對乙型肝炎患者檢測乙肝表面抗原大蛋白和前S1抗原的區別和臨床意義

王 宇，楊延敏

(北京豐臺醫院 檢驗科，北京100071)

近年來隨著對乙肝表面抗原大蛋白中前S區抗原在乙肝發病機制、感染與復制等方面研究的深入，研究者們逐漸認識到乙肝表面抗原前S區具有非常重要的臨床意義[1-3]。研究人員發現，乙肝表面抗原大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein,LHBs)在空間上具有兩種不同的跨膜構象。作為乙肝病毒的包膜蛋白，其內側可以和HBV核殼體膜結合，外側可與易感細胞受體結合，是HBV顆粒成熟包裝的關鍵[1]。由于單獨的前S區抗原作為乙肝表面抗原大蛋白的一部分，無法模擬其復雜的拓撲結構，通過此種方法制作的單克隆抗體只具有線性表位但是失去了構象型表位。這樣針對低級結構抗原制作出的單克隆抗體在實際應用中可能導致漏檢。本文使用北京熱景生物技術有限公司研制的LHBs酶免定量試劑盒研究乙肝表面抗原大蛋白檢測用于臨床的意義，該試劑盒包被針對構象型前S區的高親和力、高特異性的單抗來檢測LHBs。

1 材料和方法

1.1 材 料

血清標本均來自2008年3月～2009年5月北京豐臺醫院門診或住院患者，共計156例。其中，男85例，女71例。年齡16～79歲，平均47.5歲。所有標本均于-20℃保存以備用。Roche公司生產LightCycler自動熒光PCR儀；酶標儀(DENLEY DRAGON MK3)；美國雅培公司AxSYM化學發光免疫測定系統。

1.2 方 法

1.2.1 乙肝表面抗原大蛋白以及乙肝前S1檢測：采用酶聯免疫方法，乙肝表面抗原大蛋白酶免定量試劑由北京熱景生物技術有限公司提供；乙肝前S1試劑購自上海阿爾法生物技術有限公司。

1.2.2 乙肝兩對半檢測：采用化學發光方法檢測，為AxSYM定量測定配套試劑。

1.2.3 HBV DNA檢測：采用熒光定量方法，檢測試劑盒購自深圳匹基生物工程有限公司，靈敏度為5.0×102copies/mL，取≥1×103copies/mL為陽性，陰性時取實測拷貝值，低于靈敏度以下作零拷貝處理。

1.3 統計學方法

2 結 果

2.1 不同乙肝兩對半模式患者血清LHBs、HBV DNA以及乙肝前S1檢出情況比較

相同乙肝兩對半模式組中，LHBs的陽性率與HBV DNA的陽性率比較差異無顯著性意義(P>0.05)；在所有HBsAg陽性患者中LHBs的陽性率明顯高于乙肝前S1的陽性率，差異均有顯著性意義(P<0.05)；不同的乙肝兩對半模式組中，LHBs的陽性率經過卡方檢驗組間差異均有顯著性意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同乙肝模式患者中LHBs、HBV DNA與乙肝前S1檢測比較Tab 1 The comparison of LHBs,HBVDNA and HBV preS1 in different HBV M patients (n)

1)1=HbsAg; 2=HbsAb; 3=HBeAg; 4=HBeAb; 5=HBcAb

2.2 HBeAg陽性和陰性患者中LHBs、HBV DNA以及乙肝前S1的檢出情況比較

在HBeAg陽性中，LHBs和HBV DNA的陽性率明顯高于乙肝前S1的陽性率，兩者比較差異有顯著性意義(P<0.05)，見表2。

表2 HBeAg陽性和陰性中HBV DNA、LHBs以及乙肝前S1的檢測比較Tab2 The comparison of LHBs ,HBVDNA and HBV preS1 in HBeAg nagetive and postive patients n (%)

1)與乙肝前S1陽性率相比，P<0.05

3 討 論

目前，醫學界認為外周血HBV-DNA是HBV最直接和可靠的指標，可以用來判定患者和攜帶者有無傳染性。研究發現，亞病毒顆粒在HBV感染過程中，能明顯增強細胞內的病毒復制和基因表達。而這種增強作用是由pre-S蛋白的反式激活作用所觸發的。此外，還有研究發現在HBV形成包膜的過程中需要大蛋白(HBsAg、pre-S1和pre-S2蛋白)和中蛋白的參與。Ngee-Chis Foot[5]闡明LHBs是導致肝細胞損傷、死亡、纖維化病變的主要原因。因此，檢測LHBs對于反應病毒的持續復制、預后有有重要的臨床意義。酶聯免疫法(ELISA)一直是臨床上用于乙肝病毒感染的血清檢測手段。傳統認為乙肝兩對半中，HBeAg陽性表明HBV病毒復制活躍、傳染性較強[5]。本研究顯示，在40例HBeAg陽性患者中LHBs陽性率(95.00%)與HBV DNA的陽性率(92.50%)一致，經過卡方檢驗差異無顯著性意義；該組中乙肝前S1的陽性率(57.50%)明顯低于LHBs和HBV DNA的陽性率。結果表明，LHBs與HBV DNA的檢出具有良好的一致性，能夠準確地反映出乙肝患者體內病毒的復制情況。同時，結果還表明LHBs的檢出由于使用針對構象型前S區的單克隆抗體[6]，因而其檢出率明顯高于目前臨床上使用乙肝前S1指標。過去臨床上認為乙肝患者出現HBeAg陰轉是乙肝病毒復制減弱、傳染性降低和預后良好的象征[7]。但是，本研究顯示在116例HBeAg陰性患者中HBV DNA與LHBs的陽性率分別為45.69%和46.55%。很多研究顯示，可能是免疫清除不全或是乙肝病毒基因前C區變異所致，多為慢性乙肝，而且此類患者發生肝硬化、肝癌的風險較大[8]。

本組結果顯示，慢性乙肝患者血清使用酶聯免疫定量方法檢測LHBs與HBV DNA的檢測有良好的一致性，可部分作為HBV-DNA替代和補充檢測指標。同時可以反映HBV復制活躍程度，做為HBV 感染、復制和乙肝患者診斷、治療和預后的重要標志物，具有重要的臨床應用價值。

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