KU80蛋白在非小細胞肺癌中表達的臨床意義

蔡 云 羅慶豐 高 玟 詹勤元

非小細胞肺癌是發病率和死亡率增長最快的惡性腫瘤，且治療效果較差。目前大量的研究證明Ku蛋白在腫瘤發生、發展、診斷、治療和預后等方面具有重要的臨床意義，結合病理學檢查和TNM分期來估計肺癌的惡性程度、轉移復發的危險度，能更精確地判斷患者的預后，特別能為非小細胞肺癌患者術后的個體化綜合治療提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2005年6月至2007年12月住院患者88例，年齡56～72歲，中位年齡66歲，患者均有明確的病理組織學診斷，其中高分化鱗狀細胞癌8例，中分化鱗狀細胞癌20例，低分化鱗狀細胞癌22例，中分化腺癌18例，低分化腺癌20例。

1.2 方法

采用MaxvisionTM免疫組化法，按照免疫組化試劑盒的操作說明進行。P-ERK為工作液，由美國基因公司提供。具體步驟:①4μm連續切片，裱于涂有APES的載玻片上，70℃烤片2 h;②二甲苯脫蠟，梯度酒精入水;③3%過氧化氫室溫孵育30 min，消除內源性過氧化物酶;④抗原修復:切片浸于pH6.0檸檬酸溶液中，電飯鍋中煮沸5 min，保溫10 min，自然冷卻;⑤ PBS洗5 min×2次;⑥ 加入適當稀釋倍數的一抗，4℃冰箱12 h;⑦ 復溫，PBS洗去一抗;⑧加Maxvision試劑，室溫作用1 h;⑨PBS洗2次;⑩ DAB顯色，蘇木精復染，酒精脫水，二甲苯透明，封片光鏡下觀察抗原在癌組織中表達。

1.3 結果判斷

棕黃色顆粒在細胞核沉著為陽性，隨機選擇4個高倍視野，記數400個細胞。①按切片中細胞顯色有無及深淺評分:無顯色為0分，淡黃色為1，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②根據顯色癌細胞的比例記分:陽性細胞數1% ～25%，計1分，26% ～50%計2分，51%～75%計3分，76% ～100%計4分。每例腫瘤的積分=①×②［1］。按積分高低分為:0分為“－”，1～3分者為“+”，4 ～8分為“++”，9～12分為“+++”。結果由兩位病理醫師分別診斷，不同結果討論決定，保證結果的客觀性。

1.4 統計學分析

采用卡方檢驗和等級秩和檢驗。

2 結果

88例非小細胞肺癌KU80蛋白陽性表達率為54.5%(48/88)。腫瘤直徑≤2 cm組與＞2 cm組的KU80陽性表達率結果差別具有非常顯著性意義(χ2=11.17，P=0.001)，有淋巴結轉移組與無轉移組KU80陽性表達率結果差別具有非常顯著性意義(χ2=14.58，P=0.0008)，進展組、緩解組與穩定組 KU80陽性表達率結果差別具有顯著性意義(χ2=7.61，P=0.02);KU80陽性表達率與病理類型和TNM分期無關(P ＞0.05)，見表1。

表1 KU80蛋白與肺癌臨床病理參數的關系(例)

3 討論

KU蛋白是DNA結合蛋白，是 KU70/KU80異源二聚體，這個復合體能補充、活化DNA依賴激酶催化亞單位(DNA-PKcs)共同組成DNA依賴激酶(DNAPK)。DNA-PKcs作為1種絲氨酸/蘇氨酸激酶，促進p53蛋白的磷酸化，p53蛋白表達增加，同時反式激活上調另1種抑癌基因WAFl/CIPI，表達產物為p2l蛋白。p21抑制增殖細胞核抗原(PCNA)和多種細胞周期素，使受損的細胞阻滯在 G1期，以修復損傷的DNA，如損傷嚴重不能修復則啟動細胞凋亡［2］。而對于腫瘤細胞來說，如果能缺乏 KU蛋白和DNA-PK的作用，腫瘤細胞將進入永生化，促進細胞增殖和轉移，抑制DNA的修復，促進腫瘤演進，同時對放射線出現超敏反應。這證明Ku蛋白和DNA-PKcs在維持人體正常免疫功能，調節 DNA修復，防止細胞惡變方面有很重要的作用［3］。最近的研究表明:在缺乏KU基因的胚胎干細胞，對放射線照射非常敏感，KU70/KU80陰性表型的DNA-PKcs陰性鼠，不僅DNA雙鏈斷裂的修復和V(D)J重排的編碼終止，而且出現生長遲緩，對放射線超敏反應及淋巴瘤的發生。

近兩年來KU蛋白在腫瘤預后、發生發展、診斷和治療等研究中已經開始受到重視，KU80具有促進腫瘤細胞增殖、黏附和侵襲能力及在非小細胞肺癌發生、發展中起著重要作用［4］。準確判斷非小細胞肺癌患者的預后，制定合理的個體化治療，為非小細胞肺癌的防治開辟1個新的途徑。

本研究發現KU80蛋白在非小細胞肺癌發生發展和轉移中有重要意義，其陽性表達率與腫瘤的大小、淋巴結轉移和治療效果密切相關。Wilson等［5］報道KU蛋白缺乏導致某些腫瘤放射敏感性增加，KU蛋白將是預測療效的蛋白之一，與本研究結果相一致。關于KU有關的抗腫瘤藥物的敏感性以及腫瘤放射增敏機制，有待進一步研究。

［1］ 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志，1996，6(4):229.

［2］ Pueei S，Mamarelli P，Rabitti C，et al.Tumor specific modulation of Ku70/Ku80 DNA binding activity in breast and bladder human tumor biopsies〔J〕.Oneogene，2001，20(6):739.

［3］ 王曉莉，張 明，李文輝.DNA—PK亞單位Ku70、Ku80在不同分期乳腺癌中的表達情況〔J〕.昆明醫學院學報，2009，30(2):114.

［4］ 嚴珊珊，劉 莉，劉志剛.Ku80在鼻咽癌中的表達及其臨床意義〔J〕.腫瘤防治與研究，2008，21(1):49.

［5］ Wilson CR，Davidson SE，Margison GP，et al.Expression of Ku70 correlates with survival in carcinoma of the cervix〔J〕.Br JCancer，2000，83(12):1702.