循環腫瘤細胞計數在胃癌患者中的臨床應用

王禮泉，王玉華，崔進貝

（山東省濰坊市人民醫院，山東濰坊 261041）

胃癌是一種嚴重威脅人民身體健康的疾病，可發生于任何年齡，但以40～60歲多見，男多于女（約為2∶1）。 血行播散是腫瘤轉移的重要途徑，腫瘤細胞可以通過血液循環抵達任何組織和器官，隨著腫瘤細胞的不斷增殖，部分細胞失去相互附著的能力從腫瘤母體脫離，降解、浸潤周圍組織進入到血液或淋巴系統中。這些自發或因診療操作進入外周血循環的腫瘤細胞被稱為CTCs[1-3]。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2009年8月～2010年3月在濰坊市人民醫院就診的胃癌患者50例，胃潰瘍患者50例，健康志愿者50例，其中，男性98例，女性52例，平均(47±13)歲，各組間性別、年齡無明顯差異。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集及核細胞提取 清晨空腹采集確診胃癌患者、胃潰瘍患者、健康志愿者靜脈血各10 ml；加入淋巴細胞分離液，密度梯度離心方法分離單個核細胞。

1.2.2 免疫磁性微珠制備[4,5]磁珠經60Co照射滅菌，加HAbl8，磁場中除上清，除去未結合的單抗，PBS封閉磁珠，4℃保存備用。

1.2.3 單個核細胞的免疫磁性標記[6-8]按照每10 ml血標本加入300 μl免疫磁珠的比例，將標本分離所得的單個核細胞與磁珠混勻，4℃孵育30 min，用分離緩沖液制成1 ml細胞懸液備用。

1.2.4 免疫磁性分離 將標記的細胞懸液通過磁性分離柱，并用緩沖液沖洗柱子；將磁性分離柱從磁場中移開，用稀釋緩沖液洗脫柱內細胞；將收集的細胞液離心后加入緩沖液1 ml，光鏡下細胞計數，取3個視野的平均值，計算外周血中癌細胞的濃度。

1.3 統計學方法

本研究采用SPSS 13.0軟件對數據進行分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

50例胃潰瘍患者及50例健康的志愿者外周血中未發現 CTCs，胃癌患者 CTCs數目為（16.40±8.15）。

3 討論

隨著納米技術擴展應用，納米免疫磁珠為腫瘤細胞生物診斷技術提供了分離手段，其原理是基于細胞表面抗原以及某種蛋白與連有免疫磁珠的特異性單抗相結合，外加磁場后通過抗體與免疫磁珠相連細胞和蛋白吸附而滯留在磁場中，由于免疫磁珠表面的單抗只結合含有特異性抗原的細胞和蛋白，從而達到與其他種類的細胞和蛋白相分離的目的。此種分離技術將抗原抗體反應的高度特異性和免疫磁珠的富集分離作用相結合，達到特異性的生物活性物質和細胞的富集和分離效果，使其在臨床醫學診斷上具有廣闊的應用前景[9]。

絕大多數胃癌患者無明顯體征，部分患者有上腹部輕度壓痛。位于幽門竇或胃體的進展期胃癌有時可捫及腫塊，腫塊常呈結節狀、質硬，當腫瘤向鄰近臟器或組織浸潤時，腫塊常固定而不能推動，女性患者在中下腹捫及腫塊，常提示為krukenbe瘤可能。轉移途徑：直接播散是浸潤型胃癌可沿黏膜或漿膜直接向胃壁內、食管或十二指腸發展。癌腫一旦侵及漿膜，即容易向周圍鄰近器官或組織如肝、胰、脾、橫結腸、空腸、膈肌、大網膜及腹壁等浸潤。癌細胞脫落時也可種植于腹腔、盆腔、卵巢與直腸膀胱陷窩等處。淋巴結轉移占胃癌轉移的70%，胃下部癌腫常轉移至幽門下、胃下及腹腔動脈旁等淋巴結，而上部癌腫常轉移至胰旁、賁門旁、胃上等淋巴結。晚期癌可能轉移至主動脈周圍及膈上淋巴結。由于腹腔淋巴結與胸導管直接交通，故可轉移至左鎖骨上淋巴結。部分患者外周血中可發現癌細胞，可通過門靜脈轉移至肝臟，并可達肺、骨、腎、腦、腦膜、脾、皮膚等處。

本研究發現50例胃潰瘍患者及50例健康的志愿者外周血中未發現 CTCs，胃癌患者 CTCs 數目為（16.40±8.15），僅在胃癌患者檢測出CTCs，循環腫瘤細胞的檢測有助于發現早期腫瘤患者的微轉移，重新確定臨床分期，監測術后患者腫瘤復發與轉移，評估預后，選擇個體化的治療策略；同時為胃癌的早期篩查提供新的方法。

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