慢性非細菌性前列腺炎大鼠逼尿肌功能改變的實驗研究

楊 玻，于 洋，孫衛兵，齊清會

(1.大連醫科大學 附屬第二醫院 泌尿外科，遼寧 大連 116027；2.大連醫科大學 附屬第一醫院 普外科,遼寧 大連 116011)

慢性前列腺炎(chronic prostatitis,CP)是一種泌尿外科常見的復雜綜合癥，它可以引起尿頻、尿急、尿痛、排尿困難等排尿功能異常。其致病因素較為復雜，發病機制不明確，雖有一定程度的認識，但均無突破性進展；尤其對排尿異常的產生機制意見不一，且單一機制無法對各類膀胱尿動力學改變和排尿異常做出滿意解釋。臨床上前列腺病變與膀胱功能異常存在密切聯系，CP患者的尿動力學檢查表現為膀胱不穩定收縮和后尿道阻力增高。目前認為功能性后尿道梗阻是CP排尿功能障礙的主要原因，但詳細的機理還不清楚。部分前列腺炎患者有膀胱功能異常的尿動力學改變，但并無功能性后尿道梗阻。并且慢性前列腺炎的臨床癥狀與組織學所見并不總是一致。由于前列腺液的檢查以及組織切片觀察到的前列腺病變情況和臨床癥狀的嚴重程度往往關系不大，越來越多的學者開始相信所謂CP的真正原發病灶并不在前列腺。膀胱功能改變很可能是CP排尿異常的原因之一。

逼尿肌不穩定(detrusor instability，DI) 是臨床最常見的膀胱尿道功能障礙之一，它與前列腺疾病存在密切的聯系。本實驗通過建立大鼠自體免疫性前列腺炎模型，探討慢性非細菌性前列腺炎與逼尿肌不穩定之間的關系，為進行DI 的各項研究提供實驗基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

選取3～4月齡雄性，清潔級SD大鼠40只，SCXK(遼)2008-0002，體重240～300 g，購于大連醫科大學醫學動物中心。

1.2 試劑和藥品

百白破疫苗：購于武漢生物制品研究所；Triton X-100(Amresco，USA)；福氏完全佐劑(FCA)：購自Sigma公司；BCA蛋白濃度測定試劑盒：購自碧云天生物公司。

1.3 方 法

1.3.1 慢性非細菌性前列腺炎動物模型的建立:制作大鼠前列腺蛋白提純液: 取240～300 g雄性SD大鼠10只，脫頸椎處死，在無菌條件下剝取前列腺組織，用冷生理鹽水洗凈，加入含0.5% Triton X-100 的生理鹽水溶液，在冰水浴上用玻璃勻漿器制成勻漿，10000 r/min離心30 min，取上清液，用Thermo354酶標儀(美國)，以牛血清白蛋白溶液為標準蛋白溶液，進行蛋白含量測定，最后用0.1 moL/L pH 7.2的PBS緩沖液稀釋為15 mg/mL備用。

制作動物模型：按文獻[1]造模方法，取SD大鼠30只，隨機分為正常對照組(對照組)10只和模型組20只。模型組腹腔注射百白破疫苗各0.5 mL，并多點皮內注射大鼠前列腺蛋白提純液和FCA乳劑(比例1∶1)的混懸液1.0 mL，劑量為15 mg/mL；對照組分別腹腔注射、多點皮下注射PBS緩沖液0.5 mL、1.0 mL。以上各組分別在第0、30天各注射1次。45 d后模型成功。

1.3.2 尿流動力學檢測:檢測方法：①45 d后取造模大鼠，給予利尿劑呋噻米1 mg腹腔注射；②5 min后10%水合氯醛按0.3 mL /100g體重腹腔注射麻醉，仰臥固定；③待恥骨上觸及充盈的膀胱后，將2個兒科用密閉式靜脈留置針恥骨上0.5～1.0 cm處經皮穿刺入膀胱，其中1個與NPC-100壓力傳感器(深圳鑫賽創電子科技有限公司)相連，另一個與SK-500I型醫用微量注射泵(深圳市深科醫療器械技術開發有限公司)相連；④生理鹽水經微量灌注泵向膀胱灌注，速度為0.25 mL /min；⑤試管在尿道外口處收集尿液；⑥BL-420F生物機能實驗系統(成都泰盟科技有限公司)觀察各項指標并采集數據。

描記模型組及對照組膀胱內壓力圖：每只動物至少測量10個排尿周期。根據國際尿控學會(ICS)定義判斷DI的標準：低壓充盈期，無抑制性收縮壓達到三分之一排尿壓時，即為DI。膀胱排尿壓力取10個排尿周期的均值，膀胱容量=(排尿量+殘余尿量)，殘余尿量則在最后一次排尿結束后，通過膀胱穿刺針直接測量。

1.3.3 前列腺組織病理檢測:各組大鼠頸椎脫臼法處死大鼠。取前列腺，10%的中性甲醛溶液中固定，常規石蠟包埋切片，HE染色，在顯微鏡下觀察，并對各組大鼠前列腺組織的病理表現進行分級，分析模型組不同病理級別間尿動力改變的差異。

病理分級標準參照徐叔云《藥理實驗方法學》制定：0級：前列腺間質無炎性細胞浸潤，腺腔內為均勻的粉紅色分泌物；Ⅰ級：前列腺間質中有少量炎性細胞浸潤，腺腔內分泌物減少；Ⅱ級：前列腺間質中大量炎性細胞浸潤，腺腔內分泌物明顯減少和消失；Ⅲ級：前列腺間質中大量炎細胞浸潤，管壁破壞。

1.4 統計學方法

2 結 果

實驗動物無死亡。兩組大鼠體質量比較差異無顯著性意義(P>0.05)。模型組中70%(14/20)大鼠出現不同程度DI。對照組無DI 發生。模型組大鼠膀胱最大容量和最大逼尿肌壓力降低，殘余尿量增加，與對照組比較差異有顯著性意義(P<0.05)。對照組大鼠前列腺組織無慢性前列腺炎表現。模型組大鼠前列腺病理檢查呈現不同程度慢性前列腺炎改變，其中病理改變Ⅰ級4例、Ⅱ級9例、Ⅲ級7例。模型組前列腺各病理分級中逼尿肌不穩定比率分別為75.0%(3/4)、66.7%(6/9)和71.4%(5/7)。見表1、2。

表1正常及模型大鼠膀胱測壓結果比較
Tab 1 Comparison of cystometric parameters in control group and model group

組別n最大容量 (mL)最大逼尿肌壓(cmH2O)殘余尿量 (mL)對照組模型組10200．57±0．060．39±0．051)27．3±1．8722．8±2．032)0．11±0．040．33±0．061)

與對照組比較，1)P<0.01;2)P<0.05

表2 模型組大鼠不同前列腺組織病理分級中DI發生率比較Tab 2 DI ratio among different classification of prostatic histology in model group

3 討 論

CP是一種泌尿外科常見的復雜綜合癥。有學者對CP患者進行尿動力檢查發現慢性前列腺炎病人存在下尿路功能性梗阻，主要表現有不穩定膀胱、括約肌痙攣、逼尿肌-外括約肌協同失調，其中不穩定膀胱占40.6%～59.5%[2-4]。不穩定膀胱又稱逼尿肌不穩定(detrusor instability，DI)，是指膀胱在儲尿期出現的不能為意識所抑制的，逼尿肌期相性收縮，可以是自發的，也可以是在誘發的情況下(咳嗽，冷水刺激，改變體位)產生。收縮波的幅度以往認為大于或等于15 cmH2O，目前認為只要收縮波表現出明顯的上升支和下降支，幅度不一定超過15 cmH2O，即可診斷。CP排尿功能障礙的產生機制相關的研究報道較少，而逼尿肌結構和功能是否存在改變以及這些改變與前列腺炎病理變化之間的關系尚待進一步研究。

研究顯示，采用自身免疫反應所誘導的CAP動物模型，其病理改變與臨床的病理改變最為接近，發病機理也與人的發病較為符合，是目前較為理想的一種造模方法[1,5]。而且這類造模方法僅引起前列腺組織局部的病理改變，而不會引起其他臟器的自身免疫反應，具有較好的特異性[6]。本研究中采用同種系大鼠前列腺蛋白提純液，輔以雙重免疫佐劑，造成實驗性CAP大鼠模型。病理觀察顯示，模型組大鼠前列腺組織表現為不同程度慢性炎癥的病理變化。提示造模成功，為進一步研究提供了條件。

近年來的一些實驗研究已證明，前列腺神經與膀胱神經和腰骶段體神經之間確實存在反射通路，而且前列腺炎癥刺激能夠通過這些神經通路引起牽涉痛、膀胱不穩定收縮、盆底肌痙攣等現象[7-9]。

慢性前列腺炎時前列腺局部受各種炎性或非炎性刺激而出現細胞和間質水腫。前列腺尿道縮窄，壓力增高，導致尿液返流入前列腺導管內及管周組織，造成“化學性前列腺炎”，形成持續的刺激，出現排尿功能紊亂或排尿異常癥狀反復發作；前列腺局部炎性腫脹、疼痛及會陰肌肉疲勞而引起的盆底肌肉習慣性收縮及痙攣通過某種機制會導致后盆底緊張性肌痛，從而出現排尿功能障礙[10]。

功能性后尿道梗阻是目前最常用來解釋CP排尿功能障礙的機制。梗阻可使膀胱內壓升高，平滑肌增生肥大，纖維組織浸潤，平滑肌增生、肥大后相對缺血和維持正常神經分布所需的營養系統紊亂，導致支配膀胱和尿道平滑肌的相關神經密度降低，從而處于失神經狀態，誘發逼尿肌無抑制收縮，形成不穩定膀胱。

前列腺無菌性炎癥除導致前列腺炎性病理變化外，尚可誘致膀胱頸及后尿道部腎上腺素能α受體興奮，促使前列腺、膀胱頸及后尿道平滑肌收縮加強，妨礙膀胱頸部開放，形成功能性膀胱頸梗阻。炎癥刺激及膀胱頸部梗阻又可導致膀胱逼尿肌α受體興奮性加強，逼尿肌收縮加強，呈不穩定狀態，臨床表現為排尿刺激癥狀[11]?？梢?，慢性前列腺炎逼尿肌功能改變是前列腺炎癥直接或間接作用的結果。

實驗研究表明，前列腺受到非細菌炎性刺激時會引起膀胱功能改變[7]。本研究中模型組大鼠膀胱容量和最大逼尿肌壓力降低，殘余尿量增多，70%出現不同程度充盈期逼尿肌不穩定性收縮，說明前列腺炎性反應時可以引起膀胱充盈受限，容量減小，排尿性收縮抑制和充盈時逼尿肌不穩定收縮。膀胱的這些功能改變必然導致尿頻、尿急、排尿困難和尿不盡等排尿異常。雖然出現逼尿肌不穩定的大鼠，其前列腺組織病理分級主要集中在Ⅱ級和Ⅲ級(共11例)，但不同前列腺組織病理分級中逼尿肌不穩定發生幾率無明顯差別(66.7%～75.0%)。前列腺的組織學改變程度與繼發的膀胱功能改變之間缺乏正相關關系，提示除了炎癥反應之外一定有其他原因造成逼尿肌不穩定收縮。

本研究再次證實慢性前列腺炎可以引起逼尿肌功能改變，初步揭示了逼尿肌不穩定與前列腺組織學改變的關系，這種功能性改變是否以逼尿肌肌源性改變或其它神經反射機制為基礎還有待進一步研究。

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