正交法優選關木通醋炙炮制工藝

董鳳勇

（德惠市城區防疫站，吉林德惠130300）

關木通為馬兜鈴科木質藤本木通馬兜鈴去粗皮的木質藤莖，木通馬兜鈴主產東北，習稱“關木通”。其主要成分有齊墩果酸，常春藤皂苷元，馬兜鈴酸Ⅰ、Ⅵ、B、D，青木香酸，馬兜鈴苷等［1-3］。本實驗以馬兜鈴總酸為指標，采用分光光度法，結合正交設計對關木通的醋炙炮制工藝進行了研究，以期篩選出醋炙炮制法減除馬兜鈴酸的最佳條件。

1 儀器、材料與試藥

1．1 儀器 T6系列紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；AUY220分析天平（日本島津）；RE-52AA減壓旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；FW-100粉碎機（北京中興偉業儀器有限公司）。

1．2 材料與試藥 氨水，鹽酸，乙酸乙酯，無水乙醇，均為分析純（北京化工廠）；馬兜鈴酸A對照品（中國藥品生物制品檢定所）；關木通（長春市弘康醫藥藥材有限公司）；經張連學教授鑒定為馬兜鈴科木質藤本木通馬兜鈴去粗皮的木質藤莖。

2 實驗方法

2．1 設計實驗 關木通醋炙炮制工藝中的影響因素有醋的種類，如陳醋、白醋還有醋精；炒炙前浸泡的時間與浸泡時醋的用量等。根據預實驗驗證得傳統工藝中常用的文火炮制可以得到穩定的實驗結果，故確定選擇文火炮制；同時確定正交設計因素為：醋的種類選擇、炮制前的浸泡時間與醋的用量。各因素相應安排了3個水平，選用L9（34）正交表安排試驗，因素水平的安排見表1。

表1 因素及水平

2．2 對照品的制備 精密稱定馬兜鈴酸A對照品2．4mg，置于50 mL容量瓶中，加無水乙醇定溶至刻度，得濃度為0．048mg／mL的儲備液。

2．3 方法學的考察

2．3．1 標準曲線的繪制 將馬兜鈴酸A對照品儲備液用無水乙醇稀釋成7個不同濃度的對照品溶液，濃度分別為 0．002，0．004，0．006，0．008，0．010，0．012，0．014，0．016 mg／mL。以無水乙醇為空白對照，在317 nm處測定吸光度值，分別測定3次。以馬兜鈴酸A濃度（C）為橫坐標，以吸光度平均值（A）為縱坐標繪制標準曲線。

2．3．2 穩定性實驗 取A1B1C1醋炙關木通乙醇提取液，以無水乙醇為空白對照，在 0，2，4，6，16，24 h 測定317 nm處的吸光度值。

2．3．3 精密度實驗 取A3B3C3醋炙關木通粉末供試品液，按含量測定方法重復測定6次，測得其含量平均值。

2．3．4 加樣回收率試驗 取已知含量的 A1B1C1醋炙關木通粉末（過四號篩）0．3 g，精密稱定，共5份，分別加入7．5%氨水60 mL，冷浸過夜，補足重量，濾過，取續濾液 10 mL，以 6 mol／L 鹽酸調 pH ＝ 2，加10mL乙酸乙酯萃取4次，合并有機層，用20 mL水洗至中性，回收溶劑，殘渣加無水乙醇溶解并稀釋至10 mL，取2mL加無水乙醇并稀釋至10mL，加入一定量對照品，測定含量，計算加樣回收率。

2．4 樣品中馬兜鈴酸的測定

2．4．1 樣品的炮制 取關木通生藥，按照 L9（34）正交安排試驗。將9組樣品分別置炒鍋內用中火炒制5min。冷卻、干燥，再次稱重，即得。

2．4．2 供試品溶液的制備 取炮制品0．3 g，精密稱定，加入 7．5%氨水 60 mL，稱重，冷浸過夜，補足重量，濾過，取續濾液10mL，以6 mol／L鹽酸調 pH＝2，加10 mL乙酸乙酯萃取4次，合并有機層，用20 mL水洗至中性，回收溶劑，殘渣加無水乙醇溶解并稀釋至10 mL，取2 mL加無水乙醇并稀釋至10 mL，即得。

2．4．3 馬兜鈴總酸的含量測定 按上述方法將炮制后的待測藥材粉末制備成供試品溶液，利用紫外分光光度計，以無水乙醇為空白對照，在波長317nm處測定各樣品吸光度A值。代入回歸方程得出濃度值，計算其含量。

3 結果與分析

3．1 方法學考察結果

3．1．1 線性關系考察結果 由測定結果得回歸方程為 A＝55．229C－0．009 4（r＝0．999 8，n＝3）馬兜鈴酸A含量在0．002～0．016mg范圍內與其吸光度呈良好線形關系。

3．1．2 穩定性實驗、精密度試驗測定結果 分別通過對A1B1C1的穩定性考察、對A3B3C3的精密度考察，得到各方法學考察的馬兜鈴總酸含量及其各組含量的平均值與標準偏差。結果表明：（1）A1B1C1在 0，2，4，6，16，24 h測定吸光度值，其標準偏差，即RSD% ＝0．510 2%，表明實驗的穩定性良好；（2）A3B3C3在相同條件下對同一樣品分別測定6次，RSD% ＝0．725 7%，實驗的精密度良好；（3）穩定性實驗RSD＜2%，精密度實驗RSD＜2%，符合2005版《中國藥典》規定。

3．1．3 加樣回收率的測定 結果表明，平均加樣回收率為 97．86%，RSD＝1．809% ＜5%，符合《中國藥典》規定。

3．2 L9（34）正交實驗馬兜鈴總酸含量的測定 結果表明，在不同的因素中馬兜鈴酸的含量測定結果值在0．701 3%～0．895 4%范圍內，其中以醋炙法 A3B3C2中馬兜鈴總酸含量最高，A1B1C1中總酸含量最低。以馬兜鈴酸總酸為考察指標，進行F檢驗得到：醋的種類對總酸含量有顯著的影響，醋的用量與浸泡時間對結果影響不顯著。直觀分析對馬兜鈴酸總酸含量的影響因素的順序為C＞A＞B。通過正交實驗得到醋炙法炮制關木通最佳條件為A1B1C1（即：醋的用量15mL；浸泡時間：20min；醋的種類：陳醋）。

4 結論

本實驗通過正交方法對關木通進行了L9（34）的正交設計，并采用紫外分光廣度法對其馬兜鈴總酸含量進行了測定。得到了醋炙關木通炮制的最佳條件是 A1B1C1（即：醋的用量 15 mL；浸泡時間：20 min；醋的種類：陳醋）。醋炙法炮制關木通得到的含量結果穩定。優選的工藝穩定可行。

［1］中華人民共和國藥典委員會．中國藥典［S］．北京：人民衛生出版社，1995：12．

［2］張曉明，鄭法雷．馬兜鈴酸引起的腎臟損害［J］．國外醫學：泌尿系統分冊，2000（3）：60．

［3］趙輝，李占靈，張敬來．不同取代基馬兜鈴酸分子穩定性研究［J］．河南農業大學學報，2006，40（4）：436-439．