2008年福建省5設區(qū)市公共場所中央空調冷卻塔水軍團菌污染狀況調查＊

原 靈,陳愛平,詹鑾峰,林震宇,楊勁松

2008年福建省5設區(qū)市公共場所中央空調冷卻塔水軍團菌污染狀況調查＊

原 靈,陳愛平,詹鑾峰,林震宇,楊勁松

福建省地處經濟快速發(fā)展的東南沿海,隨著經濟的發(fā)展和人們的生活水平的提高,在公共場所如商場、賓館、飯店及醫(yī)院等均已廣泛使用各種空調系統(tǒng),亦為“城市文明病”——軍團病的發(fā)生提供了有利的條件。軍團病是一種細菌性呼吸道傳染病,病原體是軍團菌,一但感染得病,如未能及時治療,病死率很高〔1〕。福建省迄今尚無軍團菌污染狀況的較完整的調查,為了較全面了解福建省公共場所中央空調冷卻塔水中軍團菌污染狀況,制定軍團病的監(jiān)測防治措施和控制該病流行提供科學依據,作者于2008年7月至10月選擇經濟發(fā)展水平不同的5個設區(qū)市為調查點,在賓館、酒店、大型商場、超市、醫(yī)院等114單位,采集中央空調冷卻塔水115份進行嗜肺軍團菌檢測,現將結果報告如下。

1 材料和方法

1.1 調查點 調查點為福建省的5個設區(qū)市,即福州市、廈門市、泉州市、漳州市及龍巖市共 114家(其中商場或超市13家,賓館、酒店和大飯店99家,醫(yī)院2家)單位,同時對每個采樣單位進行樣品登記。

1.2 采樣時間及數量 2008年6月至10月,在114家共采集中央空調冷卻塔水 115份,每份300m L置滅菌采樣瓶中送檢。

1.3 材料

1.3.1 培養(yǎng)基 GVPC平板、BCYE-α平板、BCYE-cys平板及血平板購自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司,在有效期內使用。生化反應管購自北京友康有限公司。

1.3.2 診斷試劑 軍團菌乳膠試劑購自英國OXO ID公司,嗜肺軍團菌診斷血清購自日本生研。LP7～LP15嗜肺軍團菌分型診斷血清購自天津生物芯片公司。

1.3.3 儀器 PCR擴增儀、TGL-16B臺式高速離心機、水平電泳槽、凝膠成像儀、生物安全柜、CO2培養(yǎng)箱。

1.3.4 引物 嗜肺軍團菌16s rRNA基因及mip基因引物由上海生工合成。嗜肺軍團菌16S rRNA基因引物序列參照中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所舉辦《軍團菌培訓班講課資料》,mip基因引物序列參照文獻〔2〕。

1.3.5 試驗菌株 嗜肺軍團菌標準株及大腸桿菌標準株系本科室菌種組保存。

1.4 檢驗方法

1.4.1 樣品處理與分離培養(yǎng) 參照衛(wèi)生部《公共場所集中空調通風系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》及《ISO 11731 水樣軍團菌檢測》操作。

1.4.2 PCR 鑒定按常規(guī)PCR檢測方法進行,模板制備 (煮沸法):將菌苔刮至含100μL純水的 Eppendorf離心管中,煮沸15min后,12 000r/min離心3min,取上清作為 PCR擴增反應的DNA模板,保存于 -20℃。陽性對照為嗜肺軍團菌標準株(LP1)系本科室菌種組保存。引物序列如下。

目的基因 PCR引物序列(5’-3’) 片段大小(bp)16S rRNA F:GAGGGTTGATAGGTTAAGAGC 430 R:CGGTCAACTTATCGCGTTTGCT mip F:GGTGACTGCGGCTGTTATGG 630 R:GGCCAATAGGTCCGCCAACG

2 結 果

2.1 細菌分離 115份樣品中分離出47株嗜肺軍團菌,檢出率為40.86%。所分離的菌株均為革蘭氏陰性桿菌;在BCYE-α平板上均能生長,BCYE-cys和血平板上均不能生長;生化反應均為:觸酶-、氧化酶-、馬尿酸水解 + 、尿素-、硝酸鹽-、糖發(fā)酵管-、明膠液化試驗+。

2.2 乳膠凝集試驗 能與LP1乳膠試劑產生凝集30株,占63.82%;與LP2-14乳膠試劑產生 凝集17株占36.17%(17/47)。

2.3 血清分型 用嗜肺軍團菌診斷血清LP1-LP15對47株嗜肺軍團菌進行分型,定為LP1 30株 ,占 63.82%、LP5 5 株 、LP6 12 株 。

2.4 PCR鑒定 采用16s rRNA及mip基因引物從分離的47株可疑培養(yǎng)物制備的摸板中擴增出與相應陽性對照一致的條帶。PCR檢測結果見圖1(圖1為部分分離菌株PCR檢測鑒定結果)。

2.5 5個設區(qū)市冷卻塔水嗜肺軍團菌檢測結果將5個設區(qū)市(漳州市、龍巖市、福州市、泉州市、廈門市)冷卻塔水嗜肺軍團菌檢出率進行比較,差異有統(tǒng)計學意義 (χ2=22.159,P<0.05),見表1?？紤]到龍巖市、漳州市數據較少,將兩組數據合并為一組即合并組,并采用卡方分割的方法與其余3個設區(qū)市進行兩兩比較 (α’=0.007143),χ2合并-廈門=16.856,P合并-廈門<α’,兩組差異有統(tǒng)計學意義;χ2合并-泉州=14.964,P合并-泉州<α’,兩組差異有統(tǒng)計學意義;χ2合并-福州=2.743,P合并-福州>α’,兩組差異無統(tǒng)計學意義;經統(tǒng)計學分析合并組(即龍巖市與漳州市)冷卻塔水嗜肺軍團菌檢出率高于泉州市、廈門市,與福州市比較,無顯著差異。

圖1 部分分離的嗜肺軍團菌菌株PCR鑒定結果1:陽性對照菌株(嗜肺軍團菌標準株),2～8:樣品株,菌株號依次為水 2008-8、水 2008-10、水 2008-12、水2008-14、水 2008-15、水 2008-19、水 2008-24,9～10:分別是大腸桿菌為陰性對照和空白對照,M為DL2000 Marker。

2.6 公共場所嗜肺軍團菌的污染狀況 在本次調查檢測的114家公共場所中,檢出嗜肺軍團菌的公共場所為46家,公共場所嗜肺軍團菌的污染率為40.35%。在檢出嗜肺軍團菌的46家公共場所,商場、超市嗜肺軍團菌的污染率為61.54%,賓館、酒店、飯店污染率也接近40.0%;醫(yī)院2份均檢出嗜肺軍團菌,見表2。

3 討 論

調查結果顯示我省5個設區(qū)市114家公共場所受嗜肺軍團菌污染有46家,污染率達40.35%,采集的115份冷卻塔水,嗜肺軍團菌檢出陽性的冷卻塔水有 47份,陽性檢出率為 40.86%,與湖北省〔3〕、北京市〔4〕、廣州市〔5〕、深圳〔6〕、杭州〔7〕報道的陽性率大致相同;從鑒定結果來看,檢出的47株均為嗜肺軍團菌,血清分型以LP1血清型為主要菌型,占總數的63.82%(30/47),其次是LP6,占總數的25.53%(12/47),與北京市〔4〕、杭州市〔7〕LP1 的血清型基本相符。

本文調查結果闡明,福建省5個設區(qū)市的商場、超市、賓館、酒店、飯店的空調冷卻塔水受到嗜肺軍團菌污染比較嚴重;LP1血清型為主要優(yōu)勢菌型;本次檢測有2家醫(yī)院的2份水樣均檢測到嗜肺軍團菌,由于份數少,有待今后調查研究。醫(yī)院人群流動量大,病人的抵抗力都比較低,屬于高危人群,一旦發(fā)生軍團菌污染暴發(fā)其后果嚴重,必需引起重視。

調查研究結果還顯示,龍巖市及漳州市冷卻塔水嗜肺軍團菌檢出率高于泉州市、廈門市,福州市檢出率也達56.00%,提示5個設區(qū)市集中式中央空調通風系統(tǒng)已對人群產生潛在的危害。隨著國民經濟的快速發(fā)展和人民生活水平的日益提高,中央空調系統(tǒng)越來越多地被廣泛使用,軍團菌病發(fā)生的危險勢必明顯增加。建議開展對公共場所集中式中央空調通風系統(tǒng)的日常監(jiān)測、定期換水和按時清洗消毒。各地衛(wèi)生部門應加大對公共場所中央空調系統(tǒng)的監(jiān)督監(jiān)測力度,消除軍團菌生長繁殖的條件,保證冷卻塔水質衛(wèi)生安全,從而控制軍團菌病的發(fā)生;同時要進一步加強對軍團菌有關知識的宣傳教育,提高人們對軍團菌病有關知識的了解、提高防范意識。

表1 5個設區(qū)市冷卻塔水嗜肺軍團菌檢測結果

表2 公共場所嗜肺軍團菌的檢測結果

〔1〕陳悅,沈健民,王剛毅.軍團菌流行現況及其對策研究〔J〕.上海預防醫(yī)學,2003:17.

〔2〕Jaulhac B,Nowicki M,Bornstein N,et al.Detection of Legionella spp.In bronchoalveolar lavage fluids by DNA amplification〔J〕.J Clin Microbiol,1992 Ap r,30(4):920-4.

〔3〕李泉,付潔,馬戈,等.湖北省三市集中式中央空調冷卻塔水軍團菌污染狀況調查〔J〕.公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學,2007,18(2):50-51.

〔4〕彭曉旻,裴紅生,黎新宗,等.北京市大飯店空調冷卻塔軍團菌污染現狀及人群感染水平研究〔J〕.中華流行病學雜志,2002,21(4):289-291.

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〔6〕溫群文,段永翔,袁夢,等.深圳市公共場所中央空調冷卻塔軍團菌污染現況調查〔J〕.中國熱帶醫(yī)學,2005,5(5):1088.

〔7〕斯國靜,俞驊,王一泓,等.杭州市區(qū)公共場所空調冷卻塔水中嗜肺軍團菌的調查和分析〔J〕.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(3):281-282.

1002-2694(2010)11-1080-03

R379.9

B

＊本課題為福建省2009年自然科學基金資助項目(No.31091732)

福建省疾病預防控制中心,福州 350001;Email:fjcdcxjyuanling@yahoo.com.cn

2010-05-27;

2010-08-31