子宮內膜病變組織中脆性組氨酸三聯體基因的表達及臨床研究

安云婷 于小紅 喬志強 李漢萍 魏寶秀

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)是女性生殖器三大惡性腫瘤之一，在某些歐美國家子宮內膜癌發病率已居女性生殖道惡性腫瘤首位，嚴重危害著女性的健康。

子宮內膜癌的發生是1個多步驟的復雜過程，其確切病因仍不清楚，許多學者一直在尋找在腫瘤初期甚至在癌前期就有結構和功能異常的基因。脆性組氨酸三聯體蛋白FHIT是新近發現的抑癌基因，在人類多種腫瘤中表達缺失[1～3]。在病理情況下，抑癌基因的異常表達及細胞異常增殖在腫瘤發生上起著相當重要的作用[4，5]。因此，了解子宮內膜癌細胞抑癌基因的異常及細胞增殖的特點，探討其內在規律，對尋找更為客觀可靠診斷指標，用以監測病變的進展及指導臨床治療具有重要意義。本研究通過檢測FHIT在不同程度子宮內膜病變組織中的表達，探討FHIT在子宮內膜癌發生發展中的作用及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

隨機選取江西省婦幼保健院腫瘤科2003年1月～2009年12月收治的、經病理檢查證實為子宮內膜腺癌、子宮內膜不典型增生患者各75例，將其作為研究組，以同期因其它疾病就診并行子宮切除的正常子宮內膜患者60例作為對照組。研究組及對照組全部患者手術前均未行放療、化療以及激素治療。根據國際婦產科聯盟(FIGO)(2000年)手術-病理分期，75例子宮內膜腺癌患者分為：高分化腺癌(G1)13例；中分化腺癌(G2)47例；低分化腺癌(G3)15例。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學SP法。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中山公司，SP試劑盒購自北京中山公司。操作按產品說明書進行。陽性對照為已知FHIT基因表達陽性的乳腺組織，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定

參照文獻方法[6]觀察FHIT蛋白的分布、陽性強度和陽性率。高倍鏡下綜合染色強度和陽性細胞比例進行半定量測定，主要為胞質染色。染色強度評分標準:淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞所占比例評分標準：每例切片隨機選取腫瘤細胞密集的5個高倍鏡(400×)視野，每視野計數100個腫瘤細胞中陽性細胞數，取均值，以百分率(%)表示。陽性細胞數≤10%者1分;11%～50%者2分;51%～75%者3分;>75%者4分。染色強度與陽性細胞百分比的乘積≥2分為免疫反應陽性(+)，<2分為陰性(-)。

1.4 統計學方法

應用SPSS 11·0軟件包進行Pearson χ2檢驗、Fisherman精確概率檢驗、Spearman等級相關分析。

2 結果

正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜癌組織中FHIT陽性表達率分別為96.67%、57.33%、34.67%(表1)。75例子宮內膜腺癌中，不同病理分化程度患者FHIT陽性率分別為61.54%、34.04%、13.33%，差異具有顯著性(P<0.05)(表2)，不同病理分期患者FHIT表達無顯著差異(P>0.05)。不同增生程度子宮內膜不典型增生患者FHIT陽性率分別為64.71%、57.57%、52.00%(表3)。FHIT在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜腺癌組織中表達情況，FHIT表達主要定位于宮內膜腺體及淋巴細胞、中性粒細胞、漿細胞和組織細胞的胞核及胞質。

表1 不同子宮內膜病變組織中FHIT表達情況

表2 FHIT在子宮內膜癌組織中的表達情況

表3 不同增生程度子宮內膜不典型增生患者FHIT表達情況

3 討論

脆性組氨酸三聯體基因( fragile histidine triad gene)，即FHIT基因是1996年Ohta等[7，8]用定位克隆技術及外顯子捕獲法在3p14.2區分離鑒定出1個新的抑癌基因，在正常情況下，FHIT存在于大多數正常組織中。國外研究發現，多種腫瘤組織中FHIT蛋白表達存在頻繁地降低或丟失，并發現與FHIT基因轉錄及缺失有關，故提示FHIT基因為多種腫瘤的候選抑制基因[9～11]。

FHIT是第1個將脆性位點與腫瘤相聯系的腫瘤抑制基因。該基因在多種腫瘤中有異常表達。它有促進凋亡、抑制腫瘤生長的功能，在所有的組織包括淋巴細胞中都有表達。國內王野等[12]認為，FHIT基因與乳腺癌組織分化程度、病理分期、淋巴結轉移密切相關。大量研究證實，FHIT不僅與消化系統腫瘤的發生、發展有密切聯系，而且與肺癌、乳腺癌、腎癌、宮頸癌、卵巢癌等發生有關，這些異常主要表現為1個或數個外顯子的缺失或不明內含子序列的插入，較少發生突變。

本研究結果顯示,FHIT蛋白表達水平在正常子宮內膜、子宮內膜不典型增生、子宮內膜腺癌中逐漸下降。差異有統計學意義。提示子宮內膜由良性到惡性的轉變過程中,在不典型增生階段,可能已有FHIT蛋白表達的變化,因此，若形態學上的不典型增生同時伴有FHIT蛋白表達的減少則可能具有發展為子宮內膜癌的高危險性。不同級別的內膜不典型增生及不同期別的內膜癌中，均存在一定比例的FHIT表達異常，且有增高的趨勢，但FHIT表達異常無顯著性差異。而不同分化的內膜樣癌FHIT的表達異常有顯著性差異，隨著內膜樣癌分化的降低，癌組織中FHIT陽性細胞數量及強度明顯減少或缺失。提示FHIT低表達，可能在子宮內膜不典型增生發展至子宮內膜腺癌的過程中起作用，而與癌變后的疾病進展無關。因此，檢測FHIT表達對了解子宮內膜癌的生物學行為及判斷預后有重要的臨床參考價值。

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