文山百合鱗片芽誘導的影響因子研究

李黛，曾燕玲，張仁波

（遵義師范學院生物系，貴州遵義563002）

百合屬植物除具有極高的觀賞價值外，還具食用和藥用價值，是我國衛生部審批通過的首批藥食兩用植物,不僅臨床上有著廣泛的應用，而且作為加工保健產品的原料也極具開發前景[1]。遵義地區務川縣生產的百合粉早在明代初期就成為皇室御膳供品，在1938年就獲貴州省輕工保健食品獎。1978年改革開放以來，務川縣境內宣起了野生百合粉、百合干生產的高潮，其野生百合粉經華南熱帶農業大學測定，富含鋅、磷、硒等11種微量元素和18種人體必需的氨基酸，產品供不應求。由于原料的需求量大，加之務川縣境內野生百合的資源利用與開發的情況基本上是處于簡單地收集百合鱗莖進行粗放型的初加工階段，為一種“掠奪式”的采集[2]，因此，對務川縣野生百合資源進行開發利用研究，將對務川以至整個貴州野生百合的可持續開發利用和經濟的發展產生一定的影響。

文山百合（Lilium wenshanense L·J·Penget F.X.Li)作為培育百合新品種的種質材料[3]，為多年生宿根草本植物，在貴州省務川縣有較多分布，其鱗莖白色，分節，淀粉含量較高，在務川縣被用作野生百合粉生產的原材料之一。目前百合的種球繁育技術雖日漸成熟，但因其速度慢，繁殖系數低等缺點還是制約了百合鱗莖和切花的大規模生產。百合組培苗的培育具有繁殖系數高、周期短等優點，剛好彌補了種球繁育的不足。目前對百合組培快繁研究較多[4-9]，但對文山百合的組織培養研究僅見屈云慧等人在《植物生理學通訊》上有一篇報道[10]。本文介紹了筆者對文山百合鱗片誘導不定芽的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

本實驗所用的文山百合采自貴州務川縣野生林下，種植于遵義師范學院植物園內。將鱗莖用自來水沖洗干凈，然后從外到內等量分成外、中、內三層，再分別將外、中、內三層鱗片的上節和下節分開，并將鱗片下節切成下部和上部兩部分后分放于不同的燒杯中，在自來水下流水沖洗60min左右，于超凈工作臺上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，無菌水沖洗5次以上后備用。

1.2 方法

采用正交試驗篩選誘導鱗片形成不定芽的最佳培養基以及用鱗片誘導不定芽的最佳著生位置和部位。所用基本培養基均為MS培養基，正交實驗采用L9(3)4正交表，6－BA和NAA濃度、鱗片著生位置、鱗片部位四因素三水平的試驗設計見表1。

將上述供試材料按正交試驗方案接種到9種芽誘導培養基中，每個處理共接4瓶，每瓶接3塊，每個處理重復3次，在溫度為24－26℃，光照12h/d，光照強度1500－2000lx的培養室中培養60天后進行統計。

表1 L9(3)4正交試驗表頭設計表

2 結果與分析

2.16 －BA、NAA濃度對鱗片誘導芽的影響

將文山百合鱗片接種到9組培養基后約一周，白色鱗片轉成了淺紫紅色，10天后鱗片基部出現乳白色小突起，30天后，鱗片上的乳白色突起轉成了綠色不定芽。50天左右長成1－2cm高的苗。文山百合鱗片誘導芽正交試驗L9(3)4結果見表2。

對實驗結果進行方差分析，結果見表3。

表2、表3顯示：6－BA濃度的差異對文山百合芽誘導的影響為：1.0mg/L＞0.5mg/L＞0.1mg/L，其中以1.0mg/L為最好，差異達極顯著水平，NAA濃度的影響為：0.5mg/L＝1.0mg/L＞0.1mg/L，但差異不顯著。從苗的生長情況看，1號、4號、6號、8號培養瓶中苗的生長較好，其中6號和8號生長最佳，但有玻璃化現象，特別是6號的玻璃化現象較嚴重，1號和4號雖然較前兩組稍差，但玻璃化現象不明顯。從這四組培養基的激素配比來看，1號和4號的激素濃度較低，6號和8號的激素濃度配比較高，且1號、4號、8號和6號培養基中NAA：6－BA的比值為別為0.1、0.2、0.5、2，這似乎說明，隨著激素濃度的增加，特別是NAA相對含量的增加，培養物玻璃化現象將逐漸加重。圖1－9為9組培養基中鱗片誘導芽及芽的生長情況。

表2 鱗片誘導不定芽L9(3)4試驗結果

表3 鱗片誘導芽試驗結果的方差分析

2.2 鱗片不同位置和部位對鱗片誘導芽的影響

從表2和表3的結果和方差分析可知：不同著生位置和部位的鱗片對其芽誘導有一定的影響，從著生位置來看，外層鱗片誘導的平均鱗莖數最多，中層次之，內層最差；從部位來看，上節鱗片的下端誘導的平均鱗莖數最多，下節鱗片的上、下兩端誘導的平均鱗莖數一樣多，但差異均不顯著。

3 討論

從上述實驗結果和分析可以看出：誘導文山百合鱗片形成不定芽，6-BA濃度以1.0mg/L最為合適，NAA由于為1.0mg/L時形成的不定芽成苗極緩慢，加之從節省藥品考慮應以0.5mg/L最佳，因此，文山百合芽增殖的最佳培養基應為：

MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，這與屈云慧等人[10]的結果相比稍有差異，其6-BA濃度由0.5mg/L提高到了1mg/L。文山百合由鱗片誘導不定芽，從本次實驗看，每片鱗片平均最多可形成2.54個不定芽，可能是因為6號和8號培養物的玻璃化現象較嚴重，盡管在不定芽的生長過程中，玻璃化現象逐漸減輕，但在鱗片分化形成不定芽時玻璃化現象較嚴重影響了不定芽的數量，因此，如何克服文山百合鱗片誘導不定芽的玻璃化現象以增加不定芽的數量是一個值得研究的問題。此外，9號培養基中形成的鱗莖數也相對較多，并且無玻璃化現象發生，但不定芽分化出來后，生長很慢，兩個月內難以形成苗，三個月后才逐步發育成苗。圖9中已培養了三個月的9號培養中不定芽生長情況證實了這一點，從這組實驗的激素配比來看，雖然NAA︰6-BA的比值不是太高，僅為1，但NAA和6-BA的絕對濃度均較其它組為高，這是否說明較高的激素濃度對不定芽生長成苗有一定的抑制作用，還有待進一步研究。

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