反相高效液相色譜法測定銀翹感冒袋泡劑中綠原酸的含量

【摘要】 目的 建立銀翹感冒袋泡劑中綠原酸的含量測定方法。

方法 采用反相高效液相色譜法對銀翹感冒袋泡劑中綠原酸進行定量分析，色譜柱為Shimpack vpods C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86);檢測波長:324 nm;柱溫:30℃;流速1.0 ml.min-1;進樣量:20 μl。結果 綠原酸在0.1016～3.0480 μg范圍內呈良好的線性(r=0.9999，n=6)，平均回收率為100.28%，RSD為1.57%(n=6)。結論 本方法準確、可靠、重現性好，可有效控制該制劑的質量。

【關鍵詞】 銀翹感冒袋泡劑;綠原酸;反相高效液相色譜法

文章編號:1003-1383(2010)04-0403-02 中圖分類號:R 927.2文獻標識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.04.010

銀翹感冒袋泡劑是在我院臨床經驗方的基礎上研制而成，由金銀花、薄荷、連翹等9味中藥組成，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，主要用于治療風熱感冒、咽喉疼痛、咳嗽口干等，金銀花為方中君藥，綠原酸是其主要化學成分。為提高質量標準，達到更有效地控制該制劑內在質量的目的，本文建立以反相高效液相色譜法測定銀翹感冒袋泡劑中綠原酸含量的方法。

材料和方法

1.儀器 島津LC20A型高效液相色譜儀(SPD20A紫外檢測器、LCSolution色譜工作站)，Mettler toledo型電子分析天平(瑞士Metter公司);CQX256型超聲波清洗機(中國北京創新德超聲電子研究所)。

2.試藥 綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110753200413);銀翹感冒袋泡劑(批號:090603，090610，090618，090626，090702，090712，本院自制);甲醇為色譜純;三乙胺、冰醋酸為分析純;水為純凈水。

2.方法

(1)色譜條件 色譜柱:Shimpack vpods C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86);檢測波長:324 nm;柱溫:30℃;流速1.0 ml.min-1;進樣量:20μl。理論塔板數按綠原酸峰計算應不低于3000。

(2)對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置25 ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，以配成0.508 mg#8226;ml-1的對照品溶液，備用。

(3)供試品溶液的制備 取10小袋樣品，傾出內容物，研細，取細粉1.00 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加50%甲醇40 ml，超聲(260 W，頻率40 kHz)處理30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

(4)陰性對照品溶液的制備 以相同的處方比例取除金銀花外的藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

(5)線性關系考察 精密吸取對照品溶液0.25，0.50，1.50，3.00，5.00，7.50 ml，置25 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取20μl進樣，以對照品峰面積值為縱坐標(Y)，對照品的量為橫坐標(X)，進行線性回歸，得回歸方程為Y=3075.2X+32.391，r=0.9999(n=6)。結果表明綠原酸進樣量在0.1016～3.0480 μg范圍內呈良好的線性。

(6)陰性干擾實驗 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20μl進樣測定。結果供試品溶液中在與對照品溶液相同位置上具有同一保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液對測定無干擾。見圖1。

(7)精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液20μl，重復進樣6次。測得峰面積的RSD為1.02%(n=6)，表明精密度良好。

(8)穩定性試驗 取同一供試品溶液20μl，分別于0，2，4，6，8，12 h 進樣，測得綠原酸的峰面積的RSD為1.05%，表明供試品溶液中綠原酸至少在12h內穩定。

(9)重復性試驗 取同一批供試品6份，精密稱定，制備供試品溶液，進樣20 μl，測定綠原酸的含量，結果其含量的RSD為0.73%(n=6)，表明方法的重復性良好。

(10)回收率試驗 取已知含量的供試品6份，精密稱定，分別精密加入0.508 mg#8226;ml-1的綠原酸對照品溶液2.0 ml，按供試品制備方法制備供試液，進樣，記錄色譜圖，計算回收率。結果平均回收率為100.28%，RSD為1.57%，表明回收良好。見表1。

結果

精密稱取6個批號的樣品各適量，按供試品制備方法制備樣品溶液，在色譜條件下測定，用外標法計算綠原酸含量。結果批號為090603，090610，090618，090626，090702，090712的樣品中綠原酸含量分別為2.835，2.852，2.906，2.867，2.793，2.784 mg/袋，平均為2.840 mg/袋。回收率試驗平均回收率為100.28%，RSD為1.57%，表明回收良好。

討論

1.提取方法的確定 由于綠原酸極不穩定且極性較大，參考中國藥典[1]并結合指標成分的理化性質，我們比較了熱回流提取和超聲提取兩種方法，發現超聲提取較為完全且不影響指標成分的分解，利于控制該制劑的質量。

2.提取溶劑的選擇 采用甲醇、乙醇、水作為提取溶劑，通過比較單一溶劑和混合溶劑，最后選定50%甲醇溶液作為最佳提取溶劑。

3.提取時間的確定 考察了超聲提取時間的影響，結果發現超聲處理20、30、40 min差別不大，為了提取完全同時又節約時間，故選擇超聲提取30 min為宜。

4.檢測波長的選擇 取綠原酸對照品適量，加50%甲醇使之溶解，在200～400 nm范圍內進行紫外掃描，結果綠原酸在324nm波長處有最大吸收，因此選擇324 nm為檢測波長。

5.色譜系統的選擇 比較了甲醇三乙胺冰醋酸水(18∶0.3∶1∶85)、乙腈0.3%磷酸溶液(9∶91)[1]、乙腈0.4%磷酸溶液(10∶100)[2]三個不同組分、不同比例的流動相，最終發現在甲醇三乙胺冰醋酸水(20∶0.3∶1∶86)的色譜條件下，綠原酸與其他組分分離較好(分離度大于1.5，理論塔板數大于3000)，且陰性無干擾。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].(一部).北京:中國醫藥科技出版社，2010:1090-1091.

[2]鐘鏡金，陳豐連，王術玲，等.HPLC法測定銀翹解毒口服液中綠原酸的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18(3):228-229.

(收稿日期:2010-06-29 修回日期:2010-07-25)

(編輯:梁明佩 英文審校:鐘京梓)