婦女人乳頭瘤病毒測定與宮頸癌及癌前病變關系探討

張秀清

目前認為，從宮頸上皮內瘤變發展為宮頸癌大約需要10年的時間，這為宮頸癌的預防、發現、治療創造了時機。所以說宮頸癌是可以預防的，是可以治愈的，關鍵在于普查、早期發現和適當處理。隨著醫學的進展，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)持續感染已被證明是引起宮頸癌及其癌前病變的主要病因。第二代雜交捕獲法(HC-Ⅱ)HPV-DNA檢測采用RNA探針進行分子雜交，化學發光使信號放大對HPV-DNA定量分析。本研究運用該方法測定HPV病毒載量，并與組織病理學結果相對照，了解HR-HPV感染及載量與宮頸癌及其癌前病變的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年4月～2009年6月在我院因子宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌進行各種術式治療前，行HR-HPV測定的320例，年齡14～68(28.41±9.64)歲，平均孕次5次，產次3次，均為首次診斷。

1.2 方法

1.2.1 HPV-DNA標本采集 由固定醫師將HPV取樣刷插入宮頸外口，順時針或逆時針轉動5周,停留10s后取出，放置于保存液中送檢。

1.2.2 HPV-DNA測定 采用美國Digene公司HC-Ⅱ試劑盒，96孔平板法。步驟:樣本DNA雙鏈解開成為核苷酸單鏈；DNA單鏈與RNA組合探針結合為RNA-DNA雜合體；特異性抗體將RNA-DNA雜合體捕獲并固定在試管壁或微孔壁上；偶聯有堿性磷酸酶的第二抗體與RNA-DNA雜合體結合；堿性磷酸酶使底物發光，根據光的強弱可確定堿性磷酸酶和RNA-DNA雜合體的含量，檢測出HPV-DNA載量。陽性標準為HPV-DNA≥1.0pg/ml。

1.2.3 組織病理學檢查 所有入選者術前已由專科醫師進行陰道鏡檢查，并定位活檢行病理檢查。

1.2.4 統計學處理 計數資料采用x2檢驗，宮頸病變級別與HPV載量間的關系用秩和檢驗,相關性分析采用Spearman相關分析。使用SPSS13.0統計軟件，（P＜0.05）為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 組織病理學檢查結果 CINⅠ95例，CINⅡ55例，CINⅢ70例，宮頸浸潤癌105例(宮頸鱗狀細胞癌100例，宮頸高分化腺癌5例)。CINⅠ屬低級別病變共95例；CINⅡ，CINⅢ屬高級別病變，共125例。

2.2 HPV-DNA檢測結果

320例患者中HPV(+)者305例(95.31%)，病毒載量1.00～3101.35pg/ml。

95例CINⅠ中HPV(+)者80例,病毒載量1.00～1608.5pg/ml。

55例CINⅡ中HPV(+)者53例,病毒載量1.87～1918.11pg/ml。

70例CINⅢ中HPV(+)者67例,病毒載量2.60～2362.29pg/ml。

宮頸癌105例,均為HPV(+),病毒載量1.47～3101.35pg/ml。

2.3 病毒載量與宮頸癌及癌前病變的關系

從病毒載量的集中及離散趨勢來看，HR-HPV載量并未隨著宮頸病變的嚴重程度而增加，反而有所減少。在HPV陽性時,低級別病變、高級別病變、宮頸癌之間載量，差異無統計學意義。病變等級和病毒載量之間的Spearman等級相關系數為0.0587，病變等級和病毒載量之間無相關性(見表1)。

表1 HR-HPV(+)時病毒載量與宮頸病變的關系(pg/ml)

3 討論

眾多研究發現，HPV高危感染常引起生殖道惡性腫瘤，特別與宮頸癌之間有著密切的聯系[1]。據文獻報道[2]，HPV感染的檢出率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌組中分別為30%、55%、65%、99.8%。本組研究通過PCR方法檢測CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌，結果顯示陽性率分別為84.21%、87%、98%、100.00%，這與文獻報道有差異，可能與山西大同婦女多婚次以至相互交叉感染可能有關。尤其在宮頸癌中，HPV病毒感染將造成機體組織病理學改變，從感染到出現這些改變需一定時間，宮頸感染HPV后病毒整合到宿主DNA中，經過一段時間才使宿主細胞發生惡變[3]。從CINⅠ到CINⅢ是一隨時間而發展的過程，本研究中顯示CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸癌，隨著宮頸病變的加重HPV陽性率逐漸增加,說明宮頸癌前病變與HPV感染有關。持續感染HR-HPV是宮頸癌發生發展的必要條件[4]，這一觀點已被大多數國內外學者所接受，我們統計宮頸高度病變96.0%病人HPV陽性，HPV負荷量≥1000pg/ml為33例，500～1000pg/ml35例，HPV負荷量的高低與宮頸病變之間存在一定的關系。高病毒負荷量對宮頸癌的發生及宮頸病變的進展可能有一定的促進作用[5]，但女性HPV感染率很高，而只有極少數會發生宮頸癌，原因何在值得進一步研究。

HC-Ⅱ作為HPV-DNA負荷量半定量的測定方法，雖然因其高度敏感性、可重復性、客觀性、簡單易操作和可接受性被用于臨床。但是HC-Ⅱ檢測HPV病毒負荷量與宮頸病變嚴重程度之間的關系仍有爭議。Wu等[6]發現，HPV病毒負荷量與宮頸病變程度之間明顯相關，病毒負荷量越高，宮頸病變加重的風險越大。本研究表明，隨著HPV負荷量增加，發生≥CINⅡ宮頸病變的幾率明顯增加，表明HC-Ⅱ檢測的HPV病毒負荷量與宮頸病變嚴重程度之間密切相關。

[1] Saranath D,Khan Z,TandleH,etal.HPVI6/18 prevalence in cervical lesions/cancers and P53 genobpcs in cervical cancers patients from India[J].GynecotOncot,2000,86(2):157-162.

[2] 郎景和.迎接子宮頸癌預防的全球挑戰與機遇[J].中華婦產科雜志,2002,37(3):129-131.

[3] Pretorius RG,Peterson P,Azizi F,et al.Subsequent risk and presentation of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)3 or cancer after a colposcopic diagnosis of CIN 1 or less[J].Am J Obstet Gynecol,2006,195(5):1260-1265.

[4] 唐禮榕.HPV-DNA檢測在宮頸病變診斷中的價值[J].中國癌癥雜志,2006,l6(3):217-219.

[5] 金力,郎景和.高危人類乳頭瘤狀病毒負荷與宮頸上皮內瘤變的分級關系[J].生殖與避孕,2006,26(7):422-425.

[6] WuY,Chen Y,Li L,et al.Associations of high-risk HPV types and viral load with cervical cancer in China[J].J ClinVirol,2006,35:264-269.