大腸腺癌中HSP27和MMP9的表達及意義

【摘要】 目的 觀察大腸腺癌中HSP27和MMP9的表達情況。方法 選擇手術切除結直腸腺癌標本62例，并取20例癌旁正常大腸黏膜組織標本作對照，采用SP免疫組化方法檢測HSP27和MMP9的表達。觀察大腸腺癌組和對照組中HSP27、MMP9的表達;大腸腺癌組中年齡、性別、腫瘤直徑、組織學類型、淋巴結轉移以及Dukes分期與HSP27、MMP9表達的關系。結果 大腸腺癌組的HSP27、MMP9表達均顯著高于對照組(P<0.01)。在中低分化腺癌和存在淋巴結轉移患者的HSP27、MMP9表達顯著高于高分化和無淋巴結轉者(P<0.05或0.01);HSP27與MMP9在大腸腺癌中的表達無顯著性差異(P>0.05)。結論HSP27和MMP9在大腸腺癌的發生、分化、浸潤、轉移中起協同作用。

【關鍵詞】 大腸腫瘤;腺癌;HSP27;MMP9

文章編號:1003-1383(2010)04-0395-03 中圖分類號:R 735.3+4文獻標識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.04.007

大腸癌是消化道常見惡性腫瘤之一。腫瘤的復發和轉移是大腸癌患者的主要死亡原因，而腫瘤的轉移是多基因多因素參與的多步驟的復雜過程。研究顯示，熱休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)，可能參與腫瘤的發生和轉移[1]。我們應用免疫組化法在62例結直腸癌組織中分別檢測HSP27和基質金屬蛋白酶9 (matrix metalloproteinase 9，MMP9)的表達，探討二者與結直腸癌的發生、發展和轉移的關系，為臨床診斷、治療和預后判斷提供依據。

材料與方法

1.標本來源 收集右江民族醫學院附屬醫院2003年1月～2008年6月手術切除結直腸腺癌標本62例，其中男性38例，女性24例，年齡33～71歲，<50歲27例，≥50歲35例，中位年齡55.6歲;其中腫瘤直徑<3 cm 22例，直徑≥3 cm 40例;高分化管狀腺癌和黏液腺癌39例，中低分化腺癌和黏液腺癌23例;有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移29例。Dukes分期A+B期25例，C+D期37例。取20例癌旁正常大腸黏膜組織作為對照，其中男性13例，女性7例，年齡43～65歲，中位年齡51歲。

2.試劑 HSP27鼠抗人單克隆抗體和MMP9鼠抗人單克隆抗體，SP染色試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術公司。

3.檢測方法 采用SP法免疫組化染色。按試劑盒說明書進行，將4 μm厚的切片常規脫蠟至水，經0.3%過氧化氫10 min，枸櫞酸鹽緩沖液加熱抗原修復20 min，正常羊血清封閉10 min，滴加第一抗體，4℃孵育過夜，清洗后滴加第二抗體，37℃下30 min，清洗后滴加第三抗體，37℃下30 min，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作陰性對照，用已知的HSP27、MMP9染色陽性的乳腺癌組織切片分別作二者的陽性對照。

4.結果判斷 HSP27以細胞質和胞核出現淡黃、棕黃、棕褐色顆粒者為染色陽性細胞，MMP9以細胞質出現淡黃、棕黃、棕褐色顆粒者為染色陽性，在400倍視野下隨機計數500個細胞，半定量分析，根據鏡下觀察陽性細胞比例及陽性著色強度。陽性細胞數按無著色、陽性數<1/3、1/3～2/3和>2/3分別判為0、1、2、3分，每張切片陽性細胞的著色按無著色、黃色、棕黃色和棕褐色分別判為0、1、2、3分，根據兩項積分之和判斷其結果，≥3分為陽性。

5.觀察項目 觀察大腸腺癌組和對照組中HSP27、MMP9的表達;大腸癌組中年齡、性別、腫瘤直徑、組織學類型、淋巴結轉移以及Dukes分期與HSP27、MMP9表達的關系。

6.統計學處理 應用SPSS 13.0統計軟件進行統計分析，計數資料行χ²檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

結果

1.大腸腺癌與對照組HSP27、MMP9的表達 大腸腺癌組的HSP27、MMP9表達均顯著高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.不同年齡大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 不同年齡之間大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達無顯著性差異(P>0.05)。見表2。

3.不同性別大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 不同性別之間大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達無顯著性差異(P>0.05)。見表3。

4.不同腫瘤直徑大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 不同腫瘤直徑之間大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達無顯著性差異(P>0.05)。見表4。

5.不同組織學類型大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 中低分化大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達顯著性高于高分化者(P<0.05或0.01)。見表5。

6.不同淋巴結轉移情況大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 有淋巴結轉移的大腸腺癌患者的HSP27、MMP9表達顯著性高于無淋巴結轉移者(P<0.05或0.01)。見表6。

7.不同Dukes分期大腸腺癌者的HSP27、MMP9表達 不同Dukes分期之間大腸腺癌患者的HSP27、MMP9表達無顯著性差異(P>0.05)。見表7。

8.大腸腺癌中HSP27與MMP9表達的比較 HSP27與MMP9在大腸腺癌中的表達無顯著性差異(P>0.05)。見表8。

討論

熱休克蛋白(Heat shock proteins，HSPs)，是細胞在生理應激或在病理因素刺激下，細胞內合成的一組高度保守的蛋白質，具有保護細胞免受各種應激損傷的作用。熱休克蛋白27(HSP27)是熱休克基因(HSG)編碼的低分子量蛋白質之一。研究表明，HSP27在多種腫瘤中呈現高表達，參與調節細胞的增殖、分化和細胞凋亡信號轉導[2～4]。本研究結果顯示，HSP27在大腸癌組織的表達陽性率顯著高于正常組織(P<0.01)，提示HSP27與大腸腺癌的發生有關。在中低分化腺癌和存在淋巴結轉移患者的HSP27表達顯著高于高分化和無淋巴結轉者(P<0.05);提示其表達可能與大腸腺癌的分化、淋巴轉移相關，而與年齡、性別、腫瘤直徑及Dukes分期之間無顯著相關性(P>0.05)。

MMP9是一個Zn2+依賴性內太酶超家族MMPs中分子量最大的酶，主要由結締組織細胞、內皮細胞、巨噬細胞、粒細胞及腫瘤細胞等合成和分泌[5]。其主要功能是降解細胞外基質中的Ⅳ型膠原，MMP9通過降解基底膜中Ⅳ型膠原，參與腫瘤的浸潤與轉移。現已發現，MMP9的表達與多種腫瘤的侵襲、浸潤和轉移能力有關[6，7]。本研究結果顯示，MMP9在大腸腺癌組織的表達陽性率顯著高于正常組織(P<0.01)，提示MMP9參與大腸癌的發生。在中低分化腺癌和存在淋巴結轉移患者的MMP9表達顯著高于高分化和無淋巴結轉者(P<0.01);提示其表達可能與大腸腺癌的分化、淋巴轉移相關，而與年齡、性別、腫瘤直徑及Dukes分期之間無顯著相關性(P>0.05)。

隨著研究的不斷深入，HSP27與腫瘤的關系日益受到重視。研究發現，HSP27 在肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌等多種腺癌組織中高表達，認為其是影響患者預后的不良因素[8]。本研究發現，HSP27與MMP9在大腸腺癌中的表達無顯著性差異(P>0.05)。但均與大腸腺癌的分化、淋巴轉移相關，而與年齡、性別、腫瘤直徑及Dukes分期之間無顯著相關性(P>0.05)。表明HSP27和MMP9在大腸腺癌的分化、浸潤轉移中起協同作用。因此，我們認為，聯合檢測HSP27和MMP9可作為判斷大腸腺癌患者預后的指標。

參考文獻

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(收稿日期:2010-06-17修回日期:2010-07-20)

(編輯:梁明佩 英文審校:鐘京梓)