冰凍切片的技巧

張麗芳

冰凍切片是目前臨床病理檢查中最常用的快速制片方法。是在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度然后進行切片的一種方法，具有速度快、方便的特點。冰凍切片與常規石蠟切片相比局限性和難度較大。如果出現切片不完整、厚薄不均、刀痕、冰晶等情況常導致細胞腫脹變形使診斷困難甚至誤診。而冰凍切片病理診斷的重要性是不言而喻的，制作1張優良的冰凍切片包含著許多細節，為此對技術人員的要求很高。通過積極探索和工作實踐本文就冰凍切片的一些技巧進行介紹。

1 取 材

取材須由經驗豐富的病理醫師負責這樣才能保證取到合適的病變。取材時盡量保持刀具與臺面的干燥避免組織與水接觸。如送檢組織內含水或血性液，應用干燥的紗布或者濾紙把水吸干，可提高切片質量，防止空洞、冰晶等現象出現。取材應盡量小些一般可切取1.5cm×1.5cm×0.3cm，組織厚度勿超過4mm[1]，這樣有利于組織的速凍及形態結構保存[2]。因脂肪組織不易切片取材中應盡量剔除[3]。

2 速 凍

速凍是冰凍切片的關鍵，冷凍的速度可有效的減少冰晶的出現。因此冰凍時間的控制對切片影響尤為重要。一般較硬組織如子宮肌瘤1～2min，軟組織以及細胞豐富的組織如肝、脾、淋巴結等2～4min，脂肪組織5～6min、同時脂肪組織切片厚度要增加到8～20μm。

3 溫 度

冰凍切片的溫度要適宜，溫度過低、過高會導致組織過硬或硬度不夠，從而影響切片質量，產生搓板狀、梯田狀、厚薄不均、破碎或粉末狀現象。根據器官組織形態結構和組成成分的不同，冰凍組織切片的溫度亦不同推薦未固定的組織：乳腺、卵巢、子宮等：-20～-25℃；胃、腸：-18～- 20℃；甲狀腺、肝、腎、脾等：-15℃左右；脂肪組織一般在-35℃以下。已固定的組織最好選擇-12℃～-17℃[4]。

4 切 片

可提前將鋒利的切片刀調節合適的角度安在刀架上，可使切片刀的溫度適宜，防止出現切片粘連。切片時需注意抗卷板與刀鋒的距離，用力需均勻、柔和，防止污染及切片皺折，先將組織輕修后再觀察切面，盡量修至最大切面，帶包膜的組織一定要切完整小的結節或重點病變部位要切到位，必要時多個切面貼片。附貼切片時動作需輕巧、快速，用力需均勻，防止切好的組織卷曲出現皺褶。

5 固 定

附貼好的組織切片應立刻放入AAF液（95%酒精85mL+甲醇10mL+冰醋酸5mL）中固定。若固定液濃度過低或組織內含過多的壞死組織易導致切片脫落。一些含脂肪較多的組織為防止掉片可將切片先用電吹風吹干、再經切片固定時間長些（或經95%酒精雙重固定），后再行染色，同時保持載玻片干凈，應定期更換固定液。

6 染色、封固

為提高冰凍診斷的準確率，對冰凍切片染色要求較高，要求著色佳，細胞染色要求核質分明、對比度好。固定好的組織切片經水洗后直接入蘇木素1～2min（冬季蘇木素著色較慢，可將蘇木素預放入37℃溫箱30～60min，或直接將切片置于酒精燈上加熱，由于酒精燈加熱溫度過高，故應將切片左右前后移動）→充分水洗→鹽酸酒精分化（有一些可省略如纖維較多的組織） →PBS或氨水藍化→水洗→75%酒精→0.5%伊紅→80%乙醇→95%乙醇→無水乙醇→無水乙醇（或正丁醇易使乙醇與二甲苯的相融性） →二甲苯浸泡兩次→吹干（先用熱風吹后用冷風吹）→中性樹膠封固。在天氣潮濕時須及時更換無水乙醇及二甲苯，否則會影響脫水易出現切片不透明出現云霧現象，從而影響閱片。封片時要做到無氣泡、無溢液、標簽清楚端正，保證切片的整潔。這樣做出來的組織切片可使切片完整、平坦、厚薄均勻、染色分明、結構清晰，明顯減少細胞腫脹、收縮，有利于提高診斷的正確率。

總之，冰凍切片是較難掌握的病理實驗技術之一，只有掌握好技巧才能不斷提高切片質量，提高冰凍診斷水平、減少誤差率。

[1]陳潔.制作冰凍切片的幾點體會[J].現代實用醫學,2001,13(12):614.

[2]田玉旺,丁華野.一種減少冷凍切片組織內冰晶的處理方法[J].臨床與實驗病理學雜志,2002,18(5):568.

[3]李梅.提高病理冰凍切片質量的體會[J].醫學信息,2009,22(12):2801-2802.

[4]吳艷霞.冰凍切片的制作方法分析[J].吉林醫學,2009,30(6):493-494.