尿蛋白譜及尿輕鏈水平的檢測在慢性腎臟損傷中的診斷意義

程艷杰，郝赪妍，朱 鴻，王 旭，徐裕海，范存琳，秦桂娥，吳 丹

(1.大連醫(yī)科大學 附屬第一醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116011；2.西崗區(qū) 人民廣場石道街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，遼寧 大連 116011)

臨床上能夠引起腎臟損傷的疾病很多，腎臟損傷的表現(xiàn)之一即蛋白尿。原發(fā)性腎臟疾病及患高血壓、糖尿病及自身免疫性等疾病時腎臟為最常受累的靶器官之一。累及腎臟的首發(fā)癥狀為輕度白蛋白尿，即尿微量白蛋白(mAlb)。mAlb的檢測被推薦為早期腎小球損傷的敏感指標；又有文獻報道，檢測小分子量的蛋白(如α1-MG)可作為評價腎小管損傷的敏感指標[1,2]。

臨床上開展的尿蛋白譜4項指標的檢測能夠?qū)δI臟損傷的部位及程度進行判斷，其中尿IgG、TRF(轉(zhuǎn)鐵蛋白)和mAlb三項為大、中分子量蛋白，為反映腎小球損傷的指標，只有α1-MG是反映腎小管損傷的標志。尿免疫球蛋白輕鏈κ鏈(kapU)及λ鏈(lamU)均為較小分子量的蛋白。與α1-MG一樣,正常情況下也可以自由通過腎小球濾膜并被腎小管重吸收。故尿中輕鏈水平升高，在排除免疫增殖性疾病情況下，表示腎小管受損、重吸收功能下降，故檢測尿輕鏈水平能夠反映腎小管損傷程度。本文選擇原發(fā)和繼發(fā)性腎臟疾病患者作為研究對象，并以有無腎臟損傷及尿蛋白陽性程度分成6組，檢測尿蛋白譜4項指標及kapU、lamU水平，探討幾種蛋白指標的檢測對腎臟損傷的部位及程度的診斷意義。

1 資料與方法

1.1 對 象

選取大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2009年6月～12月住院的慢性腎臟疾病的患者共195例，包括膜性腎病、IgA腎病、高血壓、糖尿病及自身免疫性疾病的患者，根據(jù)有無腎臟損傷及尿液常規(guī)化學分析蛋白檢測結(jié)果分為1～6組。其中，1組為無腎臟損傷組；有腎臟損傷患者根據(jù)尿蛋白陽性程度分為2組(±)、3組(+)、4組(++)、5組(+++)、6組(++++)。男98例，女97例；年齡24～73歲，平均58.45歲，各組男女比例基本一致。同時設(shè)健康對照(0)組30例，男14例，女16例，年齡24～60歲，平均41.82歲，為本院體檢的健康成人。

1.2 儀器與試劑

尿液蛋白定性分組采用Sysmex UF-100i尿沉渣分析儀；尿蛋白譜4項(包括IgG、TRF、mAlb、α1-MG)及尿輕鏈(包括kapU、lamU)的檢測采用西門子BN-Ⅱ特定蛋白分析儀及其配套試劑,原理為免疫散射比濁法。

1.3 方 法

留取空腹中段晨尿6.0 mL ，用Sysmex UF-100i尿沉渣分析儀進行蛋白定性后常規(guī)離心(3000 r/min，5 min)，取上清部分檢測尿蛋白譜、尿輕鏈。

1.4 統(tǒng)計學方法

結(jié)果的描述采用頻數(shù)分布(Frequencies)五點法。應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件，因為各組檢測結(jié)果均為非正態(tài)分布，所以采用非參數(shù)(Mann-Whitney Test)檢驗及秩相關(guān)統(tǒng)計分析。Min 為每組最低檢測結(jié)果<0.40；P25為有25%的檢測結(jié)果<1.11；M為有50%的檢測結(jié)果低于2.59(為每組檢測結(jié)果的平均水平)；P75為有75%的檢測結(jié)果低于4.12；Max為每組最大檢測結(jié)果13.6；Q為P75與P25之差，表示組內(nèi)該指標變異程度。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 慢性腎臟疾病患者和健康對照組尿中各成分比較

各項指標檢測結(jié)果見表1～6。

表1 慢性腎臟疾病患者和健康對照組α1-MG檢測結(jié)果Tab 1 α1-MG in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/dL)

各組與對照組比較，均P<0.05

表2 慢性腎臟疾病患者和健康對照組mAlb檢測結(jié)果Tab 2 mAlb in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/dL)

除“1”組外，其余各組與對照組比較,均P<0.05

表3 慢性腎臟疾病患者和健康對照組IgG檢測結(jié)果Tab 3 IgG in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/dL)

除“1”組外，其余各組與對照組比較,均P<0.05

表4 慢性腎臟疾病患者和健康對照組TRF檢測結(jié)果Tab 4 TRF in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/dL)

除“1”組外，其余各組與對照組比較,均P<0.05

表5 慢性腎臟疾病患者和健康對照組lamU檢測結(jié)果Tab 5 LamU in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/L)

各組與對照組比較，均P<0.05

表6 慢性腎臟疾病患者和健康對照組kapU檢測結(jié)果Tab 6 KapU in Chronic kidney disease and healthy control group (mg/L)

各組與對照組比較，均P<0.05

2.2 各指標與尿蛋白分組秩相關(guān)及各指標檢測結(jié)果間相關(guān)分析

所有檢測指標隨著尿蛋白程度分級增高而呈高度正相關(guān)，尤其mAlb與分級程度相關(guān)性最高(r=0.950)。lamU、kapU與α1-MG有高度相關(guān)性(r=0.885、0.900，P<0.05)；IgG、TRF與mAlb高度相關(guān)(r=0.947、0.959，P<0.05)。kapU與lamU也高度相關(guān)(r=0.976，P<0.05)。見表7。

表7 各指標與尿蛋白分組秩相關(guān)及各指標檢測結(jié)果間相關(guān)分析Tab 7 The rank correlations between classification of urinary protein with the indicators and the correlations between indicators (r)

所有相關(guān)P<0.05，且相關(guān)系數(shù)(r)均>0.7

2．3 各組內(nèi)檢測指標結(jié)果

各組內(nèi)檢測指標結(jié)果分布情況見圖1～6。

3 討 論

腎臟是人體重要的排泄器官，正常情況下健康的個體尿蛋白含量甚微，常規(guī)的尿蛋白定性檢測多為陰性。當各種急、慢性疾病累及腎臟或腎臟本身發(fā)生病變時,易發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能損傷,形成蛋白尿。

mAlb被認為是早期腎小球損傷的標志性蛋白，大量的臨床研究證實,mAlb能夠作為監(jiān)測早期腎臟損害程度的重要觀察指標[3-5]。在生理狀態(tài)下由于腎小球存在分子屏障和電荷屏障，腎小球濾過膜只允許分子量在40 KD以下的小分子蛋白通過，而且絕大部分的小分子蛋白由腎小管重吸收。分子量在40～90KD之間的中分子量蛋白不易濾過，分子量>90KD的大分子蛋白不能濾過。IgG(分子量，150 KD)、mAlb(分子量，69 KD)和TRF(分子量，76 KD)為大、中分子蛋白，在尿中排泄增加表明腎小球濾過膜的電荷選擇性減少，電荷屏障破壞，濾過膜上濾過孔徑增大，為腎小球損傷的標志[6]。

腎臟損傷尿蛋白排泄增加,是腎小球濾過膜通透性增加的結(jié)果,也是腎小管對濾過蛋白重吸收減低的結(jié)果。α1-MG(分子量，26 KD)為小分子蛋白。在正常情況下，可自由通過腎小球濾過膜而濾出，但絕大部分99.9%被腎近曲小管重吸收而分解，故正常尿中α1-MG排泄甚微。當近曲小管受損時，因重吸收減少其排泄明顯增加，α1-MG被認為是反映腎小管損傷敏感且特異的指標[7]。

尿免疫球蛋白輕鏈kapU及l(fā)amU均為較小分子量的蛋白(18～20 KD)，與α1-MG一樣，正常情況下，也可以自由通過腎小球濾膜并被腎小管重吸收。故尿中輕鏈濃度升高，在排除免疫增殖性疾病的情況下，表示腎小管受損、重吸收功能下降。檢測尿輕鏈水平能夠反映腎小管損傷程度[8，9]。

作者檢測了慢性腎臟損傷患者尿蛋白譜4項(IgG、mAlb、TRF 和α1-MG)及尿輕鏈(kapU、lamU)兩項指標。其中，反映腎小球損傷的指標為大中分子量的蛋白IgG、 TRF與mAlb；反映腎小管損傷的指標為較小分子量蛋白α1-MG、尿輕鏈lamU 與kapU。

圖1 lamU 0～6組結(jié)果分布情況Fig 1 Distributions of LamU in 0～6 groups(mg/L)

圖2 KapU 0～6組結(jié)果分布情況Fig 2 Distributions of kapU in 0～6 groups(mg/L)

圖3 mAlb 0～6組結(jié)果分布情況Fig 3 Distributions of mAlb in 0～6 groups(mg/dL)

圖4 α1-MG 0～6組結(jié)果分布情況Fig 4 Distributions of α1-MG in 0～6 groups(mg/dL)

圖5 IgG 0～6組結(jié)果分布情況Fig 5 Distributions of IgG in 0～6 groups(mg/dL)

圖6 TRF 0～6組結(jié)果分布情況Fig 6 Distributions of TRF in 0～6 groups(mg/dL)

本實驗結(jié)果顯示，除無腎臟損傷1組IgG、mAlb、TRF與健康對照(0)組比較差異無顯著性意義(P>0.05)外,各組指標檢測結(jié)果均高于健康對照組，差異均有顯著性意義(P均<0.05)。表明上述各種指標均是構(gòu)成尿蛋白成分之一。而且，隨著尿蛋白程度的加重(± ～ ++++)，上述各種指標均有不同程度的升高；各檢測指標與分組秩和檢驗呈高度相關(guān)(所有相關(guān)系數(shù)r>0.7，P<0.05)。其中，反映腎小球損傷的指標mAlb、IgG與TRF與尿蛋白程度分級相關(guān)系數(shù)r分別為0.950、0.916、0.909；而反映腎小管損傷的指標α1-MG、lamU 與kapU與尿蛋白程度分級相關(guān)系數(shù)r分別為0.782、0.903、0.869，說明隨著尿蛋白程度加重，上述各指標水平均相應(yīng)地升高；同時也表明隨著腎小球損傷程度加重，大量分子量不同的蛋白透過腎小球基底膜流失于尿中，腎小管對小分子蛋白重吸收能力也在下降，損傷程度也在加重。在以上6種檢測指標中，mAlb與尿常規(guī)蛋白定性程度相關(guān)性最高，可達r=0.950(P<0.05)，而且其升高水平位居同組各指標之首，這可能與Alb是正常人體血液中主要蛋白質(zhì)有關(guān)。

腎臟受損傷時，kapU及l(fā)amU二者均會升高(相關(guān)分析結(jié)果顯示，二者r=0.976，P<0.05，具有高度相關(guān)性)，而且kapU與lamU的比值(κ/λ)為2.08±0.68(計算所得，未列入表中)，與正常人血液中κ/λ范圍基本相符[10]。

此外，lamU、 kapU與α1-MG有高度相關(guān)性(r=0.885、0.900，二者P<0.05)，因為三者均為小分子量蛋白，正常情況下均可通過腎小球基底膜，在腎小管重吸收，當腎臟損傷累積近曲小管時，因重吸收減少，其在尿中排泄明顯增加；IgG、TRF與mAlb均有高度相關(guān)性(r=0.947、0.959，二者P<0.05)，因為三者均為高、中分子量蛋白，三者在尿中升高的程度表明了腎小球受損程度。

由圖1～6反映的是同一指標在不同分組中含量差異變化程度，表明的是隨著尿蛋白程度增高，各種指標的含量雖然都有增高的趨勢，但是同一組內(nèi)不同患者同種指標的含量有較大差異，如6組中α1-MG含量(最低-最高)為5.94～71.6 mg/dl；kapU為47～1200(mg/L)；mAlb為458～>864 mg/dL；IgG為22.2～786 mg/dL，等。這說明雖然尿蛋白同為++++，但是不同患者尿中同種蛋白含量差異是很大的，要根據(jù)尿中特種蛋白含量的高低來判斷不同患者腎臟不同部位的損傷程度，并根據(jù)具體情況制定相應(yīng)的診療措施,這正是尿蛋白譜及尿輕鏈檢測的意義所在。

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