HPLC法測定婦康膠囊中鹽酸水蘇堿的含量

【摘要】目的:建立婦康膠囊中水蘇堿的含量測定方法。方法:采用高效液相色譜法，EC 250/4.6 NUCLEOSTL，100-5 SA柱，以0.05mol.L-1磷酸二氫鉀—乙晴—三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸調pH值至2.3)為流動相。結果:水蘇堿在0.344～5.500μg范圍內呈良好的線性關系。R=0.9999，回收率為99.2%。結論:該方法簡單、靈敏、準確。

【關鍵詞】婦康膠囊;益母草;鹽酸水蘇堿;高效液相色譜法

【中圖分類號】R917【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)10-084-1

1儀器、試劑與藥品

1.1SSI液相色譜儀，分析之星色譜工作站;sartoriusBP211D電子天平;JL—180DTH超聲波清洗器。

1.2鹽酸水蘇堿對照品為中國藥品生物制品檢定所提供(批號712-200105供含量測定用);婦康膠囊(成都圣洪生物科技有限公司);缺益母草陰性對照品(由成都圣洪生物科技有限公司提供);甲醇為色譜醇;水為重蒸餾水;其余試劑為分析純。

2試驗方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱為EC 250/4.6 NUCLEOSTL，100-5 SA柱，0.05mol.L-1磷酸二氫鉀—乙晴—三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸調pH值至2.3)為流動相;流速為0.8ml/min;檢測波長為192nm。

2.2試驗用溶液的制備

對照品溶液的制備精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，置容量瓶中，加30%的甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備取本品裝量差異檢查項下的內容物，研細，取約2.0g，精密稱定，置燒瓶中，精密加乙醇50ml，稱定重量，回流提取1小時，取出放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25ml，通過氧化鋁—活性碳柱(中性氧化鋁3g，濕法裝柱，上層用活性碳1g，乙醇預洗)，用乙醇90ml洗脫，洗脫液蒸干，殘渣用30%的甲醇溶解定容于10ml容量瓶中，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.3陰性樣品溶液的制備

取不含益母草的樣品，同供試品溶液制備方法項下制備。

2.4陰性干擾性試驗

在選定的色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、樣品溶液和缺益母草陰性樣品溶液各10ul注入液相色譜儀，理論塔板數(N)按水蘇堿峰計算在5000以上。水蘇堿的保留時間約為7min，陰性樣品在對照品位置無干擾峰，色譜圖分別見A、B、C。

A.對照品 B.供試品C.陰性樣品

2.5標準曲線的繪制精密稱取鹽酸水蘇堿對照品適量，加30%甲醇制成不同濃度的對照品溶液，搖勻，作為對照品溶液，分別精密進樣10micro;l，其進樣量為0.344micro;g、0.688micro;g、1.375micro;g、2.75micro;g、4.125micro;g、5.5micro;g，按色譜條件進行分析，測定峰面積，并以峰面積值(A)對進樣量(C)進行回歸，得標準曲線方程為:A=1.3456×105C+1.8752×103，r=0.9999。以峰面積值(A)對進樣量(C)作圖，得一直線，結果表明在0.344～5.50μg范圍內與峰面積呈很好的線性關系。

2.6精密度試驗精密吸取鹽酸水蘇堿對照品溶液(0.1375mg

/ml)10micro;l，連續進樣5次，測得鹽酸水蘇堿對照品峰面積RSD%為0.85%。

2.7穩定性試驗取樣品(批號051001)，制備供試品溶液，分別于不同時間進樣，結果表明樣品在16小時內測定較穩定。

2.8重復性試驗取樣品(批號051001)，分別制備5份供試品溶液，按上述色譜條件進行測定，鹽酸水蘇堿的平均含量為1.66mg/g，其RSD%=1.17%，方法重復性較好。

2.9回收率試驗精密稱取樣品(樣品批號為051001，含量平均值為1.66mg/g)適量，6份，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品溶液，按上述色譜條件進行測定，平均回收率為99.2%，RSD=0.61%，表明回收率的試驗較好。

2.10樣品的含量測定取3批樣品，依法制成供試品溶液10ul，隨行對照溶液10進樣，分別測定吸收峰面積，按外標法計算樣品的含量。

3討論

3.1流動相的選擇

依據文獻，本實驗曾試用了多種流動相[1.2]，并比較了0.05mol.L-1磷酸二氫鉀—三乙胺、0.05mol.L-1磷酸二氫鉀—乙晴—三乙胺、0.1mol.L-1磷酸鹽溶液(1.0mol.L-1磷酸二氫鈉溶液用0.1mol.L-1用磷酸氫二鈉溶液調節Ph至5.5)等流動相，結果顯示，以0.05mol.L-1磷酸二氫鉀—乙晴—三乙胺(100:2:0.1)(以磷酸調pH值至2.3)為流動相效果較佳，故選擇其為流動相。

3.2水蘇堿峰形影響因素

樣品的進樣量越大，其峰形拖尾較為嚴重，樣品的分離較差，流動相中加入三乙胺可以改變峰形的對稱性，而加入磷酸調PH值對峰形有較大的影響。PH大于2即可，試驗中選擇PH為2.3即可。

3.3樣品的提取凈化

高效液相測定樣品中的水蘇堿成分，關鍵問題在于樣品的純化處理，試驗中雖有不同的關于鹽酸水蘇堿的樣品純化處理，如有的采用雷氏鹽沉淀法，其方法較繁瑣，不利于樣品操作，試驗重復性較差，也有采用過強酸性陽離子交換樹脂吸附，但樣品不純，也不利于鹽酸水蘇堿的檢測，試驗中以過氧化鋁—活性碳柱能很好的解決以上問題，所制得的樣品較純，雜質峰較少，在紫外末端能很好的檢測到。

參考文獻

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