非小細胞肺癌組織中 p73、BRCA1的表達變化及臨床意義

楊 波,房新志

(新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院,烏魯木齊 830011)

研究表明,p73為 p53基因家族成員,可能屬于候選抑癌基因；BRCA1屬于抑癌基因,對腫瘤的生長起負性調節(jié)作用[1]。2007年 1月 ～2008年 12月,我們采用免疫組化法檢測了非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的 p73、BRCA1蛋白,探討二者在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 115例 NSCLC患者中,男 89例、女26例 ,年齡 33～86歲；鱗癌 60例 ,腺癌 41例 ,其他類型 14例；組織分化為高分化 13例,中分化 58例,低分化 30例,未分化 14例；TNM分期Ⅰ期 41例,Ⅱ期 31例,Ⅲ ～Ⅳ期 43例；有淋巴結轉移 46例,無轉移 69例；術前均未行放化療,術中取其瘤組織及 65例癌旁正常肺組織。

1.2 p73、BRCA1蛋白檢測方法 采用免疫組化 SP法。標本均用 10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色。選取具有代表性的蠟塊 4μm厚連續(xù)切片,按試劑盒說明書操作,用已知陽性切片作為陽性對照,以 PBS代替一抗作陰性對照。p73、BRCA1蛋白陽性細胞為細胞核呈黃褐色。著色程度計分:無色為 0分,淺黃色為 1分,棕黃色為 2分,深棕色為 3分。陽性細胞百分比計分:無陽性細胞著為 0分,≤10%為 1分,～50%為 2分,～75%為 3分,＞75%為 4分。兩項得分相乘 ＞3者判為陽性。

1.3 統計學方法 采用 SPSS13.0統計軟件。數據比較采用 χ2檢驗和 Pearson相關性分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p73、BRCA1蛋白的表達 NSCLC組織中p73、BRCA1蛋白陽性率分別為 66.96%(77/115)、60.87%(70/115),癌旁組織中分別為 23.07%(15/65)、15.38%(10/65)。兩者相比,P均 ＜0.05。

2.2 p73、BRCA1蛋白表達與 NSCLC臨床病理參數的關系 見表1。由表可見,p73、BRCA1蛋白表達與 NSCLC的性別、年齡、組織類型、臨床分期、淋巴結轉移均無關(P均 ＞0.05)。

表1 p73、BRCA 1蛋白表達與 NSCLC臨床病理參數的關系

2.3 NSCLC組織中 p73、BRCA1蛋白表達的關系

NSCLC組織中,p73、BRCA1蛋白均陽性 52例,均陰性 20例。相關分析顯示,p73、BRCA1蛋白表達呈正相關(r=0.194,P＜0.05)。

3 討論

p73基因定位于人染色體 1p36.2～1p36.3,由13個外顯子和 12個內含子組成。其所編碼的蛋白質在 DNA結合、轉錄、活化以及寡聚物聚合部位與p53具有顯著的序列相似性,故被認為是一種抑癌基因。p73能激活部分 p53調節(jié)基因如 Bax、p21wafl/cip1,像 p53一樣通過誘導程序性細胞死亡或細胞周期停滯在 G1期而抑制細胞增殖[2]。研究表明,p73蛋白在胸腺癌、惡性黑色素瘤、消化道腫瘤、膀胱癌中過表達。本研究結果顯示,NSCLC組織中 p73陽性率顯著高于癌旁肺組織,提示 p73參與了 NSCLC的發(fā)生發(fā)展；p73蛋白表達與NSCLC性別、年齡、組織類型、臨床分期及淋巴結轉移均無關,表明 p73基因表達在不同病理類型和不同分化程度肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有普遍意義。因此,我們認為 p73基因是一種腫瘤防御或應激基因,一旦正常組織發(fā)生癌變即可觸發(fā) p73基因應激性表達增強,執(zhí)行其防御功能[3]。p53基因突變或缺失可能導致肺癌發(fā)生,而 p73在人類腫瘤中很少發(fā)生突變[4],p73基因高表達是肺癌發(fā)生后出現的現象。另外,p73還可能選擇性誘導一些不受 p53調控基因的表達[5]。因此,我們認為 p73基因功能并非是p53基因功能的簡單重復,可能是對 p53功能的積極補充。近來研究發(fā)現,p73基因能不依賴 p53基因獨立增強腫瘤的化療敏感性[6],其在腫瘤免疫機制中也發(fā)揮重要作用[7,8]。

BRCA1是 Miki等用定位克隆技術成功克隆出第一個與家族性乳腺癌和卵巢癌相關的基因,定位于人類 17q21。作為抑癌基因,BRCA1不僅與 DNA修復機制有關,還與 DNA損傷導致的細胞周期檢查點的調控有關。在 G1/S期,BRCA1作為蛋白質與蛋白質相互作用的主要作用域,抑制細胞進入增殖周期,阻止細胞分裂,誘發(fā)細胞凋亡；BRCA1蛋白還可通過 p21使細胞周期停滯于 S期,修復損傷的DNA。BRCA1具有轉錄活化和轉錄抑制雙重作用,一方面,BRCA1可與 p53蛋白直接結合,并通過 p53激活 p21的轉錄,使細胞周期停滯于 G1期；另一方面,BRCA1能抑制與細胞增殖相關基因的轉錄,如C-myc的轉錄。本研究結果顯示,NSCLC組織中BRCA1陽性率顯著高于癌旁肺組織,且與患者的臨床病理參數均無關。這表明 NSCLC組織存在基因損傷,使 DNA修復基因的表達增加,與癌變模型假設理論相符[9]。

癌癥的發(fā)生需要多種癌基因的協同作用。本研究結果顯示,NSCLC組織中 BRCA1、p73蛋白的表達顯著高于癌旁組織,且二者的表達呈正相關,提示p73與 BRCA1在 NSCLC發(fā)生發(fā)展中可能具有協同作用。p73過表達時能對 DNA損傷產生反應,即p73通過N末端的磷酸化和 C末端的磷酸化對其翻譯后水平修飾,加強轉錄并穩(wěn)定蛋白水平表達[10,11],使細胞周期停滯在 G1期而抑制細胞增殖,參與 DNA修復；BRCA1同樣是在磷酸化狀態(tài)下,在G1/S期抑制細胞進入增殖周期,促進細胞凋亡,修復損傷的 DNA。由此可以設計針對 BRCA1和 p73的靶向制劑,同時發(fā)揮二者對細胞周期中G1期的調控作用,抑制細胞由 G1期進入 S期,從而抑制腫瘤細胞的惡性增殖。

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