家兔玻璃體液鐵\\磷含量變化與PMI的相關(guān)性研究

[摘要] 目的 研究死后家兔玻璃體液鐵、磷濃度變化與死亡時間的關(guān)系，尋找一種精確推斷PMI的方法。方法 應(yīng)用全自動生化分析儀檢測樣本中鐵、磷含量，對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。結(jié)果 家兔死后54h內(nèi)眼玻璃體鐵、磷元素與PMI顯著相關(guān)，其單元回歸方程分別為y=14.48-0.244x(x=PMI，y=Fe，r=-0.993)、y=-4.573+0.366x(x=PMI，y=Fe，r=0.965)、y=0.137+0.041x(x=PMI，y=P，r=0.975)。結(jié)論 在54h內(nèi)玻璃體液鐵、磷含量變化可作為推斷PMI的參考指標。

[關(guān)鍵詞] 法醫(yī)病理學; 死后經(jīng)過時間; 玻璃體液; 離子濃度; 家兔; 全自動生化分析儀

[中圖分類號] R919.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)03-07-02

Correlation between Postmortem Interval and Levels of Iron and Phosphorus in Rabbit Vitreous Humor:An Experimental Study

LI Hai GAO Cairong

College of Forensic Medicine of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the correlation between postmortem interval(PMI)and the concentration of iron(Fe)and phosphorus(P)in vitreous humor in rabbits after death in an effort to seek a exact method of estimating PMI. MethodsThe levels of iron(Fe)and phosphorus(P)in the vitreous humor were measured by automatic biochemistry analyzer. ResultsThe iron(Fe)and phosphorus(P)levels in rabbit vitreous humor within 54h after death were related to PMI significantly. The formulate of the relationship between PMI and iron(Fe)level was y=14.48-0.244x(x=PMI，y=Fe，r=-0.993)and y=-4.573+0.366x(x=PMI，y=Fe，r=0.965)and the formulate of the relationship between PMI and phosphorus(P)level was y=0.137+0.041x(x=PMI，y=P，r=0.975). ConclusionThe levels of iron(Fe)and phosphorus(P)in rabbit vitreous humor within 54h may serve as a reference index for the estimation of PMI.

[Key words]Forensic pathology; Postmortem interval; Vitreous humor; Concertration of ionic; Rabbit; Automatic biochemistry analyzer

死亡時間推定(esti mati on of the time sincedeath)是法醫(yī)學尸體檢驗首先要解決的問題。本實驗旨在探索一種簡單、快速、穩(wěn)定，益于普及和推廣的方法，以德國Cobas Integra 400全自動生化分析儀為工具，利用比色法研究家兔玻璃體液內(nèi)鐵和磷含量變化，以找出其與死后時間(post mortem interval，PMI)的相關(guān)性，為進一步闡明死后經(jīng)過時間的生物學效應(yīng)提供實驗性依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組及取材

健康家兔150只(雌雄不限，重約1～2.5kg)，隨機分為10組，每組15只，在室內(nèi)將兔斷頭處死后，于死后即時、6、12、18、24、 30、36、42、48、54h各取玻璃體液1mL，以3000r/min離心(4℃)2min，取0.5mL上清待測。

1.2 檢測方法

將待測上清液加入德國Cobas Integra 400全自動生化分析儀測定通道。

1.3 統(tǒng)計學分析

所得數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行單元回歸分析，經(jīng)t檢驗或方差分析，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

家兔在死后即刻至死后54h間的Fe和P含量測定結(jié)果見表1。

由表1可知，家兔死后在6～30h之間，玻璃體液鐵含量呈逐步下降的趨勢，經(jīng)Pearson相關(guān)分析，其與PMI呈明顯的負相關(guān)，相關(guān)系數(shù):-0.993(P<0.01)，對鐵含量與PMI作單元回歸分析，擬合出相應(yīng)的線性回歸方程為y=14.48-0.244x(x=PMI，y=Fe，r=-0.993，P<0.01)，而在30～54h之間，鐵含量逐漸上升，經(jīng)Pearson相關(guān)分析，其與PMI呈明顯的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù):0.965(P<0.01)，對鐵含量與PMI作單元回歸分析，擬合出相應(yīng)的線性回歸方程為y=-4.573+0.366x(x=PMI，y=Fe，r=0.965，P<0.01)。玻璃體液鐵測量值在6h以后與死后即時均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

由表1可知，家兔死后在0～54h之間，玻璃體液磷含量呈逐步上升的趨勢，經(jīng)Pearson相關(guān)分析，其與PMI呈明顯的正相關(guān)，相關(guān)系數(shù):0.975(P<0.01)，對磷含量與PMI作單元回歸分析，擬合出相應(yīng)的線性回歸方程為y=0.137+0.041x(x=PMI，y=P，r=-0.975，P<0.01)。玻璃體液磷測量值在6h以后與死后即時均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

3 討論

死亡時間推定一直是法醫(yī)學的重點，它為公安偵察工作提供了有力的線索，受到國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注和研究[1，2]。玻璃體具有解剖位置相對隔離，很少受到污染和腐敗的影響，發(fā)生化學變化比血液和腦脊液慢，其各種成分的變化相對穩(wěn)定[3]，是尸體化學研究的理想檢材。玻璃體成分的死后變化與PMI關(guān)系也成為國內(nèi)外法醫(yī)學研究的熱點[4，5]。本實驗用CabasIntegra全自動生化分析儀研究不同的溫度下家兔玻璃體液中Fe、P含量變化，探求其與PMI的相關(guān)性，取得了具有顯著意義的結(jié)果，并獲得了各自的回歸方程，所得單元回歸方程經(jīng)t檢驗有顯著意義(P<0.01)。提示死后玻璃體液Fe、P含量變化可以用來推測PMI。

實驗所用Cobas Intergra Phosphate和Cobas Intergra Iron試劑盒是一種體外診斷試劑盒，可以在CabasIntegra系統(tǒng)上分別對體液中的Fe和P濃度進行定量檢測。其中體液鐵在酸性介質(zhì)中解離出來，被還原劑還原成二價鐵，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在562nm處監(jiān)測其吸光度變化。體液中的無機磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成的磷鉬酸銨復合物，直接在340nm波長處測定其吸光度。德國奧巴斯全自動生化分析儀可同時測定36個項目，其通過光電比色原理檢測反應(yīng)產(chǎn)物顏色深淺，被檢物含量越高，反應(yīng)產(chǎn)物顏色越深，檢測數(shù)據(jù)越大。這兩種方法的優(yōu)點是簡單、快速、穩(wěn)定，有利于方法的普及和推廣，同時其本底干擾可以通過設(shè)立空白對照來解決。

家兔死后玻璃液磷含量升高可能與死后細胞膜通透性增加有關(guān)，磷元素釋放進玻璃體液有關(guān)，本試驗與陶濤的研究[6]相一致。同時與文獻[7]報道的豬尸體眼玻璃體液中磷含量的變化趨勢基本相同。本實驗鐵元素的變化規(guī)律與許小明、龔志強的研究[8]相同，但鐵元素在30h左右才從最低限開始上升，其原因不十分明確，有可能系實驗系統(tǒng)誤差所致，但不管怎樣，有理由相信，隨著設(shè)備自動化及先進化發(fā)展，應(yīng)用玻璃體內(nèi)磷、鐵的含量變化來推測PMI將會成為推測死亡時間的有用方法。

由于本實驗研究采用的是健康家兔，并統(tǒng)一了試驗條件。這樣，與人尸體就會有較大差異，人尸體所處的環(huán)境條件、個體差異等等均是死亡時間推斷的影響因素。因此，對本文的研究成果是否有實用價值的評價有待于進一步作人尸體研究。

[參考文獻]

[1] Al Alousi LM，Anderson RA，Worster DM，et al. Fact orsinfluencing the precision of estimating the postmortem interval using the triple-expon- ential formulae(TEF). A study of the effect of body variables and covering of the torso on the postmortem brain，liver and rectal cooling rates in 117 forensic cares[J]. Forensic Sci Int，2002，125(2-3):232-230.

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[7] Drolet R，D’Allaire S，Chagnon M. The evaluation of postmortem ocular fluid analysis as a diagnostic aid in sows[J]. J Vet Diagn Invest，1990，2(1):9-13.

[8] 許小明，龔志強，孫躍剛，等. 家兔死后眼玻璃體液鎂、鐵含量與PMI關(guān)系的研究[J]. 法醫(yī)學雜志，2002，18(2):100-101.

(收稿日期:2009-10-21)