MCP-1對梗阻性積水腎臟功能的評估價值

[摘要] 目的 探討MCP-1對梗阻性積水腎臟功能的評估價值。方法 應用B超對32名患者的雙腎進行檢測，分析腎積水的程度。應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測病腎腎盂尿MCP-1水平，檢測結果與B超對腎積水程度的分級作相關分析。結果 B超診斷重度腎積水4例，中度腎積水16例，輕度腎積水12例。病腎腎盂尿MCP-1水平隨分級的增加而遞增，在各分級組間比較均有顯著性差異(P<0.01)。經Spearman秩次相關分析，病腎腎盂尿MCP-1水平與分級密切正相關，有顯著性差異(P<0.001)。結論 病腎腎盂尿MCP-1的檢測對梗阻性積水腎臟功能損害程度有較好的評估價值。

[關鍵詞] MCP-1; B超; 腎積水

[中圖分類號] R692.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)03-25-03

Value of Monocyte Chemotactic Protein-1 in Renal Function Evaluation in Obstructive Hydronephrosis

LI Zhilong REN Laicheng

The Second Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] ObjectiveTo discuss the value of monocyte chemotactic protein-1(MCP-1) in the renal function evaluation in obstructive hydronephrosis. MethodsRenal B ultrasound was performed in 32 patients and they were classified according to the degree of hy- dronephrosis. Urine MCP-1 concentration of hydronephrotic kidneys was detected by Enzyme-linked immuno-sorbent assy(ELISA)and Spearman’s correlation test was used to compare grades of hydronephrotic kidneys. ResultsUltrasonic diagnosis showed severe- grade hydronephrosis 4 patients，moderate-grade hydronephrosis in 16 and mild- grade hydronephrosis in 12. There was a significant difference between the grades and the MCP-1 urine concentration of hydronephrotic kidneys(P<0.01). Spearman’s correlation test showed MCP-1 was positively correlated closely with grades，with a significant difference(P<0.001). ConclusionMCP-1 urine concentration of hydronephrotic kidneys may evaluate damage degree of renal function.

[Key words]Monocyte chemotactic protein-1; B-ultrasound; Hydronephrosis

腎積水是臨床上常見的腎功能不全就診原因之一，長期腎積水多合并有不同程度的腎臟功能損害。此外，由于腎積水早期多無明顯癥狀，多數患者因此貽誤治療時機，直至腎積水造成腎體積增大、腰酸、腰痛、感染以及腎結構破壞，嚴重者將導致患腎的腎功能不全，甚至出現腎功能衰竭時，人們才發現腎積水的存在。因此，腎積水的病因診斷和腎功能損害程度的評估對于早期發現腎積水，早期手術和挽救有功能的腎臟至關重要[1]。現收集我院2008年11月～2009年6月B超診斷為腎積水32例，分析腎積水的程度。并應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測病腎腎盂尿MCP-1水平。從而探討MCP-1對梗阻性積水腎臟功能的評估價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

1.1.1 對象選擇 本文收集山西醫科大學第二臨床醫學院2008年11月～2009年6月B超診斷為單側尿路梗阻所致腎積水32例。所有入組患者的B超檢測均由同一位高年資超聲醫師完成。

1.1.2 病例的篩選 研究納入32例病例，其中男性20例，女性12例，年齡23～75歲。納入標準:①年齡18～75歲; ②無相關伴發疾病(腎內科疾病糖尿病等);③常規B超發現單側上尿路積水的征象;④對側腎正常(無上尿路梗阻且腎大小、形態及功能正常);⑤無急性腎絞痛的癥狀;⑥臨床主要癥狀可有:患側或雙側腰背部酸痛、憋脹;腹部憋脹、疼痛、腫塊;肉眼血尿;也可無任何臨床癥狀體檢偶然發現。

1.1.3 尿液的收集與保存 病腎腎盂尿為住院期間，經膀胱鏡輸尿管插管逆行造影檢查前留取。腎盂尿以1500g/min離心5min，取上清液，-80℃冰箱保存待檢。

1.2 檢查方法

1.2.1 B超 采用LOGIQ500型B超診斷儀檢查，檢查前需飲水使膀胱適度充盈。采用凸陣探頭，頻率為3.50～3.75MHz。仰臥位經腰部作冠狀切面:探頭在左或右側腰部腋后線作冠狀切面，找到腎臟聲像圖后，聲束向前和向后緩緩擺動，做多切面掃查，觀察整個腎臟，必要時掃查角度可作調整或沿肋間、肋下掃查，以避開肋骨干擾;俯臥位經背部縱切面和橫切面:探頭在腰背部縱行或橫行掃查找到聲像圖后，作左、右、上、下移動，必要時掃查線可15°向外傾斜調整，尋找腎長軸;側臥位探查:作側腰部冠狀切面掃查，背部縱切面和橫切面檢查，同時作經腹部縱切面和橫切面探測。

1.2.2 病腎腎盂尿MCP-1經ELISA法檢測 標準品及標本均設置有重復孔。

①實驗前準備好洗滌液和標準品;②加入100μL標準品或標本加到酶標板孔及重復孔中;混勻;封住板孔，室溫(20～25℃)孵育1h;③洗板;甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次;④加入100μL MCP-1conjugate，混勻;封住板孔，室溫(20～25℃)孵育1h;⑤洗板;甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次;⑥在第二次孵育結束之前15min，配置顯色底物;⑦連續洗板5次;⑧每孔加入100μL顯色底物，輕輕混勻30s，封住板孔，室溫(20～25℃)孵育20min;⑨每孔加入100μL終止液，輕輕混勻震蕩;⑩在30min內，使用450nm酶標儀檢測O.D.值

1.3 統計學處理

所有數據均采用均數±標準差(χ±s)表示。在不同分級組間先用單因素方差(One-Way ANOVA)分析，若差異有顯著性意義，則用q檢驗進行兩兩比較。相關分析采用兩變量間直線相關分析。所有數據輸入SPSS13.3版軟件進行統計學分析。以P<0.05，具有顯著性差異;P<0.01，有極顯著性差異。

2 結果

2.1 B超檢查

本研究患者中男20例，女12例，年齡23～75歲。所有患者在行膀胱鏡輸尿管插管檢查之前均行腹部B超。B超示:健腎大小、形態及功能正常。B超診斷重度腎積水4例，中度腎積水16例，輕度腎積水12例。其梗阻原因診斷24例為腎及輸尿管上段和下段結石，6例為腎盂輸尿管連接部狹窄，2例為腎腫瘤。

2.2 尿MCP-1的檢測

2.2.1 標本的MCP-1濃度 以標準品濃度為橫坐標(X)，檢測得到重復孔的O.D.均值扣除0值的O.D.均值后得到縱坐標(Y)，建立標準曲線(圖1)。根據標準曲線建立標準曲線方程，再將相應標本各重復孔OD均值輸入計算機軟件算出對應標本的MCP-1濃度。

2.2.2 病腎腎盂尿MCP-1水平的變化 32例病腎腎盂尿MCP-1水平的檢測見表1。在不同分級組間先用單因素方差(One-Way ANOVA)分析，P<0.0001，差異有顯著性意義。病腎腎盂尿MCP-1水平隨分級的增加而遞增，在各分級組間比較均有顯著性差異(P<0.01)。32例中分級與病腎腎盂尿MCP-1經Spearman秩次相關分析，病腎腎盂尿MCP-1水平與分級密切正相關，有顯著性差異(P<0.001)，相關系數r=0.906。

3 討論

3.1 評判指標

B超檢查:按腎實質厚度及集合系統分離程度分3度:①輕度腎積水:集合系統分離1.0～2.0cm，腎實質及腎外形正常，僅見腎竇部出現窄帶狀或扁卵圓形無回聲區，腎盂輪廓飽滿，腎小盞輕度擴張，腎錐體頂端變平;②中度腎積水:集合系統分離2.1～3.5cm，腎竇區顯示手套狀或煙斗狀無回聲區，腎小盞的終末端和腎錐體頂端輪廓均變平坦，腎外形和腎內其余結構無明顯改變;③重度腎積水:集合系統分離在3.6cm以上，腎體積明顯增大，腎皮質變薄甚至完全萎縮，腎竇區囊性擴張。腎實質不同程度萎縮為重度積水的特征。

3.2 超聲檢查的優缺點

B超是泌尿系統的常用檢查方法之一，它具有無創性、無輻射、操作簡便易行、定位準確、迅速可靠等優點，主要是對腎積水進行形態學損害的檢測。

B超反映的是組織器官以及病灶的聲阻抗的差異，它不能提供功能上的評價;且存在假陽性(由于脂肪過多或含氣以及骨骼發生反射、非梗阻性腎盂擴張)和假陰性(間歇腎積水)，因而積水的多少及是否顯影并不完全與病腎損害程度一致;同時它對病灶的病理性質缺乏特異性;因此，在臨床上診斷梗阻性腎積水時還必須密切結合臨床癥狀和其他影像學資料。此外，儀器設備的配置及性能、檢查醫師的操作及臨床經驗都會不同程度的影響診斷結果[2]。

3.3 MCP-1對梗阻性積水腎臟功能的評估價值

單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)是20世紀80年代初從兔肺泡巨噬細胞中發現的，是單核-巨噬細胞(MO/M￠)的特異性趨化因子，具有調理作用，是富含精氨酸和半胱氨酸的單鏈肽，屬于趨化因子C-C亞族中的β亞族[3]。

1995年Diamond等對鼠的單側輸尿管結扎致輸尿管完全梗阻(UUO)的模型研究表明，MCP-1主要通過引起腎間質纖維化，從而導致病腎腎功能的損害。鼠UUO的模型是以腎小管萎縮、間質纖維化及巨噬細胞浸潤為其特征性表現的。為明確UUO中巨噬細胞的浸潤與MCP-1及MCP-1受體(CCR2)mRNA間有何聯系?2001年Vielhauer等對鼠UUO的模型研究發現，病腎組織中不僅MCP-1明顯升高，而且CCR2mRNA的表達也顯著上調，并定位于單核-巨噬細胞。同時，研究也表明病腎組織MCP-1與CCR2mRNA顯著正相關。為了讓鼠UUO的模型與人體先天性腎積水的病理生理更接近，以便于應用MCP-1評價病腎的損害程度。2002年Stephan等對鼠UUO的模型實施了改進，同時，檢測了腎盂尿MCP-1在不同分級中的變化，研究表明尿MCP-1的含量也隨分級的增加而遞增，也有極顯著性差異。

但動物實驗是對人為梗阻后短期時間內腎臟形態及功能改變的研究，而人的梗阻性積水腎卻是一個長期復雜、多因素參與的慢性腎功能損害過程。近年來國內外許多學者研究發現MCP-1在多種腎臟疾病中都有所表達[4-7]，并通過不同方式參與病腎的損害[8，9]。腎積水病腎組織內充滿了大量具有免疫活性的單核-巨噬細胞，并通過特異性趨化因子-單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)而被激活。MCP-1可介導IL-6、細胞黏附分子等炎癥因子的過度表達，且在腎臟病理損傷及纖維化中均具有重要作用，是腎病進行性發展的關鍵因子。腎固有細胞及浸潤炎性細胞均可表達MCP-1，并可隨尿排出，尿MCP-1可成為腎臟疾病病情監測指標[10]。

因此本文應用酶聯免疫吸附實驗(ELISA法)檢測患者病腎腎盂尿MCP-1水平并結合B超檢測分級來評定梗阻性積水腎臟功能。其檢測結果與B超對腎積水程度的分級作相關分析。結果顯示:病腎腎盂尿MCP-1水平隨分級的增加而遞增，并在各分級組間比較均有顯著性差異(P<0.01)。經Spearman秩次相關分析，病腎腎盂尿MCP-1水平與分級密切正相關，有顯著性差異(P<0.001)。因此，病腎腎盂尿MCP-1的檢測對梗阻性積水腎臟功能損害程度有較好的評估價值。

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(收稿日期:2009-09-28)