NCCLSEP9-A文件在全自動生化分析儀評價中的應用

陳先榮，李 智，劉一平

(株洲市二醫院檢驗科，湖南 株州 412005)

檢驗醫學的快速發展使得具有測定速度快、結果穩定、使用方便等優點的全自動生化分析儀大量進入各醫療單位。由于標本量大、各種技術檢測項目不一等原因，在一些大、中型實驗室里特別是標本量很大的獨立醫學實驗室里常擁有多臺生化分析系統。我實驗室除了現使用的德國羅氏Modular P800全自動生化分析儀外，近期又新安裝了羅氏Cobas6000 C501全自動生化分析儀。該分析儀是羅氏診斷公司于近年推出的一款新產品，具有試劑完全條形碼掃描功能、自動化程度很高、精密度高等特點。為保證檢測結果的一致性，我實驗室按照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP9-A文件的要求[1]，對兩臺不同型號的生化分析儀檢測的常規生化項目結果進行了比對分析，結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1儀器和試劑 德國羅氏Modular P800全自動生化分析儀及丙氨酸氨基轉移酶 (ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、尿素(UREA)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、葡萄糖(GLU)、淀粉酶(AMY)、鉀(K)、鈉(NA)、氯(CL)、總鈣(CA)、鎂(MG)20個生化項目的的原裝配套試劑及校準品；德國羅氏Cobas6000 C501全自動生化分析儀及上述20個項目的原裝配套試劑、校準品。

1.1 .2質控品 美國伯樂公司質控品。

1.1 .3樣本 為我醫院送檢的新鮮病人標本，其濃度選擇按照EP9-A文件中方法對比試驗數據分布建議表的要求，盡可能覆蓋檢測范圍，特別注意地覆蓋了醫學決定水平，并且留有足夠的量利于重復性檢測。

1.2 方法

1.2 .1方法的選擇 以德國羅氏Modular P800全自動生化分析儀為比對儀器(X)，以羅氏Cobas6000 C501全自動生化分析儀為實驗儀器(Y)。

1.2 .2儀器校準 在熟悉評價方案后，用各自原裝配套的校準品進行校準，保證儀器檢測結果的量值溯源性。

1.2 .3質量控制 使用伯樂公司的第三方質控品為質控血清分別在兩臺生化分析儀上做日常室內質控，保證結果的穩定性。

1.2 .4樣品的測定 由專業技術人員嚴格按照本檢驗中心的標準操作規程分別用羅氏Modular P800和羅氏Cobas6000 C501每日選8個病人樣本，每個病人樣本進行雙份測定，分成5天進行，共完成40個標本測定。

2 統計學處理

兩個檢測系統血清測定結果的統計分析按照NCCLS EP9-A的要求在EXCEL 2003上編制程序進行分析，將40個標本在兩個檢測系統的測定結果(Xij，Yij)輸入X、Y列，電腦EXCEL2003軟件自動計算并繪制成相應的圖表。主要內容有：(1)進行方法內離群點的檢驗；(2)比對方法(X)測定范圍的檢驗，如 γ≥0.975(或 γ2≥0.95)，則認為 X 取值范圍合適，直線回歸統計的斜率和截距可靠；(3)計算回歸方程y=bx+a；(4)計算方法間的系統誤差：根據臨床需要，將常規化學20個項目的醫學決定水平濃度(Xc)代入回歸方程，計算實驗方法(Y)與比對方法(X)之間的系統誤差(SE)，SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a|；SE%=(SE/Xc)×100%。按照美國國會通過的臨床實驗室改進修正案(Clinical Laboratory Amendment,CLIA’88)允許變異偏差進行結果判斷。

3 結果

3.1 病人標本20項常規化學測定結果的離群點檢驗：通過方法內和方法間離群點的分析，比對方法(X)絕對偏差限值、相對偏差限值、實驗方法(Y)絕對限值、相對偏差限值、方法間絕對偏差限值、方法間相對偏差限值分別見表1。經比較，本實驗中兩個檢測系統20個常規化學測定數據無離群點存在。

3.2 線性相關性的檢驗：在EXCEL2003軟件中，用函數CORREL計算得到各個項目的相關系數(γ)，見表2。從表2中可判斷所有項目的相關系數γ均滿足EP9-A文件中γ≥0.975的要求，則可判斷X值取值范圍合適，可用簡單的直線回歸來估計斜率和截距。

3.3 回歸方程：在EXCEL2003軟件中，分別用函數LINEST和INTERCEPT計算斜率和截距，得到相應的回歸方程，見表2。

結果顯示，兩個檢測系統病人血清20個常規化學測定結果間具有良好的相關性和可比性。

表1 方法內和方法間離群點檢驗數據

3.4 羅氏Coabas6000 C501檢測系統常規化學檢測結果偏倚分析：本研究選定20個常規化學項目的CLIA’88醫學決定水平[2]計算羅氏Coabas6000 C501檢測系統的預期偏差。向20個常規化學定值欄中分別輸入各個項目的醫學決定水平數值，EXCEL2003按照編制程序計算其系統預期偏差和相對偏差的結果，見表2。結果顯示，所有20個項目的預期偏差和相對偏均小于CLIA’88允許誤差的二分之一，證實兩個檢測系統的20個常規化學結果具有良好的一致性，兩個系統所測常規生化20個項目在分析范圍內的相對偏差較小可滿足臨床要求。

4 討論

隨著檢驗醫學的飛速發展，檢驗技術的不斷分支，檢測項目的不斷增多，檢驗質量的控制變得越來越重要，ISO15189實驗室認可已經成為現代醫學實驗室發展的必經之路。ISO 15189文件指出：“當同樣的檢驗應用不同程序或設備，或在不同地點進行，或以上各項均不同時，應有確切機制以驗證在整個臨床適用區間內檢驗結果的可比性”。應按適合于程序和設備特性的規定周期驗證[3]。因為即使每臺儀器工作性能穩定、室內質控正常，但不同的檢測系統相同項目之間的結果也可能存在系統誤差[4-5]，因此要使每一項檢驗項目的結果符合質量要求，除了要有標準及嚴格的質量控制外，還必須要對使用的檢測系統做嚴格的選擇和評價，確定它的不精密度、不準確度、患者結果可報告范圍、分析靈敏度、分析干擾、參考范圍和其他需說明的性能，為保證不同檢測系統之間的結果具有可比性有必要對不同的檢測系統之間的結果一致性進行評價。

表2 相關系數和回歸方程及誤差

本研究按照EP9-A文件的要求，對我實驗室的羅氏Cobas6000 C501和羅氏Modular P800生化分析儀進行比對分析和偏倚評估，結果表明在做好室內質控基礎上，由于使用了配套試劑、校準品和質控品，兩臺分析儀20項常規化學項目檢測結果之間的偏倚評估在線性范圍之內，顯示良好的相關性，線性回歸方程良好,究其原因在于該兩臺分析儀使用的是相同的校準品,結果可以溯源到同一個標準,因此該20個常規生化項目可以在兩臺儀器上任意檢測而得到一致性很高的結果。通過對這兩臺儀器的比對分析，我們對檢測結果在兩分析系統間的偏倚有了明確的了解，對其準確性的判斷有了評估依據，保證了同一實驗室檢測結果的準確、可靠性，使病人的檢測結果在不同的時間前后有了可比性，滿足了臨床的需要，使檢驗醫學可以更好地為臨床服務。

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient samples,approved guideline,EP9-2A,Pennsylvania.NCCLS,1986:1-14.

[2]葉應嫵,王毓三,申子瑜主編.全國臨床檢驗操作規程.3版.南京:東南大學出版社,2006:59-60.

[3]魏 昊,叢玉隆.醫學實驗室質量管理與認可指南.北京:中國計量出版社,2004,72-75.

[4]邱 玲,程歆琦,劉 荔,等.多臺生化分析儀多項目同時進行比對的實驗研究設計及應用.中華檢驗醫學雜志,2007,30:1001-1004.

[5]Chen Y,WuW,Li LJ,et al.Comparison of the result for three automated immunoassay system in determining serum HBV markers.Clin Chim Acta,2006,372:129-133.