HPLC法測定藏藥榜嘎中阿替新\\異葉烏頭堿的含量

【摘要】目的:測定四批藏藥榜嘎中的阿替新、異葉烏頭堿含量。方法:采用HPLC法，用DiamonsilC18柱(5μm，150mm×4.6mm)，以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脫，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測波長230nm。結(jié)果:在1micro;g～5micro;g間，阿替新與異葉烏頭堿均呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.238%，RSD值1.477%。結(jié)論:該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于藏藥榜嘎中阿替新、異葉烏頭堿的含量測定。

【關(guān)鍵詞】榜嘎;阿替新;異葉烏頭堿;HPLC

【中圖分類號】R29【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)10-188-2

榜嘎是常用藏藥，為毛茛科植物船盔烏頭Aconitum naviculare(Brahl.)Stapf及甘青烏頭Aconitum tanguticum(Maxim.)的全草。主要分布于西藏南部，陜西秦嶺、甘肅南部、青海東部、四川西部，云南北部等地也有出產(chǎn)。功效清熱解毒利濕，主治肝炎、膽囊炎、肺炎、感冒發(fā)熱、咽喉炎、胃腸炎等。榜嘎主要含有生物堿類成分，本研究測定了其中的阿替新、異葉烏頭堿含量。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試藥和藥品

Thermo高效液相色譜儀(Finigan公司)，PDA檢測器，甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純，阿替新、異葉烏頭堿對照品由SIGMA公司提供。榜嘎藥材四批，分別購自四川省阿壩州馬爾康、紅原、黑水及阿壩四縣。

1.2色譜條件[1]和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

(A)

(B)

(C)

圖1.阿替新和異葉烏頭堿對照品溶液色譜圖(A)，榜嘎樣品溶液色譜圖(B)，和空白溶液色譜圖(C)，(1.阿替新，2.異葉烏頭堿)

用Diamonsil C18柱(5μm，150mm×4.6mm)，以甲醇-水-氯仿-三乙胺(70:30:2:0.1)洗脫，流速1ml/min，柱溫30℃，檢測波長230nm，按阿替新計，色譜柱理論塔板數(shù)不低于6×103，阿替新峰和異葉烏頭堿峰與其他峰達(dá)到基線分離，峰形對稱。色譜圖見圖1。

1.3溶液的制備

1.3.1對照品溶液的制備精密稱取阿替新、異葉烏頭堿適量，加二氯甲烷制成濃度為1mg/ml的溶液，精密吸取1ml，置于尖底具塞試管中，精密加入0.01mol/l硫酸溶液1ml，渦旋2min，離心5min，取上清液，即得。

1.3.2樣品溶液的制備取粉末10g，加入25%氨水6ml潤濕，再加入乙醚50ml，放置過夜，過濾，藥渣用乙醚洗滌三次，每次15ml，合并乙醚液，在60℃以下?lián)]干，殘渣用二氯甲烷溶解并定量轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中。色譜檢測前按1.3.1處理此溶液并進(jìn)樣。

1.4方法學(xué)考察

1.4.1線性范圍精密吸取上述阿替新和異葉烏頭堿對照品溶液2、4、6、8、10micro;l注入液相色譜儀，觀察色譜圖，記錄其峰面積，并以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量C(micro;g)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，阿替新進(jìn)樣量在1micro;g～5micro;g間線性關(guān)系良好，A=38345C-1354.1(r=0.9999);異葉烏頭堿進(jìn)樣量在1micro;g～5micro;g間線性關(guān)系良好，A=32069C-39.6(r=0.9999)。

1.4.2精密度試驗(yàn)精密吸取阿替新對照品溶液5micro;l，連續(xù)進(jìn)樣6次，阿替新峰面積的RSD為0.21%，表明儀器精密度良好。

1.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取榜嘎粉末5份，分別按1.3.2項(xiàng)下方法制成樣品溶液，以1.2項(xiàng)下色譜條件，精密吸取5micro;l注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算阿替新含量，結(jié)果阿替新平均含量0.106%，RSD為1.45%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品溶液，分別在0、1、2、4、6、8小時，精密吸取5micro;l注入液相色譜儀，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.73%，表明樣品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

1.4.5加樣回收率試驗(yàn)稱取已知含量的榜嘎粉末5份，每份約0.1g，精密稱定，分別加入一定量的對照品，按上述重

(下轉(zhuǎn)第190頁)

(上接第188頁)

復(fù)性方法測定阿替新含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

1.5樣品測定

按1.3.2項(xiàng)下方法制備樣品溶液后，按上述重復(fù)性項(xiàng)下方法測定阿替新、異葉烏頭堿含量，結(jié)果見表2。

2討論與結(jié)論

由于關(guān)于阿替新與異葉烏頭堿的研究較少，缺少參考文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)參照其同屬植物烏頭的主要成分烏頭堿的樣品處理方法及色譜條件[1，2]，得到了較好的提取率和色譜分離。紫外光譜吸收圖中顯示該兩種化合物的最大吸收均接近230nm，故選擇230nm為檢測波長。測量結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的榜嘎藥材中阿替新與異葉烏頭堿含量差別不大。榜嘎藥材化學(xué)成分和含量測定的研究較少，由于資源有限，本實(shí)驗(yàn)只測定了其中的兩種成分，建議今后加強(qiáng)該方面研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 朱俊訪，李卓亞，沈志濱，等.HPLC法測定不同地區(qū)制川烏中新烏頭堿、次烏頭堿及烏頭堿的含量[J].食品與藥品，2008，10(9):44-46.

[2] 張聿梅，魯靜，蔣渝，等.川烏和制川烏中單酯及雙酯型生物堿成分的含量測定[J].藥物分析雜志.2005，25(7):807-812.