急性呼吸道感染患兒流感嗜血桿菌感染的分布及耐藥性分析

王運中，陶云珍，吾金彪，丁云芳

(蘇州大學附屬兒童醫院檢驗科，江蘇 蘇州 215003)

流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae，HI)是兒童呼吸道感染的重要致病菌之一，還可引起腦膜炎、敗血癥、心包炎、蜂窩組織炎等侵襲性感染。隨著抗生素在臨床上的廣泛使用，HI對β-內酰胺類抗生素耐藥以及多重耐藥株的出現，給臨床治療帶來了一定的困難。為了解本地區HI的流行趨勢及其耐藥情況，對2007年1月～2009年12月入住我院的急性呼吸道感染患兒的HI分布及其耐藥性進行研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1菌株來源 2007.1～2009.12入住呼吸科急性呼吸道感染患兒，采用無菌負壓吸痰器采集標本，經培養分離而得。

1.1 .2 HI選擇性培養基 以哥倫比亞瓊脂(OXOID公司產品)為基礎制備巧克力平板，澆注平板前(約50℃)加入萬古霉素(50mg/l)。

1.1 .3 HI藥敏培養基及抗生素紙片 采用HI專用藥敏培養基HTM(基礎瓊脂及添加劑SR158E)，抗生素紙片均為OXOID公司產品，分別為：復方新諾明(SMZ/TMP)、阿奇霉素(AZM)、氨芐西林(AMP)、氨芐西林/舒巴坦(SAM)、環丙沙星(CIP)、氯霉素(CL)、美洛培南(MEM)、四環素(TE)、頭孢呋辛(CXM)、頭孢克洛(CEC)、頭孢曲松(CRO)、頭孢他啶(CAZ)。 質控菌株為HIATCC49247。

1.1 .4 Nitrocefin紙片為美國BBL公司產品。

1.1 .5 Vitek-NHI試卡：購自上海祥和公司。

1.2 方法

1.2 .1菌株分離及鑒定 將標本接種于血平板和巧克力平板， 置35℃、5%CO2環境下培養18～24h，如血平板上不生長，在巧克力平板上生長，透明或半透明、濕潤、中等大小的菌落，染色鏡檢為革蘭陰性短小桿菌，則考慮為嗜血桿菌，進一步做因子需求試驗，可疑者用Vitek-NHI試卡鑒定證實。

1.2 .2β-內酰胺酶測定 用頭孢硝噻酚(Nitrocefin)顯色反應法測定β-內酰胺酶。

1.2 .3藥敏試驗 采用K-B法，結果按CLSI2009標準判讀。

2 結果

2.1 HI感染的陽性率 共收集到呼吸科急性呼吸道感染患者痰標本5670份，共檢出HI191株，總陽性率3.4%，其中2007～2009年陽性率分別為3.3%(55/1693)、2.6%(50/1957)、4.3%(86/2020)。

2.2 HI感染的年齡分布 共檢出HI感染191例(男 122例， 女69例)， 其中＜3歲152例，3～5歲30例，＞5歲9例，＜3歲年齡組占總陽性例數79.6%。

2.3 HI感染的季節分布見表1。

表1 HI感染的季節分布

2.4 β-內酰胺酶檢出分布 191株HI檢出β-內酰胺酶陽性65株，總陽性率34.0%，其中07～09年產 酶 率 分 別 為 34.6%(19/55)、34.0%(17/50)、33.7%(29/86)。

2.5 HI對常用抗生素的耐藥情況見表2。

表2 HI對常用抗生素的耐藥率(%)

2.6 HI對常用抗生素的多重耐藥情況 檢出多重耐藥株34株，多重耐藥率為17.8%。具體耐藥模式見表3。

表3 34株多重耐藥HI對常用抗生素的多重耐藥模式

3 討論

HI是小兒急性呼吸道感染的主要病原菌之一，由于其常寄居于人的上呼吸道，可通過呼吸道在人與人之間傳播，因此也是我國兒童社區獲得性肺炎的重要病原菌之一。在本研究中，連續3年HI的總分離率為3.4%，07～09年分別為3.3%、2.6%、4.3%，高于鐘天鷹等[1]報道2.5%的檢出率，低于楊亞靜等[2]報道11.9%的分離率，但與王傳清等[3]報道呼吸道感染HI4.5%的陽性率較接近。HI引起的兒童呼吸道感染主要發生于3歲以下年齡組，占總陽性數的79.6%，這可能由于3歲以下嬰幼兒的免疫系統發育尚未健全，缺乏對HI的抵抗力，使得HI易于在呼吸道定植有關。從季節分布看，HI引起的呼吸道感染主要發生于冬春季，占總陽性數的63.9%，以春季最高，其次是冬季、夏季，秋季最低。這主要與寒冷季節兒童局部呼吸道粘膜防御下降以及室內通風不良等因素有關。

隨著抗生素在臨床上的廣泛使用，全球HI的耐藥性也不斷增加。氨芐西林作為治療HI感染的一線用藥，其耐藥形勢不容樂觀，自從1972年首次在歐洲報道耐藥以來，世界各國相繼有其耐藥的報道，在我國不同地區報道有所差別，在3.2～50.0%之間[4]。本研究顯示，2007～2009年，氨芐西林耐藥率在33.7～41.8%，明顯高于本地區2001～2003年15.6%的研究結果[4]，亦高于 廣州地區30.0%與歐洲16.8%的結果[5，6]。從其耐藥機制看，HI對氨芐西林耐藥主要是產生β-內酰胺酶，且主要以質粒介導的TEM型為主[7]，本研究未發現β-內酰胺酶陰性氨芐西林耐藥株。三年中HI的總產酶率為34.0%，高于本地區2001～2003年16.3%的結果[4]。

藥敏結果顯示，HI對SMZ/TMP耐藥最為嚴重，其次是氨芐西林、四環素、頭孢克洛、氯霉素，而對其他抗生素的耐藥率均小于5%，但我們發現阿奇霉素耐藥率有逐年增高趨勢，其耐藥性值得關注。在本研究中共檢出HI多重耐藥株34株，多重耐藥率為17.8%，且主要為氨芐西林合并其他抗生素耐藥，這可能與質粒介導的β-內酰胺酶耐藥基因同時又攜帶其他抗生素的耐藥基因有關。從其耐藥模式看，主要以AMP+SMZ/TMP+CL+TE耐藥為主，其次是AMP+SMZ/TMP+CEC和AMP+SMZ/TMP+CEC+TE耐藥，而其他幾種耐藥模式較少，其具體耐藥機制有待進一步探討。

[1]鐘天鷹,遲富麗,王惠云,等.807株流感嗜血桿菌的血清分型及耐藥性的研究[J].中國生化藥物雜志,2008,29(3):199-200.

[2]楊亞靜,黃 誠,王 莉,等.兒童下呼吸道感染1523例細菌病原分析[J].四川醫學,2007,28(1):105-106.

[3]王傳清,王藝,王曉紅,等.2000至2006年復旦大學附屬兒科醫院呼吸道感染患兒4種常見細菌分離率及耐藥趨勢[J].中國循證兒科雜志,2007,2(3):197-204.

[4]陶云珍,諸麗娟,閔蘭芳,等.兒童感染流感嗜血桿菌的耐藥性分析[J].中國抗感染化療雜志,2004,4(6):337-339.

[5]Fluit AC,Florijn A,Verhoef J,et al.Susceptibility of European beta-lactamase-positive and-negative Haemophilus influenzae isolates from the periods 1997/1998 and 2002/2003[J].Antimicrob chemother,2005,56(1):133-138.

[6]黃旭強,肖作源,鄧 力,等.2003-2004年廣州地區兒童肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌抗生素敏感性調查[J].中華兒科雜志,2006,44(6):441-444.

[7]Karlowsky JA,Verma G,Zhanel GG,et al.Presence of ROB-1 beta-lactamase correlates with Cefalor resistance among recent isolates of Haemophilus influenzae[J].Antimicrob chemother,2000,45:871-875.