是腫瘤發生的原因之一。

細胞間隙連接(GJ)是位于相鄰細胞間的膜通道結構,由細胞質膜上的連接子相互銜接而成。連接子圍繞中央親水小管呈環形排列,構成這種亞單位的蛋白質稱為細胞縫隙連接蛋白(CX)。縫隙連接作為細胞交換的通道,能夠在細胞間直接傳遞離子和相對分子質量小于 1 kD的分子,包括細胞內的代謝產物、第二信使 cAMP、cGMP、1,4,5-三磷酸肌醇以及氨基酸、核苷酸等。惡性腫瘤細胞間往往縫隙連接減少,使細胞間失去生長調控。CX26是 CX家族的重要成員,可直接影響細胞間的連接通訊,具有顯著抑癌作用。有學者[1]研究發現,CX26與喉癌的發生發展關系密切,與臨床分期、病理分級及淋巴結轉移密切相關,與臨床分型無關。周莉等[2]發現,CX26在乳腺癌組織中的陽性率低于癌旁正常組織,表明 CX26陽性表達使乳腺癌患者死亡率變小,與預后相關。由于 CX26是膀胱移行上皮細胞主要表達的連接蛋白,在促進細胞分化成熟、維持細胞間協調穩定、抑制腫瘤生長等方面起重要作用。Gee等[3]研究發現,在正常膀胱上皮 CX26基因有一定量的表達,而在癌組織中 CX26基因表達明顯降低,且惡性程度高的膀胱癌組織中 CX26陽性率較惡性程度低者明顯低。本研究結果顯示,BTCC組織中CX26表達隨著癌組織惡性程度增高表達逐漸減弱。在腫瘤的早期,如表淺的非浸潤癌中 CX26就有明顯降低,提示 CX26改變是膀胱癌發生的早期事件之一,有可能作為腫瘤早期診斷的一個新指標。

CK是一類由細胞角蛋白基因編碼的水溶性聚合多肽,相對分子質量為 40～68 kDa,是上皮細胞在發生、分化、成熟過程中逐漸形成的,分布于大多數上皮和間皮細胞源性的細胞中,構成哺乳類動物上皮和間皮細胞源性細胞的細胞骨架。CK19是一種相對分子質量為 40 000的酸性蛋白質,等電點為5.2,基因定位于 17q21.2,是 CK家族中最小的成員。CK19在各種腺上皮和腺上皮起源的惡性腫瘤中均有表達,但在正常外周血、骨髓組織、淋巴結中不表達,且在上皮腫瘤組織中表達穩定[4]。有研究表明,CK19的表達與鼻咽癌、胃癌的發生發展有關,CK19與乳腺癌的復發轉移有關,還可以作為診斷口腔鱗癌分化程度的指標[5～8]。章慧平等[9]研究發現,CK19在膀胱癌組織中的表達高于癌旁組織,提示 CK19與膀胱癌的發生有關,可作為膀胱癌的一個新的腫瘤標記物。張忠英等[10]采用電化學發光免疫分析技術檢測尿 CK19片段,認為其在膀胱癌等泌尿系腫瘤的診斷和復發檢測中具有敏感性高、無創傷的優點,優于血清 CK19和尿細胞學檢查,并可降低急性尿路感染患者的假陽性率。本研究結果顯示,CK19的表達強度與病理分級呈正相關 ,隨著BTCC惡性化程度增高表達逐漸增強。在腫瘤的晚期,如浸潤癌中表達有明顯增強,說明 CK19改變是膀胱癌晚期的表現。

本研究還發現,BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達呈負相關。隨腫瘤分級增加,CX26表達下降,而 CK19表達增強,說明膀胱癌組織中 CX26基因失活可能促使 CK19基因發生作用,使細胞凋亡減少,導致腫瘤發生發展,為膀胱腫瘤早期診斷及預后判斷提供依據。

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