血清血管內皮生長因子在肝癌介入栓塞后的表達

丁 罡 邵 懌 劉合代 黃 燕 梁宏享 趙其德

肝動脈栓塞化療(TACE)是目前被公認為對不能手術切除肝癌的安全、有效、可重復的首選常規治療方法。它可使腫瘤細胞壞死，腫瘤縮小，癥狀緩解[1]，但其遠期療效并不理想。除腫瘤未能控制外，復發和轉移是主要原因[2]。影響介入療效的病理分析提示腫瘤血管形成和側枝循環建立是重要因素[3，4]。本文通過對肝細胞肝癌患者行血管造影及測定TACE前后血清VEGF水平，初步探討腫瘤血管形成因子(VEGF)對肝癌TACE的影響，并為聯合應用血管生成抑制劑、提高腫瘤介入療效提供依據。

1 材料與方法

1.1 病例資料

63例患者分別為2006年1月至2009年10月上海交通大學醫學院附屬新華醫院崇明分院和長航醫院收治的患者,病理診斷均為肝細胞肝癌。男性49例，女性14例；平均年齡54.7歲。所有患者診斷時均無手術指征，而行肝動脈栓塞化療。

1.2 血清標本采集

患者清晨空腹抽取2 ml靜脈血，在4℃下以2 000 r/min離心15 min。取上清液200 μl保存于-80℃超低溫冰箱,待集中后測定。發生溶血或渾濁的血清不宜用于測定。其中，隨機選擇40例肝細胞肝癌患者，在介入治療前及介入后第2天抽取靜脈血。

1.3 血清VEGF測定

采用雙抗夾心ELISA法檢測。人VEGF酶聯免疫吸附試驗檢測試劑盒由深圳萊伯克生物科技有限公司生產，由上海美季生物科技有限公司提供,檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 治療方法

TACE采用Seldinger方法，先行肝總動脈或腹腔動脈造影，明確病灶位置數目、供血動脈，超選插管至肝固有動脈或腫瘤供血動脈，注入化療藥物，常用藥物為表阿霉素 20～40 mg、順鉑20～40 mg、5-Fu 750～1 250 mg、MMC 5～10 mg 。栓塞劑為超液化碘油和明膠海棉細條。先用超液化碘油和表阿霉素或MMC混合，行腫瘤的外周性栓塞，后予明膠海棉細條行腫瘤中央動脈栓塞。

1.5 腫瘤血管造影分類[5]

富血管型：腫瘤供血動脈增粗，瘤內有豐富不規則的腫瘤血管，造影劑滯留于腫瘤血管內，腫瘤染色明顯。

乏血管型：血管推壓移位、腫瘤血管稀疏及腫瘤染色不明顯。

1.6 統計學處理

采用SPSS 13.0統計軟件處理數據,樣本均數采用t檢驗。

2 結果

2.1 腫瘤患者血清VEGF水平與腫瘤血管關系

63例患者行血管造影，發現其中43例腫瘤富血管患者血清VEGF水平高于20例腫瘤乏血管患者(136.80±52.13 pg/ml vs 62.30 ±31.17 pg/ml,P<0.05)。

2.2 肝動脈栓塞治療前后血清VEGF水平的變化

肝動脈栓塞治療前后40例患者血清VEGF濃度分別為(87.41±43.16)pg/ml和(128.42±43.12)pg/ml,兩者之間有統計學意義(P<0.05)。其中有36例患者肝動脈栓塞治療后血清VEGF水平升高，27例第二次血管造影發現新生腫瘤血管的患者血清VEGF濃度顯著升高(179.13±66.27)pg/ml (P<0.01)。

2.3 臨床隨訪結果

以上40例肝癌患者隨訪6個月，結果發現4例血清VEGF水平降低的肝癌患者經數次TACE治療后，碘油沉積良好(超過50%)，2例病灶縮小50%以上(PR)，2例病灶穩定(SD)；36例血清VEGF水平升高的肝癌患者中4例病灶穩定(SD)，32例病灶進展(PD)，碘油沉積欠佳，其中27例出現肝內播散和遠處轉移(表1)。

表1 40例肝癌患者介入療效(例)

*為其中27例出現肝內播散和遠處轉移

3 討論

肝細胞肝癌具有較豐富的動脈血供,對腫瘤的血供特點的研究使得臨床治療有了顯著地進步[6]。將腫瘤的血管栓塞的介入治療，特別是無法手術切除的肝癌的栓塞化療(TACE)，是目前公認較理想的1種治療方法[5]。TACE的近期療效非常顯著，可使腫瘤細胞壞死，腫瘤縮小，患者癥狀得到緩解，部分病例甚至因腫瘤明顯縮小而重新獲得手術切除機會。但是，術后復發和轉移仍很常見。TACE治療后3年復發率為30%～60%[7，8]。影響介入治療肝癌療效的因素包括腫瘤細胞類型、肝癌血供、側枝循環的建立、門脈癌栓的形成、栓塞后殘留的腫瘤細胞、合并肝硬化等[3]。

隨著分子生物學的發展，介入后的腫瘤血管形成對介入的影響成為新的研究方向。研究表明，血管內皮細胞生長因子VEGF是作用最強、特異性最高的血管形成因子之一[9]。VEGF特異性地誘導血管內皮細胞分裂、增殖，向腫瘤細胞遷移，最后形成新生腫瘤血管，為腫瘤細胞的生長和轉移提供病理基礎。本實驗檢測了63例肝癌患者血清VEGF水平與腫瘤血管造影表現的關系，結果發現43例腫瘤富血管患者血清VEGF水平明顯高于20例乏血管患者。提示VEGF的表達水平反映了腫瘤血管形成程度。

36例肝癌患者TACE后血清VEGF水平升高，其中有27例患者第二次血管造影發現新生的腫瘤血管，臨床療效較差，88.9%(32/36)患者病灶進展，75%(27/36)患者出現腫瘤遠處轉移。而4例血清VEGF降低的患者，臨床療效相對較好。介入治療主要是通過化療藥物和阻斷供血動脈引起腫瘤死亡,同時也造成腫瘤局部的缺血和缺氧。大量實驗證實缺氧誘導缺氧因子(HIF-1)表達是上調VEGF表達的最主要的因素[10,11]。腫瘤供血動脈栓塞后，腫瘤組織缺血，腫瘤細胞缺氧，上調VEGF的表達，誘導形成新生腫瘤血管，有利于殘留的腫瘤細胞生長和轉移，從而影響臨床介入療效。TACE后殘留的腫瘤細胞處于增殖狀態，惡性程度更高，分泌更多的VEGF。TACE具有兩面性，它能使得腫瘤細胞死亡和凋亡，同時也能上調腫瘤血管形成因子(VEGF)的表達，出現腫瘤的復發和轉移。

上述結果提示，腫瘤血管形成可能為腫瘤細胞逃避臨床栓塞化療的又一新的機制。肝癌介入前后血清VEGF的表達是有效的轉移復發預測指標。臨床通過血清學檢測VEGF來判斷介入治療的效果和預后。同時，聯合應用腫瘤血管抑制劑和栓塞化療可望能更好得切斷肝癌的血供，殺滅腫瘤細胞，抑制腫瘤細胞復發和轉移。

[1] 林 貴，王建華，顧正明，等.肝動脈化療栓塞術治療中晚期肝癌〔J〕.中華腫瘤雜志，1992，26(2)：311.

[2] Lee JK,Chung YH,Song BC,et al .Recurrences of hepatocellular carcinoma following initial remission by transcatheter arterial chemoembolization〔J〕.J Gastroenterol Hepatol，2002,17(1):52.

[3] 葛寧靈，林芷英.影響介入治療中晚期肝癌療效的病理因素分析〔J〕.國外醫學腫瘤分冊，1996,23(3):173.

[4] Sasaki A，Iwashita Y，Shibata K，et al.Preoperative transcatheter arterial chemoembolization reduces long-term survival rate after hepatic resection for resectable hepatocellular carcinoma 〔J〕.Eur J Surg Oncol,2006,32(7):773.

[5] 湯釗猷，余業勤.原發性肝癌〔M〕.上海：上海科學技術出版社， 1999:230.

[6] Breedis C,Young G.The blood supply of neoplasms in the liver 〔J〕.Am J Pathol,1954,30(3):969.

[7] Matsui O,Kadoya M,Yoshikawa J,et al.Small hepatocellular carcinoma:treatment with subsegmental transcatheter arterial embolization〔J〕.Radiology,1993,188(1):79.

[8] Ohnishi K,Yoshioka H,Kosaka K,et al.Treatment of hypervascular small hepatocellular carcinoma with ultrasound-guided percutaneous acetic acid injection:comparison with segmental transcatheter arterial embolization〔J〕.Am J Gastroenterl,1996,91(12):2574.

[9] 丁 罡，宋明志，于爾辛.血管內皮生長因子與肝臟腫瘤〔J〕.中華肝臟病雜志，2000，8(2)：125.

[10] Minchenko A,Bauer T,Salceda S,et al .Hypoxic stimulation of vascular endothelial growth factor expression in vitro and vivo〔J〕.Lab Invest,1994,71(5)：374.

[11] Tanaka H,Yamamoto M,Hashimoto N,et al.Hypoxia-indudependent overexpression of hypoxia-inducible factor 1 alpha as an early change in mouse hepatocarcinogenesis〔J〕.Cancer Res,2006,66(23):11263.