麻雞脾臟總RNA提取方法初探

陳書明，常云花，梁新峰，曹新鵬，范 瑾

（山西農業大學動物科技學院，山西太谷030801）

白細胞介素（Interleukin，IL）簡稱白介素，是由白細胞產生并介導于細胞間相互作用的一類細胞因子。其主要作用是通過T和B淋巴細胞及NK細胞等多種靶細胞來傳遞免疫信息，以激活、調控血細胞的生長發育與分化成熟，并參與機體的免疫應答以及某些疾病的病理過程[1-3]。目前，IL已作為藥物應用于臨床，但用傳統的從組織中分離純化IL，很難實現IL的大量生產。因此，通過RT-PCR技術獲得IL的目的基因，再用基因工程技術規模化生產IL成為科研工作者努力的方向。而獲得IL的目的基因需要先從脾臟組織提取出純度高、完整性好的總RNA。目前，已有多種方法與產品應用于總RNA提取和純化，但在實驗過程中，總RNA極易被實驗室環境中存在的RNA酶降解，或提取出來的總RNA中常伴有大分子量染色體DNA的污染[4-7]。

本研究通過控制RNAiso Plus試劑和脾臟組織用量比例，對組織和實驗室環境進行特殊處理，反復研究，最終從麻雞脾臟組織中提取出純度高、完整性好的總RNA。該研究對分子克隆獲得相關目的基因等后續實驗具有重要意義。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 自山西省太谷縣某雞場購進80日齡健康麻雞1只。

1.1.2 試驗試劑 Agarose（瓊脂糖）為Amresco原裝進口；RNAiso Plus購自大連寶生物工程有限公司；Tris和DEPC均購自上海生物工程技術服務有限公司；EDTA、硼酸、95%乙醇、異丙醇、氯仿、溴化乙錠均為國產分析純。75%乙醇、溴化乙錠等用RNase-free ddH2O配制。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品的制備 在潔凈環境下將麻雞殺死，迅速取出其脾臟，用刀片切成約140，120，80mg的小塊組織，用滅菌紗布包裹后懸吊于液氮罐中保存備用。……