急性腦梗死患者內皮祖細胞增殖能力和衰老研究

苗 旺 劉恒方 郭偉新 楊期東 鮑 娟 羅紅波

1)鄭州大學第一附屬醫院神經內科 鄭州 450052 2)鄭州大學第五附屬醫院 鄭州 450052 3)中南大學湘雅醫院神經內科 長沙 410008

我們測定急性腦梗死患者外周血來源的內皮祖細胞(EPCs)增殖能力和衰老情況,并與其年齡和基礎疾病相匹配的對照組相對比,以探討急性腦梗死對患者EPCs增殖能力和衰老的影響,從而為腦血管損傷修復和再生研究提供理論基礎。

1 資料和方法

1.1一般資料收集湘雅醫院神經內科經頭顱MRI確診為急性腦梗死住院患者16例,發病 1 d內,年齡 60～75歲,平均(64.5±7.4)歲,其基礎疾病為高血壓。對照組患者為門診高血壓16例患者,年齡 59～75歲,平均(63.8±8.4)歲。2組年齡和高血壓史、程度差異無統計學意義(P＞0.05)。排除其他可能影響EPCs動員和功能的因素、疾病和藥物應用史。征得患者及家屬知情同意。

1.2實驗方法

1.2.1 外周血內皮祖細胞的分離、培養:抽取空腹上肢靜脈血10 mL。按文獻所述方法進行 EPCs分離和培養[1]。細胞接種密度為2×106個/mL。

1.2.2 內皮祖細胞增殖能力、集落和細胞計數,衰老細胞檢測:內皮祖細胞增殖能力、集落和細胞計數于培養第7天進行,具體方法參考相關文獻[2]。取培養 2周 EPCs,采用細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測衰老情況,隨機選取5個高倍視野(×200),每個視野計數細胞總數100個,統計其中的衰老細胞數,取其平均值。

1.3統計學處理采用SPSS 11.5統計學軟件進行統計學分析,數據以均數±標準差±s)表示,2組之間比較采用t檢驗,以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

ACI組EPCs增殖能力為 0.245±0.066,對照組為0.185±0.050,2組相比ACI組明顯增強,差異具有統計學意義(P＜0.05);EPCs計數 ACI組為69.74±6.34,對照組為57.10±9.28,2組相比 ACI組相對增多,差異具有統計學意義(P＜0.05);ACI組EPCs集落數目為 3.02±0.68,較對照組的1.90±0.41明顯增加,差異具有統計學意義(P＜0.05)。培養2周時EPCs衰老細胞計數急性腦梗死組為44.76±6.78,與對照組的 46.85±5.06相比,差異無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

腦梗死發生在血管損傷基礎上,研究表明在急性血管損傷時,外周血中內皮祖細胞數目迅速增加[3-4],以滿足血管損傷修復需要。新近研究表明,腦梗死急性期外周血內皮祖細胞增加[5],EPCs參與損傷血管的修復,不僅與從骨髓動員入外周血中的數目有關,而且與外周血中EPCs的增殖能力、是否易于衰老關系密切[6-7]。我們的結果顯示,急性腦梗死血管損傷將使EPCs增殖能力明顯增強,從而使得細胞集落計數、細胞計數也較對照組顯著提高。說明在急性腦梗死時不僅EPCs動員增加,而且 EPCs的增殖能力增強,以便機體應對血管損傷的嚴重事件。急性腦梗死EPCs數目增多、功能增強的機制可能與下列因素有關。組織缺血是動員骨髓EPCs釋放到外周血中的一種很強的刺激因素[8]。急性缺血時可以上調VEGF[9]和SDF-1[10]的表達。通過MM P-9依賴機制來誘導祖細胞從骨髓中動員[11],還可以增強EPCs的功能[12]。腦梗死時腦組織損傷,組織缺氧,因此可以反應性分泌釋放一些細胞因子來動員EPCs并增加其功能,從而應對血管損傷應激需要。

EPCs是具有譜系定形的祖細胞,將通過復制衰老而使其具有一定的壽命限制。Imanishi[13]研究顯示體外EPCs細胞培養培養一段時間后細胞發生衰老,功能下降。我們的實驗結果顯示,雖然在急性腦梗死時EPCs的增殖能力增強,但衰老細胞計數和對照組差異無統計學意義,說明急性腦出血應激并不能延緩培養一段時間后EPCs的衰老。衰老的EPCs功能下降,將影響在損傷血管的修復和再生中的作用。為了使EPCs能夠在腦出血的血管再生或防治血管病變的進一步發展中發揮更重要的作用,就需要尋找某些方法或措施來延緩細胞的衰老。

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