p63、p73在外陰鱗癌中的表達及臨床意義

胡小青 姚心雨 陳鳳云 羅 兵

p63基因定位于人類染色體3q27～3q29。它廣泛表達于人類上皮細胞基底層和生發層，與鱗癌發生關系密切［1］。p73 基因是1997 年由 Kaghad 等［3］首次發現，定位于人類染色體1p36.2～36.3，曾被認為是抑癌基因。但近來研究發現在肺癌、膀胱癌和卵巢癌中，p73似癌基因。本研究應用免疫組化法檢測p63和p73在外陰鱗癌、外陰上皮內腫瘤和正常外陰鱗狀上皮中的表達情況，以探討p63、p73與外陰鱗癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

收集2004年5月至2009年5月本院病理科存檔的外陰鱗癌(vulvar squamous cell carcinomas，VSCC)蠟塊44例，外陰上皮內腫瘤(vulvar intraepithelial neoplasia，VIN)蠟塊30例和正常外陰上皮組織蠟塊20例。所有組織石蠟均經婦科病理學醫生復核確診。44例VSCC患者年齡為22～81歲，中位年齡55歲，主要位于陰蒂。中線型有23例，側位型21例。按2009年FIGO標準分期:Ⅰ期10例，Ⅱ期13例，Ⅲ期18例，Ⅳ期3例。組織學分級:G1級31例，G2級12例，G3級1例。有腹股溝淋巴結轉移者11例，無腹股溝淋巴結轉移者33例。患者均未接受過放療、化療及激素治療。

1.2 實驗方法

鼠抗人p63和p73單克隆抗體均購自中杉金橋生物技術有限公司。對組織進行S-P兩步法免疫組織化學染色，實驗步驟按照試劑盒說明書進行，并統計p63和p73表達與患者年齡、腫瘤位置、手術病理分期、組織學分級及腹股溝淋巴結轉移之間關系。

1.3 結果評定

p63和p73陽性表達為細胞核出現棕黃色顆粒。參考文獻［2］，在400倍視野下，選染色均勻的5個視野，計數著色細胞占視野細胞總數的百分比，取平均值。①以陽性細胞占視野細胞總數評分，0級:0;1級:＜25%;2級:25% ～50%;3級:＞50%。② 按著色細胞強弱評分:0級:陰性;1級:弱;2級:中;3級:強。按①、②級數之和判斷結果:0～2為“－”，3～4“+”，5～6為“++”。以+ ～++為陽性表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS18軟件進行分析。計數等級資料采用非參數秩和檢驗，計數非等級資料采用fisher’s確切概率法，相關分析采用Spearman等級相關。

2 結果

2.1 p63蛋白在外陰組織中的表達

在正常外陰中，p63蛋白陽性表達于外陰鱗狀上皮基底細胞。在VIN中，p63蛋白主要表達于異常外陰鱗狀上皮細胞，而在VSCC中，p63蛋白強表達于腫瘤細胞癌巢。從正常外陰—VIN—VSCC，p63蛋白陽性表達率明顯升高，各組間存在顯著差異，見表1。

表1 p63蛋白在正常外陰組織、VIN和VSCC中的表達

2.2 p73蛋白在外陰組織中的表達

在正常外陰組和VIN中，p73蛋白陽性表達于外陰鱗狀上皮基底細胞或異常細胞核，在VSCC組，p73蛋白強表達于腫瘤細胞癌巢。外陰病變程度愈重，p73蛋白陽性表達率愈高。VIN組與正常外陰組比較，VSCC組與VIN組比較，均有顯著差異(表2)。

2.3 p63、p73蛋白與外陰鱗癌臨床病理特征的關系

患者年齡、腫瘤位置和組織學分級與p63、p73表達無相關性(P＞0.05)。隨著手術病理分期升高，p63蛋白陽性表達率明顯升高，Ⅰ、Ⅱ期組織中p63蛋白陽性表達率與Ⅲ、Ⅳ期組織比較差異有顯著性(P＜0.05);而p73蛋白的表達與病理分期卻無顯著差異(P＞0.05)。p63、p73蛋白在腹股溝淋巴結轉移患者中陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者，差異具有顯著性(P ＜0.05)，見表3。

表2 p73蛋白在正常外陰組織、VIN和VSCC中的表達

表3 p63、p73蛋白表達與外陰鱗癌臨床病理特點的關系(例，%)

2.4 p63、p73蛋白表達在外陰鱗癌中相關性分析

在44例外陰鱗癌中，p63和p73共同陽性表達占65.9%，p63單獨陽性表達占9.1%，p73單獨陽性表達占11.4%，兩者均陰性表達占13.6%。相關性分析示:p63與 p73 表達呈正相關(γ =0.438，P=0.03)，見表4。

表4 外陰鱗癌中p63蛋白與p73蛋白表達的關系(例)

3 討論

1998年Schmale等首先報道p63基因結構位置。通過轉錄2個不同的啟動子引發p63剪接產生兩大類異構體:全長型p63異構體(TAp63)和短截型p63異構體(ΔNp63)。研究發現p63基因存在10種不同C-端異構體，它們分別是 TAp63α 、TAp63β、TAp63γ、TAp63δ、TAp63ε、△N p63α、△N p63β、△N p63γ、△N p63δ和△N p63ε［3］，這些異構體具有其自身特有的結構域。

p63蛋白在大多數鱗癌，其他上皮源性腫瘤，甚至非上皮源性腫瘤中均有表達［4］，但主要表達于鱗狀上皮源性的惡性腫瘤［5，6］。本研究結果顯示:p63僅表達于正常外陰鱗狀上皮基底層，在外陰鱗癌組織中強陽性表達于癌巢。p63表達與患者年齡、腫瘤位置和腫瘤組織學分級無關，提示患者個體差異和腫瘤惡性程度不影響p63表達。隨著外陰病變程度加重，p63蛋白陽性表達率明顯升高，說明p63可能參與外陰鱗癌形成。p63蛋白在Ⅰ～Ⅱ期腫瘤中表達陽性率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期，兩組差異顯著，而且發現 p63異常表達與腹股溝淋巴結是否轉移有關，說明p63蛋白與外陰鱗癌發展密切相關，p63蛋白可能參與外陰鱗癌惡性演變過程。

p73基因是1997年由Kaghad等首次提出。目前發現p73包括2個啟動子。第1個啟動子位于第1個外顯子的起始區，激活以后表達TAp73。第2個啟動子位于第3內含子下游的30 kb處，激活以后表達N端截斷的p73異構體統稱為ΔNp73。由于剪切機制的不同而導致p63基因C末端不同，轉錄時會產生多種變異蛋白α、β、γ、δ、ε、ζ、θ、η和η 1。

p73在腫瘤組織中表達具有組織特異性，p73基因屬于腫瘤特異性基因。在結腸癌，神經母細胞瘤，少突角質細胞瘤和惡性黑色素瘤中存在p73雜合子丟失，認為其為抑癌基因［7］。然而肺癌、卵巢癌、乳腺癌等均已發現p73mRNA過表達。在外陰正常上皮組織、VIN和VICC中，p73蛋白表達陽性率逐漸升高。p73在VIN表達高于外陰正常上皮組織，p73在VICC表達高于VIN和外陰正常上皮組織，這與O'Nions等［8］研究結果相似，他認為p73基因可能在外陰鱗癌發生過程中扮演重要作用。在本研究中，p73在腹股溝淋巴轉移患者中陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移患者，提示p73蛋白表達與外陰鱗癌進展有關。它可能通過對抗p53基因功能或是模擬p53分子行使功能［9］，參與細胞癌變的過程。

p63和p73不論是在結構還是在功能上都具有許多相似之處。陳洪雷等［10］認為在人非小細胞肺癌中p73與p63之間呈正相關性，認為兩者可能協同促進腫瘤的發生發展。隨著外陰病變發展，p63和p73表達陽性率均逐漸增加。在相關性研究中，兩者之間呈顯著正相關，表明p63和p73可能協同促進外陰鱗癌的發生發展，但作用機制有待于研究。

［1］董彩紅，敖啟林，馮笑山，等.P63及TβR～Ⅱ蛋白在食管鱗狀細胞癌及其癌前病變中的表達及意義〔J〕.華中科技大學學報(醫學版)，2009，38(3):286.

［2］Lu P，Barad M，Vize PD.Xenopus p63 expression in early ectoderm and neurectoderm〔J〕.Mech Dev，2001，102(1 ～2):275.

［3］Marina Mangiulli，Alessio Valletti，Mariano Francesco Caratozzolo，et al.Identification and functional characterization of two new transcriptional variants of the human p63 gene〔J〕.Nucleic Acids Research，2009，37(18):6092.

［4］Di Como CJ，Urist MJ，Babayan I，et al.p63 expression profiles in human normal and tumor tissues〔J〕.Clin Cancer Res，2002，8(2):494.

［5］Massion PP，Taflan PM，Jamshedur Rahman SM，et al.Significance of p63 amplification and overexpression in lung cancer development and prognosis〔J〕.Cancer Research，2003，63:7113.

［6］Geddert H，Kiel S，Heep HJ，et al.The role of p63 and deltaNp63(p40)protein expression and gene amplification in esophageal carcinogenesis〔J〕.Human Pathology，2003，34:850.

［7］Mohan Adithi，Venkatesan Nalini，Mallikarjuna Kandalam，et al.Expression of p63 and p73 in retinoblastoma:A clinicopathological correlation study〔J〕.Experimental Eye Research，2008，87(4):312.

［8］O'Nions J，Brooks LA，Sullivan A，et al.P73 is over-expressed in vulval cancer principally as the delta 2 isoform〔J〕.Br J Cancer，2001，85(10):1551.

［9］Pozniak C D，Radinovic S，Yang A，et al.An anti-apoptotic role for the p53 family member，p73，during developmental neuron death〔J〕.Science，2000，289:304.

［10］陳洪雷，陳福春，王 敏，等.人非小細胞肺癌組織p63和 p73的表達及意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2003，10(10):1015.