HER-2/neu蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義

郭建波

(大連市友誼醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科，遼寧 大連 116001)

TNM分期是胃癌最重要的預(yù)后因素，然而，處于同一臨床分期的不同病人的預(yù)后并不一致。因此，尋找TNM分期因子以外的具有獨(dú)立預(yù)后意義的分子生物學(xué)指標(biāo)是當(dāng)前胃癌研究的一個(gè)重要任務(wù)。Park 等[1]研究證實(shí)，HER-2是胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。但也有研究顯示，HER-2與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)間不具有相關(guān)性[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)67例胃癌組織中HER-2蛋白的表達(dá)情況，探討其與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取大連市友誼醫(yī)院2004年1月～2010年1月行胃癌手術(shù)切除標(biāo)本，并經(jīng)病理確診為胃腺癌的179例患者進(jìn)行隨訪，以有隨訪結(jié)果并標(biāo)本資料完整的67例為研究對(duì)象。男47例，女20例，年齡34～86歲，平均56.8歲。按Lauren分類法分為腸型35例，彌漫型27例，混合型5例。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者39例。臨床分期采用1997年國際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期10例，Ⅱ期32例，Ⅲ期17例，Ⅳ期8例。對(duì)照選用20例癌旁黏膜。標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規(guī)4 μm厚切片。所有患者術(shù)前均未經(jīng)放療和化療。

1.2 免疫組織化學(xué)方法

免疫組織化學(xué)技術(shù)采用EliVisionTM二步法。EliVisionTM試劑盒和兔抗人單克隆抗體c-erbB-2 (SP3，HER-2/neu)均購自福州邁新生物技術(shù)公司，c-erbB-2為即用型。以已知陽性切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作空白對(duì)照。

1.3 陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

至今尚無統(tǒng)一的胃癌HER-2免疫組化陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。本文參照大多數(shù)學(xué)者認(rèn)可的Hofmann判定標(biāo)準(zhǔn)[3]。IHC陰性(0)：整張切片不著色，或<10%的細(xì)胞膜著色；IHC陰性(+)：>10%的細(xì)胞膜著色淺，或僅有部分膜著色；IHC可疑陽性(++)：>10%的細(xì)胞膜輕-中度著色；IHC陽性(+++)：>10%的細(xì)胞膜中-高度著色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用χ2檢驗(yàn)和Fisher′s精確概率法，生存分析采用Life-tables法和Logrank檢驗(yàn)。隨訪68.2月，對(duì)隨訪結(jié)果采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HER-2/neu在胃癌中的表達(dá)

HER-2/neu主要表達(dá)于細(xì)胞膜，部分細(xì)胞漿內(nèi)也有弱的著色，部分胃癌組織(高分化)HER-2/neu分布有極向，腺腔面細(xì)胞膜不著色，因此著色呈U型(圖1)。67例胃癌組織中，HER-2陽性表達(dá)率為22.4%(15/67)。癌旁黏膜組織(20例)均為陰性。

2.2 HER-2/neu表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)間的關(guān)系

HER-2/neu在腸型胃癌中陽性率為34.3%，彌漫型胃癌中陽性表達(dá)率為7.4%，混合型胃癌中陽性表達(dá)率為27.8%，腸型胃癌與彌漫型胃癌二者差異有顯著性意義(χ2= 6.299,P=0.012)；腸型胃癌與混合型胃癌二者差異無顯著性意義(χ2=0.407,P=0.469)；彌漫型胃癌與混合型胃癌二者差異無顯著性意義(χ2=0.787,P=0.410)。HER-2/neu陽性表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組高于陰性組，臨床分期 Ⅰ和 Ⅱ期組低于Ⅲ和 Ⅳ期組，均具有顯著性意義(P<0.05)。HER-2/neu表達(dá)與患者性別、年齡、分化程度均不相關(guān)(P>0.05)，見表1。

圖1 HER-2/neu在胃腺癌中的表達(dá)(EliVision法×100)主要為膜著色，呈U型
Fig 1 Positive HER-2/neu expression in the gastric adenocarcinoma (original magnification: ×100，Mainly for the cell membrane,u-shaped staining)

2.3 HER-2表達(dá)與生存時(shí)間的關(guān)系

HER-2/neu陽性表達(dá)患者的中位生存期為30.0個(gè)月，顯著低于陰性患者50.0個(gè)月的中位生存期(P<0.05，見圖2)。隨訪截止時(shí)間2010年6月，隨訪率100%，全組患者的5年生存率為32.8%，HER-2/neu陽性者為13.3%，HER-2/neu陰性者為38.5%。

圖2 生存曲線圖Fig 2 Relationship between the expression of HER-2/neu and survival time of patients

表1 HER-2/neu蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)間的關(guān)系Tab 1 Relationship between the expression of HER-2/neu and clinicopathologic features of gastric cancer

2.4 胃癌多因素生存分析

對(duì)表1的各項(xiàng)臨床病理參數(shù)進(jìn)行COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型多因素分析，提示臨床分期和HER-2/neu影響預(yù)后，均與生存期呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

癌基因HER-2/neu又稱c-erB-2基因，定位于人染色體17q21，與表皮生長因子(EGFR)、HER-3、HER-4同屬于Ⅰ型受體酪氨酸激酶(RTK)超家族。HER-2/neu在正常情況下處于非激活狀態(tài)，與其特異性配體結(jié)合后可調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化和增殖。當(dāng)HER-2/neu受到某些致癌因素的作用后，其結(jié)構(gòu)或表達(dá)失控而被激活，轉(zhuǎn)而具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，可促使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。HER-2/neu在胃癌中過表達(dá)最早報(bào)道于1986年，之后國內(nèi)外有大量文獻(xiàn)關(guān)于胃癌HER-2/neu高表達(dá)的研究。文獻(xiàn)報(bào)道胃癌中HER-2/neu蛋白的表達(dá)率為8.2%～45%[4-6]。

HER-2/neu在本實(shí)驗(yàn)組67例胃癌中的表達(dá)率為22.4%，在文獻(xiàn)報(bào)道范圍內(nèi)。在胃癌旁正常組織中均未見HER-2/neu的表達(dá)，提示HER-2/neu表達(dá)是胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生惡變的標(biāo)志，可作為胃癌診斷和預(yù)后的參考標(biāo)志。本組研究結(jié)果與Oya[7]等研究結(jié)果相一致。

本研究結(jié)果顯示HER-2/neu蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤分化程度無關(guān)(P>0.05),而與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Lauren分類有關(guān)(P<0.05)。臨床分期 Ⅲ期和 Ⅳ期胃癌的HER-2/neu陽性表達(dá)率高于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌(P=0.011)；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中HER-2/neu陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，表明HER-2/neu基因在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中被激活并參與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制，加速了疾病的進(jìn)展。國內(nèi)外研究結(jié)果亦有不同意見。有研究表明，HER-2/neu蛋白高表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)，但與患者的預(yù)后有關(guān)[8-10]。

Lordick等[11]對(duì)1527例胃癌進(jìn)行了研究，他們發(fā)現(xiàn)HER-2陽性表達(dá)率在腸型胃癌為34%，彌漫型胃癌和混合型胃癌為6%和20%，腸型明顯高于彌漫型和混合型。Tanner[12]等的研究也有相同結(jié)果。本組研究HER-2/neu在腸型胃癌中的表達(dá)率明顯高于浸潤性胃癌(P<0.05)，提示HER-2/neu高表達(dá)可能與腸型胃癌特定細(xì)胞亞群的生長發(fā)育相關(guān)。

有研究顯示，HER-2過表達(dá)往往提示腫瘤惡性度高，進(jìn)展迅速，化療緩解期短，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)放化療和內(nèi)分泌治療易產(chǎn)生耐藥，從而使患者的無病生存期和總生存期縮短[13]。作者通過對(duì)本實(shí)驗(yàn)組67例胃癌患者隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HER-2/neu陽性患者的中位生存期為30.0個(gè)月，明顯低于陰性患者50.0個(gè)月的中位生存期。全組患者的5年生存率為32.8%，HER-2/neu陽性者為13.3%，HER-2/neu陰性者為38.5%。本研究結(jié)果與多數(shù)研究者的報(bào)道相一致[14]。

本研究進(jìn)一步利用多因素COX風(fēng)險(xiǎn)模型分析，提示臨床分期和HER-2/neu為胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素。

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