西南齒唇蘭的組織培養與快速繁殖

張 鐵,李洪超

(1.文山學院生化系,云南文山 663000;2.文山州生物資源開發研究中心,云南文山 663000)

1 植物名稱

西南齒唇蘭 [Anoectochilus e lwesii(Clarke ex Hook.f.)King et Pantl](圖 1),別名:西南開唇蘭(橫斷山區維管植物、中國蘭花全書)、鍾氏齒唇蘭(臺大實驗林研究報告)、鍾氏金線蓮 (臺灣蘭科植物彩色圖志)[1]。

2 材料類別

種子。

3 培養條件

種子萌發培養基: (1)MS+100 mL·L-1椰汁;(2)1/2MS+100 mL·L-1椰汁。原球莖繼代增殖培養基: (3)MS+6-BA 1.0 mg·L-1(單位下同)+NAA 0.5 mg·L-1; (4)MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0。生根培養基: (5)1/2MS+6-BA0.2+NAA0.05+AC(活性碳 )0.5 mg·L-1+蛋白胨2 g·L-1+100 mL·L-1香蕉汁。以上培養基中均加入 3%的蔗糖、5.5 g卡拉膠,pH 5.6～5.8。培養溫度 (25±2)℃,光照每天 10～12 h。

4 生長與分化情況

4.1 材料的無菌處理

供試種子來源于移栽 1年的野生西南齒唇蘭未開裂的蒴果。首先在超凈工作臺內將蒴果用 75%的酒精處理 30 s,無菌水沖洗 3～5次,將種子取出,再用 0.1%的 HgCl2溶液浸泡 10 min,無菌水沖洗 3～5次,用無菌濾紙吸干種子表面水分。用解剖刀切開蒴果,將種子接種到培養基上。

4.2 種子萌發

將種子分別接種到萌發培養基 (1)和 (2)上,暗培養 30 d后,可見白色原球體出現 (圖 2),轉入光下培養,1周后原球莖轉綠 (圖 3),4周后原球莖上長芽。培養基 (1)的萌發率比較低,在50%左右,且培養 1個月后發現部分原球莖死亡;培養基 (2)上種子的萌發速度和生長速度更快,約有 85%萌發,結果表明 1/2MS培養基較MS培養基更有利于西南齒唇蘭種子萌發。

4.3 原球莖繼代增殖

將初代培養的原球莖和芽分別轉接至培養基(3)和 (4)上繼代增殖培養,在培養基 (3)和(4)上原球莖大多形成植株,但是在培養基 (4)上原球莖增殖、生長速度最快 (圖 4),約 50～60 d能繼代增殖 1次。由此可見,生長素NAA和細胞分裂素 6-BA組合是原球莖繼代增殖的主要因素,以細胞分裂素與生長素濃度比為 1∶2時效果最佳。

4.4 生根與移栽

將增殖瓶中 3～4 cm長的苗切下,接入培養基(5)中進行根的誘導。15 d開始生根 (圖 5),生根率可達 98%,待根長至 3～4 cm時,生長為高 3～5 cm的小苗,在室溫下煉苗 1周,取出洗去根部培養基,移栽至腐葉土∶鋸木 (2∶1)的基質中。管理中保持適度溫濕度,置于陰涼通風處栽培,期間不要澆水,有利于新根生長和防止病害發生,4周后可以進行正常水、肥、藥管理,成活率可達 90%以上。

5 意義與進展

西南齒唇蘭為蘭科開唇蘭屬植物,為國家 II級保護植物 (第二批),西南齒唇蘭主要靠有性繁殖和無性繁殖兩種方式繁衍種群,種子自然繁殖非常困難,自然增殖率低,通過種子進行組織培養可以解決這個問題。同屬的金線蓮、臺灣金線蓮和滇越金線蓮的組織培養已有報道[2-5],但西南齒唇蘭的組織培養和快速繁殖尚未見報道。本文研究結果對開齒唇蘭屬植物的保護與開發,有一定的參考價值。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京:科學出版社,1999:217-218.

[2] 黃慧蓮,劉賢旺.金線蓮的組培快繁 [J].植物雜志,2002,(4):33-34.

[3] 段玉云,曾黎瓊,程在全.臺灣金線蓮的組織培養與快速繁殖[J].植物生理學通訊,2005,(4):194.

[4] 李秀軍,陳穗云,王玉梅,陳永哲.臺灣金線蓮 (Aoectochilusformosanus)的組培快繁研究 [J].青海師范大學學報 (自然科學版),2004,(3):91-93.

[5] 張鐵,田雪琪,李彬.滇越金線蓮快速繁殖技術研究[J].文山師范高等專科學校學報,2006,(3):110-114.