結直腸癌淋巴結微轉移檢測的臨床意義*

于 游,王 燦,彭 力,吳 強,韓繼明,李雅嘉

(重慶市急救醫療中心:1.普外科;2.病理科 400014)

結直腸癌淋巴結微轉移檢測的臨床意義*

于 游1,王 燦1,彭 力2,吳 強1,韓繼明1,李雅嘉1

(重慶市急救醫療中心:1.普外科;2.病理科 400014)

目的探討結直腸癌淋巴結微轉移與臨床病理參數的關系及其臨床意義。方法采用免疫組織化學方法,用細胞角蛋白CK20及CEA檢測53例常規病理檢查無淋巴結轉移的結直腸癌周圍淋巴結509枚。結果53例結直腸癌患者中21例有淋巴結微轉移(39.6%)。微轉移與浸潤深度有關,深層組織的微轉移陽性率高于淺層,差異有統計學意義(P＜0.05),PT3、PT4患者陽性率明顯高于PT1、PT2患者,差異有統計學意義(P＜0.05)。低分化癌微轉移陽性率明顯高于高分化癌,差異有統計學意義(P＜0.05)。結論對常規檢查淋巴結為陰性的結直腸癌,微轉移檢測可能對準確地確定臨床分期、指導治療、判斷預后有積極臨床意義。

結直腸腫瘤;淋巴結微轉移;免疫組化;腫瘤分期

周圍淋巴結的轉移情況直接關系到腫瘤的病理分期、預后判斷和術后輔助治療方案的選擇。結直腸癌淋巴結轉移與否是臨床最為重要的診斷治療參考指標。然而傳統組織學檢查對淋巴結轉移,尤其是微轉移的診斷有很大的局限性。淋巴結轉移診斷的遺漏直接影響著臨床分期的準確性。因此淋巴結微轉移檢測對患者術后復發及預后的預測、合理治療方案的選擇有重要的臨床意義[1-2]。本文應用免疫組織化學方法研究結直腸癌淋巴結微轉移與臨床病理參數的關系,以探討微轉移檢測的臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2003年3月至2009年3月在本院行結直腸癌根治術的53例結直腸癌患者;其中男 31例,女 22例;年齡27～71歲,平均(57.1±11.4)歲。病理分型:高分化腺癌 9例,中分化腺癌11例,低分化腺癌33例。其中結腸癌33例,直腸癌20例。PTNM 分期:Ⅰ期19例,Ⅱ期25例,Ⅲ期9例。收集常規HE染色為陰性的淋巴結共509枚,平均每例9.6枚。

1.2 試劑及方法 CK20鼠抗、CEA鼠抗、即用型抗原修復液及SP試劑盒均購自福州邁新生物制品公司。將各蠟塊連續切片4張,切片厚度為4 μ m,1張行HE染色,另3張行免疫組化SP法染色,經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水后,檸檬酸緩沖液微波法修復抗原;3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶的活性;加入抗體,4℃過夜;DAB顯色,顯微鏡下觀察3～10 min,陽性染色為棕色或黃色;蒸鎦水沖洗,蘇木素復染,0.1%鹽酸分化,PBS返藍;切片經梯度酒精脫水干燥,中性樹膠封固;光鏡下觀察結果。每次染色均以PBS代替一抗作陰性對照,直腸癌組織作為陽性對照。結果判斷以胞漿黃染或棕色為陽性。

1.3 統計學方法 所有統計學處理均采用四格表χ2檢驗,用SPS13.0軟件完成統計學分析,以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

結直腸腺癌細胞的CK20和CEA陽性染色位于胞漿內。53例結直腸癌共 509枚淋巴結中有 21例(39.6%)共47枚淋巴結出現微轉移(9.2%),其中有21例(39.6%)淋巴結共46枚(9.04%)為CEA陽性,有20例(37.7%)淋巴結共43枚(8.45%)CK20陽性。二者均為陽性者42枚(8.25%)。微轉移表現為單個散在或2～3個及數個聚集小團狀的癌細胞位于淋巴竇內,以邊緣竇為主。微轉移與癌腫浸潤的深度有關,腫瘤浸潤愈深,微轉移愈易發生(P＜0.05)。微轉移還與組織類型有密切關系,分化程度低者,微轉移陽性率高(P＜0.05)。但微轉移與腫瘤的部位、大小無關(P＞0.05)(表1)。本組經微轉移檢測有19例重新分期,其中4例Ⅰ期實屬Ⅲ期,15例Ⅱ期實屬Ⅲ期;重新分期率為35.85%(19/53)。

3 討 論

雖然目前結直腸癌的治療療效較過去20年已有了相當大的提高,但復發和轉移仍然是治療失敗的主要原因,即使在常規病理學檢查未發現淋巴結轉移的結直腸癌患者中年內腫瘤的復發率也可達 50%[3]。分析其原因可能是因為淋巴結、血管、骨髓中存在的微小轉移灶,用傳統的病理檢查方法很難檢出,而導致臨床無法及時和正確治療[4-5]。

傳統上對淋巴結的病理學檢查是通過對其具有代表性的一個切面經HE染色作普通光鏡檢查,這種常規方法不能查及淋巴結的大部分組織,故有可能忽略淋巴結微轉移的存在。近年來,隨著組織化學和分子生物學技術的發展,利用免疫組化法可以發現常規HE染色所不能發現的單個癌細胞和(或)一小簇癌細胞。由于這些微轉移有發展成致命的顯性轉移的可能,因此微轉移的檢測日益為人們所重視,并已成為目前研究的熱點[6-7]。Nakajo等[8]對 1 761枚常規病理檢查為陰性的淋巴結應用免疫組化法檢查,發現有 30枚(1.7%)發生微轉移。本組對509枚陰性淋巴結行微轉移檢測,微轉移陽性率為9.2%。微轉移與浸潤深度密切相關,尤其以T3以上微轉移的陽性率為高。本組結果顯示,微轉移檢測使19例結直腸癌在臨床上需要重新分期,重新分期率為35.85%。因此作者認為,對PT3N0應常規作淋巴結微轉移檢測,這使得臨床分期更具科學性。成功的腫瘤微轉移的診斷取決于是否具備適當的腫瘤標記物。CK19,CK20,CEA,MUC1和CD44[9]等標志物都在上皮組織中高度表達,因此可作為消化道腫瘤的特異性標記物。由于大多數腫瘤細胞的表型復雜,而且即使同一腫瘤用不同標記物結果也有所不同。目前的趨勢是用多套標記物同步進行。

有學者認為,盡管免疫組化法技術可以檢測HE無法發現的腫瘤微轉移灶,但它并不能提供更好的預后信息[10]。而另一方面,贊同微轉移檢測的學者稱,淋巴結微轉移檢測不但有利于病情的正確分期,而且有助于預后分析,便于術后治療方案的正確決策和制訂[11]。M cGuckin等[12]報道乳癌淋巴結轉移對無瘤生存具有重要意義,但與總的生存率無關。而Nakajo等[8]對67例常規病理淋巴結陰性的胃癌患者進行生存分析,結果表明有淋巴結微轉移患者的5年生存率明顯低于無微轉移患者。Perez等[13]也報道結直腸癌有淋巴結微轉移患者82%生存期低于5年。但迄今為止,尚沒有一種檢查能直接反映癌細胞的數量、生命力、黏附力及隨后的免疫應答。本組資料因缺乏隨訪,未做生存分析。作者認為淋巴結內存在癌細胞畢竟是淋巴轉移的第1步;淋巴結內存在微轉移預示著轉移的危險性增加,因此微轉移檢測可間接地作為預后的監測指標。

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Clinical significance of micrometastasis detection in conventional pathologic nonmetastasis lymphnodes of patients with colorectal cancer*

YU You1,WANG Can1,PENG Li2,et al.
(1.Department of General Surgery;2.Departmentof Pathology,ChongqingMedical Emergency Center,Chongqing400014,China)

ObjectiveTo study the relationship between lymphnode micrometastasis and clinicopathological parameters.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detect CK20 and CEA in 509 lymphnodes from 53 cases of colorectal cancer,in which,conventional pathological diagnosis showed no lymph node metastasis.ResultsMicrometastasis was found in 47 lymphnodes(9.2%)of 21 cases(39.6%).The incidence of micrometastasis was correlated with the depth of invasion,and the incidence of micrometastasis in PT3 and PT4 patients was more than that in PT1 and PT2 patients(P＜0.05).The incidence of micrometastasis was also higher in the poorly differentiated cancer than that in well differentiated cancer(P＜0.05).The histologicstage of the 19(35.85%)micrometastasis patients was upstaged by the group of micrometastatic lymph nodes from stageⅠ tostageⅡin 4 cases,stageⅢin 15 cases.ConclusionMicrometastasis detection in negative lymph nodes of colorectal cancer is recommended to precisely determine the tumor stage,in order to direct cancer therapy and predict prognosis.

colorectal carcinamo;lymph node micrometastasis;IHC;neoplasm staging

R735.3;R73-37

A

1671-8348(2010)05-0547-02

重慶市衛生局科研基金資助項目(06-2-011)。

2009-06-23

2009-09-08)

?臨床研究?