兩種粘結系統處理牙本質后的磨片觀察

李秋紅,王 如

(大連醫科大學 附屬第一醫院 口腔科，遼寧 大連 116011)

牙本質粘結是牙體粘結非常重要的環節。牙本質結構中，牙本質小管和管間牙本質這種不均質結構使得牙本質粘結較牙釉質復雜得多。牙本質是牙體硬組織，對其粘結處理后，觀察其粘結面，若在不脫鈣的情況下進行切片觀察是很困難的。作者對牙本質粘結處理后在不脫鈣的情況下，在光鏡下觀察經自酸蝕及全酸蝕兩種粘結系統處理牙本質獲得的混合層情況，為臨床提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選擇2008年1月～2008年3月在大連醫科大學附屬第一醫院口腔頜面外科因牙周病須拔除患牙6例患者的后磨牙6顆，頜面具有典型硬化性牙本質，視覺分級三級以上(根據North Carolina dentine sclerotic scale[1])。因正畸減數須拔除前磨牙3例患者的6顆前磨牙，根尖孔已形成。使用超聲潔治器去除所有樣本牙的菌斑和牙石；離體牙在4%氯胺溶液中4 ℃存放，拔除后1個月內使用。將前磨牙頜面釉質用金剛砂車針磨除，暴露牙本質，高速金剛砂車針平行于牙長軸將牙分成兩部分，即A組和B組；后磨牙頜面均為硬化性牙本質，直接用高速金剛砂車針平行于牙長軸將牙分成兩部分，即C組和D組。每一部分均有牙本質小管平行于牙長軸和垂直于牙長軸的粘結面，且供粘結的牙本質均用細砂金剛砂車針打磨。A組和C組用于全酸蝕粘結觀察，B組和D組用于自酸蝕粘結觀察。

1.2 方 法

1.2.1 全酸蝕粘結觀察樣本：粘結面35 %磷酸(3 M ESPE，美國)酸蝕粘結面20 s后，蒸餾水沖洗20 s，干海綿球吸干多余水分，Single Bond粘結劑(3M公司，美國)均勻涂布在粘結面上，停留10 s后，用氣槍將殘留水分吹干，再次涂布粘結劑，將過多粘結劑用小毛刷吸出，光固化燈固化20 s，復合樹脂Z350(3 M ESPE，美國)覆蓋粘結面，光固化燈固化樹脂。自酸蝕粘結觀察樣本：粘結面SE BOND自酸蝕粘結系統(可樂麗菲露，日本)涂布粘結面20 s后，氣槍輕輕吹干再涂布Bond粘結劑10 s，光固化機固化20 s，樹脂覆蓋粘結面，光固化燈固化樹脂。

1.2.2 非脫鈣牙磨片制作方法：樣本于70 %酒精中固定72 h后，梯度脫水(80%、90%、95%、100%酒精)，各72 h(每24 h換1次酒精)。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合配制浸透液1，將樣本放入其中，室溫下浸透2周。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合，每100 mL混合液加入過氧化苯甲酰2.5 g，磁力攪拌器充分攪拌4 h，配置浸透液2。將樣本放入其中，室溫下浸透1周。甲基丙烯酸甲酯和鄰苯二甲酸二丁酯按4∶1(體積比)混合，每100 mL混合液加入過氧化苯甲酰6.25克，磁力攪拌器充分攪拌4 h，配置包埋液，將樣本放入其中，室溫下包埋1周。使用Leica 1600型鋸割切片機(EXAKT公司，德國)將樣本切薄，并磨薄切片至20～25 μm，磨片制作由解放軍總醫院口腔研究所完成。10 %甲苯胺藍溶液浸泡5 min，水洗，干燥，封片。光鏡下觀察。

2 結 果

C組硬化性牙本質經全酸蝕粘結處理后，可見粘結混合層與牙本質粘結緊密，大部分混合層厚度均勻，部分區域不均勻，有些較薄，有些較厚，部分區域可見混合層牙本質面呈鋸齒形似樹脂突(圖1a，黑色箭頭示)。D組硬化性牙本質經SE BOND自酸蝕粘結處理，可見粘結混合層清晰明顯，與牙本質粘結緊密，有些區域可見混合層牙本質面呈鋸齒形似樹脂突(圖1b，黑色箭頭示)。

圖1 硬化性牙本質Fig 1 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蝕粘結(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蝕粘結(SE BOND self-etching bonding)黑色箭頭示混合層牙本質側凸凹不平似樹脂突(black arrow shows resin tags look like waved line in hybrid layer)

A組正常牙本質經全酸蝕粘結處理，可見混合層與牙本質粘結緊密，但不及與樹脂粘結緊密，混合層厚度大部分區域均勻，有些區域較薄，有些區域較厚(圖2a)。B組正常牙本質經SE BOND自酸蝕粘結處理，可見粘結混合層清晰明顯，與牙本質粘結緊密(圖2b)。

圖2 硬化性牙本質Fig 2 Sclerotic dentin(×400)a:3M全酸蝕粘結(3M total-etching bonding); b:SE BOND自酸蝕粘結(SE BOND self-etching bonding)

牙齒磨片光鏡下觀察混合層：全酸蝕系統正常牙本質獲得的混合層與硬化性牙本質獲得的混合層無明顯差別。SE BOND自酸蝕粘結系統正常牙本質獲得的混合層與硬化性牙本質獲得的混合層無明顯差別。

3 討 論

3.1 研究方法

本實驗是對牙本質粘結面的形態學觀察。對于牙本質粘結的觀察，應用掃描電鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡是常用的研究方法[2-5]。本研究選擇硬組織磨片觀察牙本質粘結是考慮牙體硬組織在不脫鈣的情況下制作切片觀察更符合硬組織的實際原貌。且為切片能觀察硬組織內部情況。應用掃描電鏡觀察牙本質粘結混合層情況，樣本也不需要脫鈣，但只能觀察樣本的表面，若想觀察硬組織內部，需將硬組織處理后劈裂觀察粘結界面。掃描電鏡觀察樣本的倍數可以達到2000倍以上，操作簡便且經濟。牙體硬組織切片觀察最終厚度為20～25 μm，因切片過厚只能在光鏡下觀察，最大放大倍數為400，由于切片厚度限制，在更高的放大倍數下，圖像就會模糊不清。從此點考慮掃描電鏡具有優勢。硬組織切片觀察在光鏡下獲得的圖像與掃描電鏡相比質感不同；牙齒磨片可長期保存重復觀察，而掃描電鏡的樣本必須干燥保存，而且對于形態不規則的樣本，觀察重復性差、重復觀察成本高。所以兩種方法各有優勢。本實驗應用硬組織磨片觀察牙本質粘結情況獲得的結果和結論與作者應用掃描電鏡觀察[6]的情況一致，這是一種牙本質觀察方法的探索和嘗試。

3.2 正常牙本質與硬化性牙本質

無論使用何種粘結系統，硬化性牙本質和正常牙本質均可獲得厚度均勻的混合層，但所有樣本混合層都存在某些較薄或較厚的區域，這與粘結面的平滑程度有關，較厚的地方是由于齲壞或牙本質粘結面自然形成的凹陷造成粘結劑的堆積。臨床上粘結面若想獲得均勻一致的混合層，需用風速微弱的氣槍將粘結劑吹薄，或用小毛刷將粘結劑涂勻，特別在粘結劑易于堆積的轉角或凹陷處去除多余的粘結劑，以免粘結劑過多影響粘結強度。

牙本質的粘結面經過酸蝕，水沖洗，將玷污層完全去除，使管間牙本質脫礦，膠原纖維微孔支架暴露，同時牙本質小管開放，底膠潤濕并滲入膠原纖維間的微孔及牙本質小管，以有利于粘結劑的隨后滲入，底膠和粘結劑在原位固化后，即與牙本質膠原纖維形成相互扣鎖的混合層，內含有許多樹脂突[7]。硬化性牙本質是指牙本質小管大部分堵塞，牙本質小管中沉積了鈣化鹽結晶體，其折光率與管間牙本質相似，表面呈半透明狀。多數研究者認為硬化牙本質的粘接較正常牙本質困難得多。硬化性牙本質管周牙本質，管間牙本質和牙本質小管內礦化結晶脫礦較正常牙本質困難，牙本質粘結形成的混合層

更薄，樹脂突短，很少甚至沒有[4]。牙本質脫礦與酸蝕劑的種類濃度和作用時間均有關，譚建國[2]實驗證明硬化性牙本質的大部分牙本質小管內可見柱狀礦化物結晶體。15%磷酸或35%磷酸處理30秒和自酸蝕處理劑Adper Prompt-Pop(3M 公司ESPE，美國)處理15 s均不能去除牙本質小管內硬化結晶體。硬化牙本質表面結構與正常牙本質存在差異，其牙本質小管內堵塞的礦化結晶體可能對粘結產生影響。自酸蝕處理劑Adper Prompt-Pop的脫礦能力低于15%和35%磷酸。本實驗在鏡下觀察無論硬化性牙本質還是正常牙本質獲得的混合層樹脂突并不是每個視野均可見得，在有些區域可見混合層與牙本質粘結面呈鋸齒形似樹脂突，因放大倍數有限，無法進一步放大證實。硬化性牙本質與正常牙本質用全酸蝕或自酸蝕兩種方法處理獲得的混合層厚度，形態質量均在本實驗中無差別。硬化性牙本質同樣可獲得良好的粘結。從粘結獲得的形態上看兩者無差別，粘結后獲得的粘結力兩者有何差別需進一步實驗探索。

[1] Kusunoki M,Itoh K,Hisamitsu H,et al.The efficacy of dentine adhesive system sclerotic dentine[J].J Dent,2002,30:91-97.

[2] 譚建國，周麗晶，馮海蘭．三種酸蝕方法處理硬化性牙本質表面的超微形態研究[J]．口腔醫學，2005，25(3):140-145.

[3] 周麗晶，譚建國，胡白河．牙齒非齲性硬化牙本質經自酸蝕粘結劑處理后超微形態[J]．實用口腔醫學雜志，2005,21(6):823-825.

[4] 李 瀟，施長溪，趙信義．牙本質表面狀態對粘結界面影響的激光掃描共聚焦顯微鏡研究[J]．實用口腔醫學雜志，2005，21(1)：71-74.

[5] Kwong SM,Tay FR,Yip HK,et al.An ultrastructural study of the application of dentine adhesive to acid-conditioned sclerotic dentine[J].Dent,2000,28:515-528.

[6] 李秋紅，萬君.兩種粘結系統對硬化性牙本質處理后超微形態觀察[J]．中國實用口腔科雜志，2008，1(5):601-602.

[7] 樊明文.牙體牙髓病學[M]．北京：人民衛生出版社，2000,98.