瓶爾小草黃酮類化合物的分離及紫外光譜鑒定

張志信,張仕秀

(文山學院生化系,云南文山 663000)

瓶爾小草科植物瓶爾小草 (Ophioglossum vulgatumL.)又稱一支箭、一支槍、獨葉一支箭、單槍一支箭、一矛一盾、矛盾草、蛇須草。以全草入藥,清熱解毒,消腫止痛。用于小兒肺炎,脘腹脹痛,毒蛇咬傷,疔瘡腫毒;外用治急性結膜炎,角膜云翳,眼瞼緣炎。分布東北、陜西、湖北、云南、貴州、廣西、臺灣及長江下游等地[1-2]。

黃酮類化合物廣泛存在于植物中,生理活性作用廣泛,能維持血管正常的滲透壓、防止血管脆化,對多種炎癥、冠心病、心絞痛等均有良好的療效。同時,黃酮類化合物還是一種良好的活性自由基清除劑,具有調整免疫和內分泌作用,還有抗癌、抗炎等多種醫療保健作用,是一類重要的生物活性因子。據文獻報道瓶爾小草中主要含 3-O-甲基槲皮素、7-O-雙葡萄糖苷、4′-O-葡萄糖苷[3]。瓶爾小草功效與黃酮類化合物有著密切關系,實驗通過探討瓶爾小草中黃酮類化合物的提取、紫外光譜分析,從而判斷瓶爾小草中黃酮類化合物的特性,為充分利用瓶爾小草資源提供依據。

1 儀器、試劑及材料

1.1 儀 器

UV-2550紫外分光光度計 (日本島津),R-201旋轉蒸發器 (上海申順生物科技有限公司),DZF-6020型真空干燥箱 (上海 -恒科技有限公司),DHG-9076A型電熱恒溫鼓風干燥箱 (上海躍進醫用光學器械廠),XA-1型高速萬能植物粉碎機 (江蘇姜堰市洪林電器設備廠)。

1.2 試 劑

乙醇,甲醇,鹽酸,氯化鋁,硅膠板,氫氧化鈉,硼酸,醋酸鈉,冰乙酸,正丁醇,氯化鐵均為分析純。

1.3 材 料

瓶爾小草,購于文山縣中草藥市場,經文山學院沐建華老師鑒定為瓶爾小草科植物瓶爾小草。

2 實驗方法

2.1 黃酮類化合物的提取

瓶爾小草洗凈稱取烘干后粉碎,過 60目篩,取100 g,加 8倍量的 75%乙醇回流提取 1.5 h,重復提取 3次,合并 3次提取液抽濾,濾液濃縮至浸膏狀,加 1/3倍量聚酰胺粉拌成糊狀,60℃真空干燥后研磨成細粉備用。[4]

2.2 聚酰胺樹脂的預處理

以 95%乙醇浸泡 24 h后,4倍體積 95%乙醇洗脫,控制流速 1 mL/min,再以大量蒸餾水洗至無醇味,備用。

2.3 分離純化

取處理好的聚酰胺粉,均勻放置于聚酰胺柱頂端,用蒸餾水洗至顏色極淡,再分別用 10%,30%,50%,70%和 90%的乙醇溶液作為洗脫劑,以 1 mL/min流速依次洗脫,分別收集各梯度洗脫液,減壓濃縮至干,重結晶。

2.4 紫外光譜特性

將樣品分別用甲醇溶解,制備成 0.04 mg/mL的溶液,然后在UV-2550紫外分光光度計上測定,以甲醇作參比液,掃描范圍為 200～600 nm,再在提取物的甲醇溶液中加入不同的診斷劑,以無水甲醇作參比進行掃描。[5-6]

3 結果與分析

選取各種濃度的乙醇洗脫液進行紫外光譜特性分析,分別得到 10%,30%,50%,70%和 90%乙醇洗脫液的紫外特征情況,結果見表 1～5所示。

表1 10%乙醇洗脫液的紫外特征

表2 30%乙醇洗脫液的紫外特征

表3 50%乙醇洗脫液的紫外特征

表4 70%乙醇洗脫液的紫外特征

表5 90%乙醇洗脫液的紫外特征

4 結 論

由 10%,30%,50%,70%和 90%乙醇洗脫液的紫外光譜特性分析可知,在無水甲醇溶液作為溶劑的溶液中,其紫外特征在帶Ⅰ (300～400 nm),帶Ⅱ (220～280 nm)處都有明顯的吸收峰,當在不同乙醇濃度的洗脫液的甲醇溶液中加入不同的診斷劑后,其吸收峰都發生了明顯的紅移現象。在溶有醋酸鈉的甲醇溶液中加入硼酸后,因結構中鄰二酚羥基可在醋酸鈉的堿性條件下與硼酸鰲合,引起相應的峰帶紅移,在 70%乙醇洗脫液中此紅移現象較明顯,可判斷此提取物中的黃酮類化合物結構中含有B環上有鄰二酚 OH。當加入甲醇鈉后立即測定,90%乙醇洗脫液帶Ⅰ紅移 55 nm,由此可判斷其母核上含有有 4′-OH或 7-OH;70%乙醇洗脫液帶Ⅰ紅移 65 nm,由此可判斷其母核為查耳酮則含有 4′-OH或 2-OH,帶Ⅱ紅移 47 nm,有 5,7-二 -OH;50%乙醇洗脫液帶Ⅰ紅移 53 nm,由此可判斷其母核上含有 4′-OH或 7-OH,30%乙醇洗脫液帶Ⅰ紅移 53 nm則母核有 4′-OH或 7-OH,帶Ⅱ紅移 7 nm,A環無羥基 10%乙醇洗脫液帶Ⅰ紅移 53 nm由此可判斷其母核上有 4′-OH或 7-OH,帶Ⅱ不紅移 A環無羥基[7]。

[1] 朱成蘭.云南常用中草藥彩色圖譜[M].海口:海南出版社,2003:203.

[2] 范亞文,包文美,王全喜.中國瓶爾小草科植物孢子形態的研究[J].西北植物學報,1997,(6):182.

[3] 趙保發,張志信,張仕秀,等.不同采收季節瓶爾小草黃酮類化合物含量分析 [J].時珍國醫國藥,2009,(2):345-346.

[4] 肖義軍,陳元仲,陳炳華,等.不同寄主紅花桑寄生總黃酮提取物抗白血病細胞株 HL-60的研究 [J].中國中藥雜志,2008,(4):427-431.

[5] 張海德,張水華,肖凱軍,等.醬油中黃酮類物質的分離與鑒定[J].食品與發酵工業,2008,(1):46-49

[6] 郭珍.紫外光譜在天然產物結構鑒定中的應用[J].光譜實驗室,2006,(3):594-597.

[7] 田燕.紫外 -可見光譜在黃酮類鑒定中的應用 [J].大連醫科大學學報,2002,(3):312-214.