LightCycler480實時熒光定量 PCR儀在獻血者血液篩查中的應用

孫秋影,盧長春,魏 強,龐淑芬

(黑龍江省血液中心,黑龍江哈爾濱 150056)

輸血相關傳染病的預防和控制已經(jīng)成為全社會關注的焦點,新技術的引進是進一步提高血液安全性的重要一環(huán)。應用PCR進行早期篩查主要是因為PCR的高靈敏和短的窗口期。核酸檢測(NAT)是直接檢測病原體核酸的一系列技術的總稱,靈敏度高,可檢出標本中極微量的核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短病毒檢測“窗口期”,提高輸血安全性。

我站應用 LC480系統(tǒng)進行的 96或 384個樣本快速循環(huán)擴增PCR反應。通過監(jiān)測核酸擴增時的熒光,可對產(chǎn)生的結果定量檢測和同時進行分析。

LC 480儀器是一種具有實時在線檢測綜合能力的快速熱循環(huán)儀。安裝后能實施條件一致的 PCR,例如,同時擴增和檢測靶核酸。通過加入雙鏈DNA特異性熒光染料或熒光基團標記的序列特異性寡核苷酸探針檢測靶核酸。這兩種途徑都能在擴增時測量PCR產(chǎn)物,為定量 PCR的基礎。

我站采用了 HBV/HCV/HIV三聯(lián)核酸檢測試劑盒(熒光PCR),應用DP1000上海科華生物工程有限公司的核酸提取儀,8人份血樣混合提取核酸,應用 LightCycler·480實時熒光定量PCR儀進行HBV、HCV、HIV三聯(lián)檢測,LightCycler·480PCR儀基于實時熒光 PCR反應原理,能對靶核酸進行快速、準確的檢測。該儀器靈敏準確自動化程度高,操作維護簡單方便,可檢出標本中極微量的病毒核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短血液中病毒檢測的“窗口期”,極大提高了血液制品的安全的性,保證了輸血安全。應用PCR進行早期篩查主要是因為PCR的高靈敏和短的窗口期,方法學能夠互補,與酶免檢測互補,可以避免亞型或免疫沉寂引起的漏檢。

為迎接 2009年在哈爾濱市召開的世界大學生冬季運動會,我站在 2008年應用了核酸檢測技術,為大冬會篩檢部分全血及成分血,為我省輸血事業(yè)的發(fā)展作出了貢獻。目前全國采供血機構的血液制品傳染病指標的檢測主要是使用ELISA方法,但受方法學的限制,其病毒檢測“窗口期”再縮短已經(jīng)很難,通過引進病毒核酸檢測技術(NAT),將會大大減少輸血感染疾病的發(fā)生。衛(wèi)生部也在討論使用 ELISA和NAT兩種方法對發(fā)往臨床的血液制品進行檢測。我站具有前瞻性,應用此技術,對推動和提高采供血機構的檢測能力具有重要影響。

我站于 2008年 2月至 2009年 3月正式應用此項技術,開展了部分全血及成分血的病毒核酸篩查工作,并在世界大學生冬季運動會期間,作為供血單位。我站為大冬會儲備的血液制品全部經(jīng)過核酸檢測,使大冬會儲備血液制品與北京奧運會的儲備血液制品質量標準一致。通過為世界性運動賽事提供醫(yī)療保障,大大提高了我站的檢測水平和能力。該技術的引進及應用有助于快速、準確的篩查出標本中極微量的核酸,在病毒感染后數(shù)天即能檢出,可大大縮短病毒檢測“窗口期”,提高輸血安全性,具有極好的社會效益。